陈鸿鹄
- 作品数：13 被引量：44H指数：4
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 阪崎克罗诺菌特异性适配子筛选研究被引量：1
- 2020年
- 目的通过SELEX(指数富集配基系统进化技术)筛选阪崎克罗诺菌特异性DNA适配子,为建立基于适配子技术的阪崎克罗诺菌快速检测方法奠定基础。方法在阪崎克罗诺菌比较基因组分析、蛋白亚细胞定位预测、蛋白跨膜区预测分析、基因mRNA表达量分析、基因克隆表达和蛋白纯化基础上,制备用于适配子筛选的靶蛋白。利用靶蛋白偶联羧基磁珠,筛选ssDNA适配子。并对适配子的靶蛋白结合亲和力和目标菌捕获特异性进行分析。结果适配子S1与靶蛋白结合亲和力较高,对阪崎克罗诺菌有较好捕获能力,捕获率最高为23.1%。对大肠埃希氏菌、沙门氏菌等非目标菌不具有明显的捕获能力,具有较好的阪崎克罗诺菌捕获特异性。结论适配子S1和S2的二级结构以茎环结构和发夹结构为主。
- 张云怡梅玲玲占利陈鸿鹄张俊彦陈建才张政
- 关键词：适配子
- EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究被引量：7
- 2017年
- 目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。
- 张俊彦梅玲玲徐昌平占利陈鸿鹄张云怡陈建才张政杨勇
- 关键词：单增李斯特菌活菌
- 食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究被引量：3
- 2016年
- 目的利用叠氮溴乙锭（ethidium monoazide bromide,EMA）实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值（Ct）=32.10~3.19×log（菌量）（R2=0.994）。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均〉35或无Ct值（呈一条直线）。重复试验Ct值变异系数〈3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。
- 梅玲玲徐昌平杨勇占利陈鸿鹄张云怡张俊彦陈建才程苏云
- 关键词：食品志贺菌实时荧光PCR
- 副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究
- 目的建立一种快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增(RPA)方法。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价...
- 占利徐昌平张云怡陈鸿鹄张政陈建才张俊彦梅玲玲
- 副溶血性弧菌实时重组酶聚合酶扩增检测技术研究被引量：6
- 2019年
- 目的建立快速检测副溶血性弧菌的实时重组酶聚合酶扩增技术(RPA)。方法根据副溶血性弧菌tlh基因保守序列设计筛选引物及探针,建立检测副溶血性弧菌的实时RPA方法。通过检测不同浓度副溶血性弧菌标准株DNA模板评价方法灵敏度,通过检测不同种属弧菌及其他细菌标准株评价方法特异度,通过重复试验评价方法稳定性,通过实样检测评价方法应用效果。结果建立的实时RPA方法在39℃恒温下20min内完成副溶血性弧菌扩增,最低检测限为5pg/反应,与其他致病菌无交叉反应,不同浓度的副溶血性弧菌DNA模板和大肠杆菌DNA模板隔日3次实时RPA检测结果一致,实时RPA对51份鲜活/冰鲜鱼、虾、贝、蟹类样品的检测结果与GB4789.7—2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》检测结果一致。结论建立的实时RPA方法可定性检测副溶血性弧菌,且实验操作及结果判读简单,适用于突发公共卫生事件、食品安全监管中的副溶血性弧菌快速检测。
- 占利徐昌平张云怡陈鸿鹄张政陈建才张俊彦梅玲玲
- 关键词：副溶血性弧菌
- O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的建立副溶血性弧菌O3∶K6血清型三重PCR检测方法。方法基于副溶血性弧菌种特异性基因toxR,O3血清群特异性基因vp0209,K6血清型特异性基因vp0230,建立O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法。对该方法的检测特异性和灵敏度进行分析。结果与结论该方法对O3∶K6血清型副溶血性弧菌具有很好的检测特异性,灵敏度可以达到102 CFU/PCR反应体系。
- 张云怡梅玲玲张俊彦占利陈建才陈鸿鹄张政杨勇
- 关键词：副溶血性弧菌三重PCR
- 一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用
- 本发明公开了一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用，该试剂盒包含PCR反应试剂、叠氮溴乙锭、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒能区别食品中死的志贺氏菌，并且特异性高、灵敏度高；整个检测过程不超过2h，特别适合食品中...
- 梅玲玲徐昌平占利张云怡陈鸿鹄杨勇张俊彦陈建才张政
- 文献传递
- 2014年浙江省淡水动物性水产品中致病性弧菌污染来源分析被引量：18
- 2018年
- 目的了解淡水动物性水产品养殖、销售、加工过程中弧菌的污染来源。方法在副溶血性弧菌感染高发的第二季度和第三季度,从不同的淡水动物性水产品养殖场所、销售场所、餐饮场所采取淡水鱼、水体和水底沉积物样本;采用弧菌显色法进行致病性弧菌定量检测;并完成副溶血性弧菌分离株血清型和toxR、tdh和trh基因的检测。结果副溶血性弧菌在淡水动物性水产品中的污染与场所密切相关;副溶血性弧菌分离株的血清型以O1/O2/O3/O5为主,69株副溶血性弧菌中检出3株O3∶K6血清型,4株表达tdh基因,1株表达trh基因。结论淡水产品中致病性弧菌的污染主要来源于销售加工环节。
- 陈鸿鹄张云怡占利张俊彦陈建才梅玲玲
- 关键词：淡水产品副溶血性弧菌污染来源
- GeXP多重PCR法同时检测5种致泻性大肠埃希菌被引量：1
- 2022年
- 目的基于GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立快速、同时检测5种致泻性大肠埃希菌的方法。方法根据肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的12种毒力基因的保守序列设计特异性引物,用单组引物分别进行PCR扩增,验证单模板单引物PCR的特异性。分别以5种致泻性大肠埃希菌基因组DNA为模板,每个体系中混合12种引物进行PCR扩增,验证单模板多重PCR的特异性。采用GeXP多重PCR分别扩增10~6、10~5、10~4、10~3CFU/mL的5种致泻性大肠埃希菌混合菌悬液DNA模板,分析该方法的灵敏度。用购自超市和农贸市场的食品制作34份加标样品,采用GeXP多重PCR鉴定5种致泻性大肠埃希菌,并与多重实时荧光PCR检测试剂盒检测结果比较。结果单模板单引物PCR产物中,12种毒力基因sth、pic、bfpB、astA、lt、escV、aggR、stx1、uidA、invE、stx2、stp扩增片段大小与设计相符,荧光信号值良好,均在25000 A.U.以上。GeXP单模板多重PCR体系中,5种致泻性大肠埃希菌的12种毒力基因PCR产物片段大小与设计相符,特异性良好。菌液浓度为10~3CFU/mL时,GeXP多重PCR可同时检测出12种毒力基因,荧光信号强度良好,重复检测结果相同,变异系数<10%。采用GeXP多重PCR检测34份加标样品,检出ETEC 3株,EAEC 12株,EIEC、EPEC和EHEC各1株,与商品化的5种致泻性大肠埃希菌多重实时荧光PCR检测结果一致。结论本研究建立了一种同时检测5种致泻性大肠埃希菌12种毒力基因的GeXP多重PCR方法,可用于致泻性大肠埃希菌的临床鉴别诊断及流行病学调查研究。
- 陈建才陈鸿鹄张云怡张俊彦张政潘军航占利
- 关键词：致泻性大肠埃希菌毒力基因多重PCR
- 单增李斯特菌动物源性食品分离株对苯扎氯铵的抗性及分子特征分析
- 2022年
- 目的了解不同血清型、ST型单增李斯特菌动物源性食品分离株对苯扎氯铵抗性及携带耐消毒剂基因情况。方法采用多重PCR结合血清凝集法对单增李斯特菌动物源性食品分离株进行血清分型,用多位点序列分型(MLST)技术进行分子分型,用平板法检测苯扎氯铵对单增李斯特菌的最小抑菌浓度(MIC),使用PCR检测其耐消毒剂相关基因qacH、bcrABC、MdrL、emrE。结果58株单增李斯特菌动物源性食品分离株包含4种血清分型,以1/2a血清型为主;可分为2个谱系,10个克隆群(CC),ST9、ST8、ST87为主要序列型;8株菌株的苯扎氯铵MIC为15μg/mL,其中6株为1/2a血清型,5株序列型为ST8。48株菌株的苯扎氯铵MIC为10μg/mL。75.86%菌株携带MdrL基因,1.72%菌株携带qacH基因。未检出耐消毒剂基因bcrABC、emrE。结论单增李斯特菌动物源性食品分离株对苯扎氯铵的敏感性下降,其中血清型1/2a、序列型ST8的单增李斯特菌对苯扎氯铵的MIC值更高。
- 陈建才张政张俊彦张云怡陈鸿鹄占利
- 关键词：单增李斯特菌苯扎氯铵抗性多位点序列分型
