徐敏
- 作品数：9 被引量：30H指数：3
- 供职机构：贵州大学更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅重大专项国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学政治法律经济管理更多>>
- 从江香猪PDK4基因干扰载体的构建与检测被引量：5
- 2018年
- 为了进一步揭示PDK4基因在猪肌内前体脂肪细胞中的调控作用,本试验采集5日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶进行消化,分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养及形态学观察;根据克隆得到的PDK4基因序列,利用在线软件设计合成3对特异性单链siRNA序列和1对阴性对照序列,经退火后形成双链,连接pLVX-shRNA2-Puro载体,重组质粒采用双酶切及测序进行验证。针对干扰载体转染培养的从江香猪肌内前体脂肪细胞,采用实时荧光定量PCR方法筛选出最有效的干扰序列。结果显示,原代从江香猪肌内前体脂肪细胞约4h开始贴壁,24h后细胞形态均一,贴壁牢固,第5天汇合呈单层细胞,基本铺满培养板;重组质粒经双酶切及测序鉴定结果显示,设计合成的4对siRNA干扰序列与载体质粒均连接正确,表明成功构建了PDK4基因的干扰载体,并可成功转染猪肌内前体脂肪细胞;实时荧光定量PCR方法检测发现,干扰载体可有效减少从江香猪肌内脂肪前体脂肪细胞中PDK4基因mRNA的表达,最佳干扰效率可达81.90%。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,构建并得到了PDK4基因的最佳干扰载体,为进一步研究PDK4基因对脂肪代谢的调控机制奠定基础。
- 杨洋杨洋许厚强陈伟陈伟
- 关键词：从江香猪
- 贵州黑山羊LYRM1基因生物信息学及组织表达分析
- 2020年
- 采用RT-PCR的方法对贵州黑山羊LYRM1基因进行了克隆,并对该基因的编码区序列进行生物信息学分析,利用qRT-PCR的方法检测LYRM1基因在贵州黑山羊不同组织中mRNA的相对表达量以及在不同月龄的时序表达。结果:黑山羊LYRM1基因的编码区全长369 bp,编码122个氨基酸,编码蛋白分子质量为14.4 kDa,理论等电点为9.73,不稳定系数为49.48,为不稳定蛋白;与GenBank数据库中提供的山羊LYRM1基因的编码区序列匹配度为99%,存在2个碱基的突变,分别为第177位和242位;通过LYRM1基因系统进化树得知,黑山羊与牛的进化距离较近,与斑马鱼进化距离较远。qRT-PCR结果显示LYRM1基因在贵州黑山羊7个组织中均有表达,在脂肪组织的表达量最高,背最长肌中的表达量最低;时序表达结果表明,LYRM1基因在黑山羊脂肪组织的整体表达趋势为先增加再减少,6月龄的表达量最高,7日龄最低。本试验成功克隆了黑山羊LYRM1基因编码区并进行了生物信息学分析,且检测了其在黑山羊不同组织中的表达以及在脂肪组织中的时序表达,为深入研究LYRM1基因功能奠定基础。
- 杨洋陈浩林徐敏
- 关键词：黑山羊克隆QRT-PCR
- 贵州从江香猪PDK4、FGF10基因的克隆及组织表达分析被引量：11
- 2017年
- 试验旨在克隆获得PDK4、FGF10基因,并研究大白猪与从江香猪不同组织中PDK4、FGF10基因mRNA的表达差异。采用RT-PCR分别克隆从江香猪PDK4、FGF10基因并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术检测PDK4、FGF10基因在大白猪和从江香猪不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,从江香猪PDK4基因的编码区全长1 224bp,编码407个氨基酸;FGF10基因的编码区全长636bp,编码211个氨基酸。经BLAST软件进行同源性比对,发现从江香猪PDK4基因与羊、马、人的核苷酸序列同源性分别为93%、92%和91%;FGF10基因与羊、牛、人、鼠的核苷酸序列同源性分别为94%、93%、93%和90%。由PDK4基因系统进化树可知,从江香猪与牛、绵羊亲缘关系较近;由FGF10基因系统进化树可知,从江香猪与绵羊、牛、人、猕猴亲缘关系较近,与小鼠和鸡亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果显示,在从江香猪不同组织中,PDK4基因在肾脏中的表达量最高,在胃和脂肪中表达量较高,FGF10基因在胃中表达量最高,在肾脏和脂肪中表达量较高,两个基因在背最长肌中的表达量均最低;在大白猪的不同组织中,PDK4、FGF10基因在脂肪中的表达量均最高,PDK4基因在背最长肌中的表达量最低,而FGF10基因在心脏中表达量最低。本试验成功克隆了从江香猪PDK4、FGF10基因,并检测了其在大白猪与从江香猪不同组织中的表达,为进一步研究PDK4、FGF10基因在脂质代谢及脂肪沉积等方面的调控作用提供科学依据。
- 杨洋杨洋许厚强陈伟陈伟周迪徐敏孙成娟张青青赵焕平孙成娟
- 关键词：从江香猪实时荧光定量PCR
- MSTN基因在贵州地方黄牛不同组织中mRNA表达量的研究被引量：2
- 2018年
- 为了研究贵州地方黄牛不同组织中肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因mRNA的表达差异和表达规律,以4个品种贵州地方黄牛（关岭牛、思南牛、威宁牛和黎平牛）为试验动物,分别提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌的总RNA,设计MSTN实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因作为内参,应用实时定量PCR技术检测MSTN基因在4个品种黄牛不同组织中mRNA的相对表达量,同时利用MAS3. 0在线软件分析MSTN基因功能。结果显示：MSTN基因在4个贵州地方黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌中均有表达,在背最长肌中的表达量显著高于其他组织（P〈0. 05）,不同品种之间MSTN基因在部分组织中的表达存在差异,且所分析的通路与机体生长发育和转录调控存在关联。研究表明MSTN基因在背最长肌中的表达量最高,品种对于MSTN基因的表达影响不大,而在不同组织中的表达量存在差异。
- 杨涛许厚强陈伟周迪王圆圆张鸣杨洋徐敏
- 关键词：MSTN基因通路分析
- 从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达研究被引量：9
- 2018年
- 试验旨在探讨从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达。采集3日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养,并对其进行形态学观察。诱导培养后,利用油红O染色法对其进行鉴定。采用实时荧光定量PCR方法检测细胞诱导分化0、24、48、72和144h时脂肪相关基因丙酮酸脱氢酶激4(PDK4)、成纤维细胞生长因子10(FGF10)、脂联素(ADIPOQ)、脂肪酸合成酶(FAS)、脂蛋白脂酶(LPL)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、蛋白激酶B(AKT2)的表达,选择诱导0h作为对照组。结果显示,分离的肌内前体脂肪细胞5h开始贴壁,贴壁的细胞呈圆形,胞体透明,经传代后,细胞形态均一,经诱导培养后,油红染色呈红色。实时荧光定量PCR结果显示,PDK4、ADIPOQ、C/EBPα、FAS、FABP4和AKT2基因mRNA表达水平在诱导48h时均呈现较高表达,极显著高于其余各阶段(P<0.01);FGF10基因mRNA表达水平在诱导24和48h时均较高;LPL基因mRNA表达水平在诱导72h时极显著高于对照组(P<0.01),之后明显下降;PDK4、ADIPOQ和FGF10基因mRNA表达水平在诱导144h时均极显著低于对照组(P<0.01);C/EBPα基因mRNA表达水平在诱导144h时显著高于对照组(P<0.05);FAS基因mRNA表达水平在诱导144h时显著低于对照组(P<0.05);AKT2和LPL基因mRNA表达水平在诱导144h时与对照组差异不显著(P>0.05)。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测了不同诱导阶段脂肪相关基因的表达情况,为进一步研究从江香猪脂肪代谢和沉积提供参考依据。
- 徐敏许厚强许厚强陈伟
- 关键词：从江香猪实时荧光定量PCR
- 基于循环经济理念的生态城市建设研究
- 生态城市作为一种未来城市的理想模式，为人们提供了解决城市问题的可行方案，因此受到了各界的广泛关注。要建设生态城市就必须转变传统的“大量生产、大量消费、大量废弃”的经济模式，20世纪90年代，世界各国就可持续发展达成共识，...
- 徐敏
- 关键词：生态城市建设循环经济理念可持续发展产业结构
- 文献传递
- 企业破产清算中税收优先权研究
- 税收是国家财政收入的重要来源之一，可以更好的维护市场经济发展，维护政府的权威，保护人民的权益，推动中国经济、社会、文化全面发展。学术上对于企业破产清算中税收是否具有优先权存在不同的观点，不同国家在此问题也存在不同的立场，...
- 徐敏
- 关键词：破产法税收优先权
- 贵州黑山羊ADIPOQ基因组织表达分析及脂肪中表达规律研究被引量：3
- 2020年
- 本实验旨在探究ADIPOQ基因在贵州黑山羊不同组织中的表达谱和在不同月龄脂肪组织中的表达规律。采用qRT-PCR检测了贵州黑山羊8个组织样(心、肝、脾、肺、肾、胃、背最长肌和脂肪组织)及5个不同时期(1、3、6、9、12月龄)脂肪组织中ADIPOQ基因的表达量。结果表明:ADIPOQ基因在黑山羊8个组织中均有表达,其中在脂肪组织的表达量最高,肾脏中表达量最低;时序表达结果表明ADIPOQ基因总体表达趋势为先增加再减少,其中在6月龄表达量最高,在12月龄表达量最低。说明ADIPOQ基因对贵州黑山羊脂肪代谢具有一定的调控作用,或可作为研究黑山羊肉质品质的候选基因。
- 杨洋陈浩林徐敏倪锴
- 关键词：黑山羊脂肪代谢
