王筝
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用
- 2016年
- 目的构建miR-181b慢病毒过表达载体,探讨其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用。方法分别构建p SicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1过表达载体,转染HEK-293T细胞后,用实时荧光定量PCR(RTq PCR)法检测MAPK1 mRNA的表达、用Western blot检测MAPK1蛋白的表达及用双荧光素酶报告基因活性验证miR-181b与MAPK1的靶向调控关系。结果成功构建了p SicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1重组质粒,miR-181b过表达明显抑制HEK-293T细胞MAPK1蛋白及mRNA表达水平(P<0.05),抑制miR-181b的表达后,MAPK1的蛋白及mRNA的表达水平上调(P<0.05)。结论成功构建p SicoR-miR-181b慢病毒载体,并证实通过靶向作用MAPK1-3'UTR的特异序列直接抑制MAPK1基因的表达。
- 王筝邢译文朱凤英王静波
- 关键词：MICRORNA慢病毒
- CD74基因表达对急性髓系白血病细胞增殖与侵袭的抑制作用被引量：1
- 2023年
- 目的:探讨白细胞分化抗原74(CD74)基因表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、侵袭及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法:收集83例AML患者的骨髓样本(AML组)、25例正常供者的骨髓样本(对照组)及人AML细胞系HL60、MOLM-13、THP-1、U-937、人原代正常骨髓单个核细胞(BMMC)为研究对象,Western blot检测AML骨髓样本及各细胞系中CD74蛋白表达;利用Lipofectamine ^(TM) 2000转染试剂盒对MOLM-13细胞进行转染,并分为空白组(细胞不进行转染)、si-NC组(将si-NC转染于细胞)、si-CD74组(将si-CD74转染于细胞);Western blot检测各组细胞中CD74、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及MIF/ERK信号通路相关蛋白MIF、磷酸化细胞外信号调控蛋白激酶(p-ERK)、ERK表达水平;CCK-8法检测各组MOLM-13细胞在0、24、48、72 h的增殖情况;Transwell实验检测各组MOLM-13细胞侵袭情况。结果:与对照组比较,AML组骨髓细胞中CD74蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CD74蛋白在HL60、MOLM-13、THP-1、U-937细胞系中均高表达,且在MOLM-13细胞系中表达量最高。与空白组和si-NC组比较,si-CD74组MOLM-13细胞的OD450值(在24、48、72 h时)、细胞侵袭数目、CD74、MMP-9、MIF和p-ERK蛋白表达显著降低(P均<0.05),但空白组与si-NC组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:干扰AML细胞中CD74表达,可抑制细胞增殖与侵袭,其作用机制可能与抑制MIF/ERK信号通路有关。
- 王筝王静波李静静万春超张岚
- 关键词：急性髓系白血病细胞侵袭
- LncRNA XIST负调控miR-196b对急性髓系白血病细胞KG1a生物行为的影响
- 2022年
- 目的:探讨lncRNA X染色体失活特异性转录因子(XIST)对急性髓系白血病细胞KG1a增殖和凋亡的影响及其相关作用机制。方法:收集北京航天中心医院2017年1月至2019年5月收治的41例急性髓系白血病患者,以及20例符合缺铁性贫血国际标准的患者作为对照组。将KG1a细胞分为pcDNA、pcDNA-XIST、pcDNA-XIST+miR-NC和pcDNA-XIST+miR-196b共4组。实时荧光定量PCR检测XIST和miR-196b表达水平,CCK-8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测cleaved-caspase3、pro-caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测XIST和miR-196b的靶向关系。结果:急性髓系白血病组患者骨髓细胞中lncRNA XIST表达水平明显低于缺铁性贫血组(P<0.001)。KG1a细胞pcDNA-XIST组lncRNA XIST表达水平、G_(0)/G_(1)期细胞所占比例、细胞凋亡率及cleaved-caspase3和Bax的表达水平较pcDNA组均明显升高(均P<0.001),而miR-196b表达水平、细胞活性、S期细胞比例、pro-caspase3和Bcl-2表达水平均明显降低(均P<0.001)。pcDNA-XIST+miR-196b组细胞活性、S期细胞所占比例、pro-caspase3和Bcl-2表达水平较pcDNA-XIST组均明显升高(均P<0.001),而G_(0)/G_(1)期细胞所占比例、细胞凋亡率、cleaved-caspase3和Bax表达水平均明显降低(均P<0.001)。结论:过表达lncRNA XIST通过下调miR-196b表达抑制急性髓系白血病细胞KG1a增殖,促进细胞凋亡。
- 王筝马杏凡万春超张岚王静波
- 关键词：急性髓系白血病
