李修远
- 作品数：11 被引量：82H指数：6
- 供职机构：首都医科大学附属北京同仁医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生兵器科学与技术理学更多>>
- 丝状真菌质谱鉴定前处理方法及应用被引量：13
- 2017年
- 目的 建立并评价实验室自行研发的丝状真菌质谱鉴定前处理方法的可行性.方法复苏2014年1月至2016年12月北京同仁医院菌库中380株丝状真菌菌株,沙保弱葡萄糖琼脂平板（SDA）28 ℃培养至成熟状态,同时使用Bruker仪器推荐的垂直旋转法培养和本实验室研发的＂水平震荡法＂培养至足量菌落.3种方法培养菌株均采用＂改良磁珠提取法＂提取蛋白行质谱鉴定.结果380株真菌菌株,使用SDA培养时间需要3~10 d,鉴定到种和属的比率分别是47%和81%;使用Bruker仪器推荐方法培养时间需要5~7 d,鉴定到种和属的比率分别是76%和94%;＂水平震荡法＂培养时间只需1~2 d,鉴定到种和属的比率分别是96%和99%.＂水平震荡法＂和SDA培养法比较,差异有统计学意义（χ2=39.026,P〈0.01）,和仪器推荐的方法比较,差异有统计学意义（χ2=11.310,P〈0.01）.结论 本实验室研发的＂水平震荡法＂和＂改良磁珠提取法＂优于仪器推荐的方法和SDA培养鉴定方法,可以应用到临床.
- 黄艳飞常峥白婕朱敏张明新王玫张桂李修远童贻刚王景林鲁辛辛
- 关键词：真菌
- 高效但并非完美--基于直接点靶法的MALDI-TOF MS在不动杆菌鉴定中的应用
- 李修远汤燕燕王爽鲁辛辛
- “中国病原分枝杆菌质谱数据库”构建及验证被引量：3
- 2018年
- 目的构建国产基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI－TOF MS）仪的病原分枝杆菌鉴定数据库，评价其鉴定准确性并与国外同类产品比较。方法＂中国病原分枝杆菌质谱数据库＂的构建：收集分枝杆菌国际标准菌株19种、19株及＂资源化＂分枝杆菌临床分离株42种、183株；采用改良研磨－超声裂解法提取菌体蛋白。以国产MALDI－TOF MS仪（microTyper MS）为基础进行谱图采集及数据库构建，每株菌提取物平行滴加于12个靶点，每个靶点采集2次，得到24张质谱图；后按标准精选20张优质谱图，设置最大出峰数目、最小出峰频率及质量容差，经分析软件生成主谱图（MSP）。数据库验证：收集不同地区来源分枝杆菌305株，以16S rRNA基因、hsp65及rpoB测序为金标准，比较以本数据库为基础的microTyper MS与以Mycobacteria Library 3.0数据库为基础的进口MALDI－TOF MS仪（MALDI－TOF MS Microflex）鉴定分枝杆菌的准确性及谱图特征。结果构建的＂中国病原分枝杆菌质谱数据库＂容量为42种、202株，平均每种纳入菌株4.8株，排在前10位的是堪萨斯分枝杆菌16株、胞内分枝杆菌16株、戈登分枝杆菌16株、偶发分枝杆菌16株、鸟分枝杆菌16株、脓肿分枝杆菌16株、结核分枝杆菌15株、马赛分枝杆菌11株、阿罗普研院分枝杆菌10株及yongongens分枝杆菌2株；305株验证菌株经测序确认为29种；基于本数据库，种水平鉴定准确率为99.67%（304/305），高于MALDI－TOF MS Microflex（97.38%，297/305），差异有统计学意义（χ2＝4.06，P〈0.05）。结论构建的＂中国病原分枝杆菌质谱数据库＂质量达到临床常规应用要求，就国内流行株而言，鉴定准确率优于国外同类产品。（中华检验医学杂志，2018, 41：519－526）
- 杨本善李修远刘东鑫李亚楠王玫赵雁林鲁辛辛
- 关键词：数据库
- MALDI-TOF MS微生物鉴定的室内质量控制体系建立被引量：17
- 2018年
- 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDITOF MS)具有快速、准确、低成本、操作简单的特点,是临床微生物鉴定的首选技术之一。MALDI-TOF MS的准确鉴定依赖于良好的仪器状态、有效的菌株蛋白质抽提及规范的操作与结果判读原则,任一环节的失误均直接影响鉴定结果的准确性。因此,严格的室内质量控制对MALDI-TOF MS微生物鉴定至关重要。该实验室根据6年的应用经验及研究,建立了一套较为完整的MALDI-TOF MS微生物鉴定室内质量控制体系,覆盖硬件、软件及人工操作各个环节,内容包括仪器参数设置、维护与校准,菌株与试剂的准备以及谱图采集与结果判读分析,使鉴定结果异常时可迅速溯源并及时处理。
- 李修远李亚楠鲁辛辛
- 关键词：微生物鉴定
- 感染性腹泻患者病原菌流行趋势及耐药性分析被引量：15
- 2018年
- 目的了解感染性腹泻患者常见病原菌的流行趋势及耐药性,为临床治疗提供科学依据。方法对2012年4月1日-2017年10月31日本院肠道门诊12 156例感染性腹泻患者粪便标本进行增菌及分离培养,用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定/药敏分析系统和基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行菌种鉴定,凝集试验进行血清分型,K-B纸片扩散法测定6种抗菌药物敏感性。结果 12 156份标本共培养出病原菌1 218株,致病菌总检出率为10.02%,其中弧菌属7.62%(926/12 156)、气单胞菌属0.79%(96/12 156)、沙门菌属1.46%(178/12 156)、志贺菌属0.15%(18/12 156)。2012-2017年致病菌年检出率分别为9.2%、11.9%、13.4%、7.0%、11.3%和7.2%。志贺菌属检出率维持较低水平,但其对氨苄西林、复方磺胺甲噁唑存在较高耐药现象。其余病原菌除对氨苄西林耐药率较高外,对其余5种抗菌药物均保持较高的敏感性。结论本院感染性腹泻患者的病原菌主要为弧菌属,耐药性最高的为志贺菌属,整体感染呈散发态势,应加强对感染性腹泻患者病原菌及耐药性的检测。
- 黄艳飞李修远顾海彤孙宇峰鲁辛辛
- 关键词：感染性腹泻病原菌耐药性
- 感染性疾病个性化实验室诊断时代的到来：质谱技术的深入开发与临床应用被引量：6
- 2017年
- 感染性疾病的精准诊疗关乎患者生命，其中快速、高效、准确且全面的实验室检测扮演了重要角色。质谱技术的出现，在临床实验室生物大分子检测中掀起了一场革命。而对于感染性疾病实验室诊断的贡献，则以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）最为突出。若对MALDI-TOF MS的原理及微生物专业知识了解足够全面，不但能够发现一些容易忽视的细节，更能对其进行深入开发、拓展应用，使之锦上添花。另一方面囊括MALDI-TOF MS、液相色谱-质谱（LC-MS）及气相色谱-质谱（GC-MS）的全息质谱也就成为了临床实验室的终极理想。多种质谱技术的整合形成优势互补，应用范围更广泛，不仅可以精确诊断病原微生物，还可实现感染相关致病标志物、代谢产物的检测，以获得病原体及宿主双向的信息，使得感染性疾病的实验室诊断更为全面、精准、个性化。全息质谱的应用使感染性疾病的诊断突破传统方法，在体现快速准确的同时，反映了科学技术水平与研究能力的提升。
- 李修远李雪鲁辛辛
- 关键词：质谱分析法临床实验室技术个体化医学
- 分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS快速直接鉴定法的建立与评价被引量：6
- 2016年
- 目的建立并评价分枝杆菌液体培养基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接鉴定技术。方法收集2014年6月至2016年5月首都医科大学附属北京同仁医院1 466例呼吸科住院患者痰标本,进行BactecTMMGITTM960分枝杆菌快速液体培养(简称液体培养),以其中报警并经萋-尼抗酸染色确认为抗酸杆菌的105例(无重复病例)为研究对象,对比本实验室自行设计并改良的"同仁"分枝杆菌液体培养直接鉴定法(培养液经特殊前处理后直接进行MALDI-TOF MS鉴定)及传统鉴定法(培养液转种于L-J固体培养基,得到菌落后再进行MALDI-TOF MS鉴定),并通过16S rRNA基因及16S^23S rRNA基因间隔区测序验证。结果以基因测序鉴定为金标准,液体培养直接鉴定与传统鉴定法结果一致率为100%;二者鉴定至属的准确率均为100%(105/105),鉴定至种的准确率均为99.05%(104/105)。液体培养后直接鉴定与传统鉴定法MALDI-TOF MS鉴定分值≥2.000分的比例差异无统计学意义(χ~2=2.952,P=0.086)。4例分值<1.700分的菌株谱图杂峰较多而有效峰较少。结论本实验室自行设计的"同仁"分枝杆菌液体培养MALDI-TOF MS直接鉴定法鉴定结果准确,缩短了分枝杆菌培养和鉴定的时间,且可保证生物安全,对分枝杆菌感染的快速诊断和及时治疗意义重大,适用于我国各级临床实验室。
- 杨本善李修远董国伟张韶娅李雪汤燕燕王丽赟黄艳飞王玫鲁辛辛
- 关键词：结核分枝杆菌非结核分枝杆菌
- 高效但并非完美--基于直接点靶法的MALDI-TOF MS在不动杆菌鉴定中的应用
- 李修远汤燕燕王爽鲁辛辛
- MALDI-TOF MS在临床微生物鉴定中的常见问题及对策被引量：19
- 2016年
- 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDITOF MS)是目前临床实验室中应用最为广泛的质谱技术之一。然而,MALDI-TOF MS微生物鉴定的上机前准备、检测分析及结果判读等方面均易出现各种问题,严重时会影响鉴定结果。经文献查阅及实验室长期经验总结、验证,该文对目前MALDITOF MS鉴定中存在的问题进行分析,并提出相应对策。
- 李修远黄艳飞尚军鲁辛辛
- 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱前处理
- 优化差速离心法在血培养报警瓶MALDI-TOF MS细菌鉴定中的应用被引量：11
- 2016年
- 目的评价用于血培养报警瓶基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorptionionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）细菌直接鉴定的前处理方法。方法建立优化差速离心法流程。收集首都医科大学附属北京同仁医院2015年10月至12月外周血培养报警标本100例（均为单一菌）,以转种培养后菌落MALDI-TOF MS鉴定为金标准,对比差速离心法优化前后、BRUKER SEPSITYPER试剂盒（简称试剂盒法）鉴定结果,评价优化差速离心法的准确率。收集2016年1月至10月外周血及体液培养报警标本516例（经革兰染色确认为细菌）,对优化差速离心法进行大样本应用研究。结果优化的差速离心法、试剂盒法及优化前的差速离心法鉴定准确率分别为97%、94%及92%,差异无统计学意义;优化的差速离心法鉴定分值〉2.0的例数则多于其他两种方法,与优化前相比差异具有统计学意义（χ~2=3.916,P=0.048）。516例样本单一菌486例,混合菌30例。优化的差速离心法鉴定准确率为92.2%（476/516）。外周血及其他体液样本鉴定准确率分别为96.5%（179/289）、86.8%（197/227）,差异有统计学意义（χ~2=16.92,P〈0.01）。单一菌鉴定准确率为97.1%（472/486）,其中革兰阳性球菌和阴性杆菌分别为96.9%、99.1%,均明显高于阳性杆菌（55.6%）,差异有统计学意义（χ~2=25.329,P〈0.01;χ~2=48.526,P〈0.01）。混合菌鉴定准确率为13.3%（4/30）。体液样本混合菌比例为11%（25/227）,显著高于外周血[1.7%（5/289）,χ~2=20.008,P〈0.01]。结论优化差速离心法鉴定率高、成本低、易操作,优于试剂盒法,对单一细菌MALDI-TOF MS血培养报警直接鉴定更具临床应用价值。
- 尚军李修远王丽赟汤燕燕李雪张韶娅黄艳飞王玫张明新张桂孙宇峰顾海彤田小波鲁辛辛
- 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
