王颖
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：成都医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅重点项目国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同方法对苦瓜核糖体失活蛋白的PEG化学修饰后蛋白浓度测定的差异
- 2016年
- 目的探究PEG化学修饰对4种常用蛋白浓度测定方法的影响。方法采用福林-酚试剂法（Lowry法）、二喹啉甲酸法（BCA法）、考马斯亮蓝法（Bradford法）和紫外分光光度法（UV法）分别测定样品中α-苦瓜素和抗人类免疫缺陷病毒植物蛋白MAP30经PEG修饰前、后的蛋白含量;并用Lowry法和BCA法对低浓度游离PEG修饰前、后的样品蛋白含量进行测定。结果发现考马斯亮蓝不与样品发生颜色反应,PEG修饰后会使UV法测定值变大,Lowry法测定值略有变大,BCA法基本不受影响;低浓度的游离PEG对测定方法无影响,但高浓度的PEG会吸附Folin-酚,形成黄色絮状物。结论 PEG化学修饰对蛋白浓度测定方法影响最小的为BCA法,Lowry法最灵敏,Bradford法不适用;而PEG化学修饰会使UV法测定值增大20%~30%,可作为快速测定时的校准参考。
- 李丹肖雪钟春燕王颖何夏燕王复林金家贵孟尧
- 关键词：核糖体失活蛋白
- 带His标签重组产朊假丝酵母尿酸酶的表达、纯化与部分酶学性质研究被引量：1
- 2018年
- 目的研究重组产朊假丝酵母尿酸酶的高效表达条件、分离纯化和部分酶学性质。方法选择在菌体对数生长末期加入诱导剂,通过摇瓶培养对异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)和乳糖诱导产酶的效果进行比较;利用50 L发酵罐研究诱导培养时间;通过Ni-琼脂糖凝胶柱亲和层析、Sephacryl S-200 HR层析纯化目的蛋白并研究其最适pH值和酸碱稳定性、最适温度及热稳定性。结果摇瓶培养结果显示乳糖诱导效果优于IPTG。发酵罐培养工程菌,在对数生长末期添加乳糖诱导7 h后酶活力和生物量均达到最大值,分别为164 U/g菌体和23 g菌体/L发酵液,即每升发酵液含酶活性3 772 U。纯化的尿酸酶比活性为4.5 U/mg,其最适pH值为7.5,最适温度40℃,酸碱稳定范围在pH值6.0~10.0,温度低于45℃时热稳定性较好。结论以乳糖作为诱导剂培养效果更佳;带有His标签的重组尿酸酶经Ni-琼脂糖凝胶柱亲和层析和Sephacryl S-200HR分子层析后即可获得纯品,纯化流程更为简单;该纯化酶的最适反应温度、最适pH值、酸碱稳定性和热稳定性的确定为其结构与功能的关系以及未来的实际应用提供了一定的实验依据。
- 王颖肖雪李丹钟春燕范翔李刚锐孟尧
- 关键词：尿酸酶产朊假丝酵母
