陆静
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：遵义医药高等专科学校更多>>
- 发文基金：贵州省教育厅自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高盐刺激可诱导巨噬细胞极化从而促进肾脏成纤维细胞的增殖及表型转化被引量：2
- 2020年
- 目的探讨高盐诱导单核巨噬细胞极化,以及极化后巨噬细胞对肾脏纤维细胞株(NRK-49F)增殖及表型转化的影响。方法培养大鼠骨髓单核巨噬细胞及NRK-49F,随后予以高盐(Na+161 mmol/L)刺激单核巨噬细胞2 h。采用RT-qPCR检测M0、M1、M2各型巨噬细胞表面标记物,同时分别收集正常及高盐组巨噬细胞培养基,予以RT-qPCR及Elisa分别检测培养基中IL-6及TGF-β的mRNA表达与蛋白表达。随后建立巨噬细胞与NRK-49F的Transwell小室共培养体系。采用EdU及Transwell分别检测NRK-49F增殖及迁移能力。予以Western blot检测NRK-49F中collagen I、collagen III及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达情况。结果RT-qPCR结果显示,与对照组相比,高盐组细胞中表达M2型巨噬细胞表面标记物甘露糖受体(MR)和精氨酸酶(Arg)基因的mRNA水平显著升高(P<0.05)。EdU及Transwell结果显示,共培养体系中,高盐处理巨噬细胞组上层NRK-49F增殖、迁移能力增强(P<0.05)。Western blot结果显示,高盐处理组细胞培养基可诱导NRK-49F中collagen I、collagen III及和α-SMA蛋白表达增强(P<0.05)。此外,RT-qPCR及Elisa结果显示高盐处理组单核巨噬细胞培养基中IL-6与TGF-β1均显著高表达(P<0.05)。结论高盐处理可诱导单核巨噬细胞像M2型极化并分泌IL-6与TGF-β1,从而诱导NRK-49F增殖及表型转化。
- 陆静白志勋匡晓燕李玲
- 关键词：高盐巨噬细胞细胞增殖表型转化
- TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用被引量：4
- 2019年
- 目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1(TGF-β1/ILK/FSP1)信号通路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组:细胞培养液加环孢素A 1 mg/L;TGF-β1干预组:阻断剂(SB431542)10μmol/L加环孢素A 1 mg/L;ILK干预组:阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L;阴性对照组:阴性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表达量均显著增加(P<0.05);TGF-β1干预组经SB431542处理后,TGF-β1、ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05);经ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05)。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较环孢素诱导组降低(P<0.05)。结论 TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。
- 白志勋陆静杨亦彬
- 关键词：上皮细胞转分化转化生长因子-Β1整合素连接激酶
- 大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的构建大鼠整合素连接激酶-RNAi（ILK-RNAi）慢病毒表达载体,为下一步干预研究细胞转分化及其信号通路奠定基础。方法针对大鼠ILK基因RNAi有效靶序列,合成4条干扰（KD）序列。与pGCSIL-GFP载体连接产生shILK-RNAi慢病毒载体。将连接产物转入制备完毕的细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性克隆,测序验证。包装慢病毒,以绿色荧光蛋白（GFP）表达水平验证病毒滴度。慢病毒载体感染大鼠NRK-52E细胞后,RTPCR、WB检测及荧光显微镜观察ILK在其细胞中的表达。结果测序验证成功构建3条大鼠ILK-RNAi慢病毒载体,滴度分别为5×10^8,2.5×10^8,3.5×10^8 pfu/mL。分别以不同感染复数（MOI）感染NRK-52E细胞进行内源筛靶,荧光观察80%细胞的绿色荧光蛋白,RT-PCR、WB检测ILK的表达明显下降。相对于阴性对照序列,KD2,KD3在高MOI组中对ILK表达的敲减达到65%以上（P〈0.05）,为有效靶点。其中KD2及KD3的ILK 2-△△Ct值分别为0.337,0.217。KD2序列为对ILK的表达抑制最显著。结论成功构建大鼠ILK-RNAi慢病毒表达载体。
- 白志勋陆静杨亦彬
- 关键词：NRK-52E整合素连接激酶慢病毒载体
