夏大云
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省医学重点人才培养基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二十二碳六烯酸通过磷脂酶C-三磷酸肌醇-钙离子途径激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道被引量：2
- 2016年
- 目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）的机制。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞；全细胞膜片钳实验技术记录正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流；膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录不同钙离子浓度条件下BK通道电流，并计算开放概率（NP1）；钙离子成像技术测定不同浓度DHA作用后及分别采用磷脂酶（CPLC）受体抑制剂和三磷酸肌醇（IR）受体抑制剂预孵育冠状动脉平滑肌细胞后细胞内钙离子浓度变化。结果1μmol／LDHA可激活BK通道；在刺激电位60mV，电极外液钙离子浓度为0、0．01、0．1、1、3、10、50和100μmol／L条件下，BK通道NP。分别为0．0027±0．0004、0．0060±0．0014、0．0972±0．0106、0．1379±0．0329、0．4687±0．1637、2．0971±0．3104和3．1204±0．2427（P〈0．05，n=4）。未加DHA时，细胞内钙离子浓度荧光信号比值（R值）为0．51±0．01；加入0．001和0．01μmol／LDHA后，R值分别为0．53±0．02和0．55±0．01，与未加DHA相比差异无统计学意义（P〉0．05，n／〉5）；当加入的DHA浓度为0．1、0．3、1、3、5和10μmol／L时，其R值分别为0．64±0．01、0．65±0．01、0．70±0．01、0．69±0．01、0．68±0．01和0．67±0．02，ECEn为（0．04±0．02）μmol／L，与未加DHA比较，差异有统计学意义（P〈0．05，nI〉4）。分别采用PLC受体抑制剂U73122和IR受体抑制剂2-APB预孵育冠状动脉平滑肌细胞，测定加入0．1μmol／LDHA后R值分别为0．52±0．01和0．49±0．02，低于未加抑制剂的R值（0．64±0．01，P〈0．05，n≥4）。结论DHA可通过PLC—IP，Ca^2＋途径增加正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度激活BK通道，从而扩张血管，对心血管系统有一定的保护作用。
- 孙曼青钱玲玲党时鹏吴莹汤徐季圆王湘芸夏大云王文柴强陆彤王如兴
- 关键词：冠状血管大电导钙激活钾通道
- n-3多不饱和脂肪酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用及其机制
- 2016年
- 目的探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFA）对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道（BK通道）激活作用及其机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术分别记录不同浓度二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）灌流后BK通道开放概率（NP0）。采用Western Blot和qRT-PCR分别测定未灌胃组和低、高剂量n-3 PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道α亚单位和β1亚单位基因及蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmoVL和刺激电压60mV条件下，EPA浓度为0、10、30、100、300和1000pmo/L时，BK通道NP0分别为0．0616±0．0938、0．1090±0．0957．0．1303±0．0964、0．2250±0．1804、0．3803±0．2472和0．4080±0．2705，呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）；而DHA浓度为0、0．01、0．1和1μmol/L时，BK通道NP0分别为0．1200±0．0086、0．1190±0．0734、0．1250±0．0921和0．2890±0．0616，NP。无明显增加（P〉0．05）；继续增加DHA的浓度，当DHA浓度为3、5、7．5和10μmol／L时，BK通道NP。分别为0．6326±0．0478、1．0980±0．0643、1．1587±0．0676和1．1640±0．0926呈浓度依赖性增加（P〈0．05，n=4）。BK通道仪亚单位蛋白表达分别为0．7929±0．1794、0．7760±0．0599和0．7905±0．0596（P〉0．05，n=24），β1亚单位蛋白表达分别为0．8971±0．2976、1．1407±0．1516和1．2392±0．2337（P〉0．05，n=24）。未灌胃组和低、高剂量n-3PUFA灌胃组大鼠冠状动脉平滑肌细胞上BK通道α亚单位基因表达分别为0．6403±0．2470、0．6301±0．2290和0．9217±0．0907（P〉0．05，n=24），B1亚单位基因表达分别为0．8531±0．3687、0．9919±0．2250和1．0865±0．3632（P〉0．05，n=24）。结论n-3PUFA并非通过影响BK通道亚单位表达增加BK通道激活，而是通过与BK通道作用后直接激活，从而扩张冠状动脉。
- 汤徐季圆钱玲玲党时鹏孙曼青王湘芸吴莹夏大云王文柴强王如兴
- 关键词：N-3多不饱和脂肪酸冠状动脉大电导钙激活钾通道单通道膜片钳
- 不同浓度二十二碳六烯酸对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活作用及其机制
- 2017年
- 目的:探讨不同浓度二十二碳六烯酸(DHA)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道(BK通道)的激活作用及其机制。方法:酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞。采用全细胞膜片钳实验技术记录在未孵育与孵育细胞色素P450环氧化酶抑制剂SKF525A并灌流不同浓度DHA条件下BK通道电流密度变化;采用单通道膜片钳实验技术记录灌流不同浓度DHA时BK单通道开放概率的变化。结果:0.01~1.00μmol/L(定义为低浓度)DHA激活BK通道的半效浓度(EC50)为(0.24±0.05)μmol/L,但经SKF525A孵育后激活作用消失;3.00~10.00μmol/L(定义为高浓度)DHA激活BK通道的EC50为(2.38±0.22)μmol/L,经SKF525A孵育后,激活作用仍存在,且EC50无明显变化。在电极外液钙离子浓度为1μmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00μmol/L时,BK通道开放概率分别为(0.095 2±0.009 5)、(0.093 9±0.012 6)、(0.098 6±0.016 9)、(0.099 5±0.014 7)、(0.097 5±0.010 4)和(0.102 3±0.020 6)(P>0.05,n=5),提示低浓度DHA不能激活BK单通道;继续增加DHA浓度,当浓度为3、10μmol/L时,BK单通道开放概率分别为(0.700 3±0.013 2)和(0.892 7±0.052 3)(P<0.05,n=5),提示高浓度DHA呈浓度依赖性激活BK单通道,EC50为(3.37±0.10)μmol/L。结论:不同浓度DHA激活BK通道的机制不同,低浓度DHA通过细胞色素P450环氧化酶途径激活BK通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合后直接激活。
- 夏大云钱玲玲郁志明孙曼青汤徐吴莹党时鹏季圆王湘芸柴强陆彤王如兴
- 关键词：二十二碳六烯酸冠状动脉平滑肌细胞膜片钳
- 大电导钙激活钾通道在缺血再灌注损伤中的作用及其机制被引量：2
- 2016年
- 缺血再灌注损伤（ischemia repeffusion injury，IRI）指经过一定时间缺血的组织器官再恢复血液灌注后其代谢、功能及结构的损伤反而加重，甚至出现不可逆性损伤的现象”一。IRI发生较为常见，在心肌梗死、脑梗死、肺和肾等移植手术后均可发生，因此研究IRI的病理生理及其发生机制具有重大临床意义。
- 夏大云钱玲玲王如兴
- 关键词：缺血再灌注损伤大电导钙激活钾通道血液灌注组织器官不可逆性心肌梗死
- 正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸的激活作用被引量：5
- 2016年
- 目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道的组成及二十二碳六烯酸（DHA）的激活作用。方法采用酶消化法急性分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞，以全细胞膜片钳技术记录灌流不同钾离子通道阻滞剂后钾离子通道电流的变化，以及DHA灌流后钾离子通道电流变化。结果未加阻滞剂时，5μmol／LDHA灌流后钾离子通道电流明显增加，在刺激电压为100mV时，DHA灌流前后的电流密度分别为（52．80±6．68）和（110．09±13．39）pA／pF（P〈0．05）。在非特异性钾离子通道阻滞剂四乙胺10mmol／L作用下，DHA灌流不能激活钾离子通道。与未灌流时基础状态比较，在大电导钙激活钾离子通道特异性阻滞剂ibritoxin100nmol／L、中电导钙激活钾离子通道阻滞剂TRAM-34200nmol／L、小电导钙激活钾离子通道阻滞剂apamin1μmol／L、电压依赖性钾离子通道阻滞剂4-aminopyridine5mmol／L和ATP依赖性钾离子通道阻滞剂glyburide10μmlol／L作用下，钾离子通道电流密度分别减少47．6％、12．4％、13．6％、41．5％和0．1％，再同时灌流DHA后钾离子通道电流密度分别增加32．4％、124．2％、108．5％、149．5％和144．7％。结论大电导钙激活钾离子通道与电压依赖性钾离子通道为正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞上分布的主要的钾离子通道。DHA可激活冠状动脉平滑肌细胞钾离子通道，其中主要为大电导钙激活钾离子通道，这可能是DHA扩张冠状动脉、保护心血管系统的机制之一。
- 钱玲玲王如兴孙曼青夏大云汤徐季圆吴莹刘晓宇党时鹏柴强陆彤
- 关键词：冠状血管肌细胞平滑肌钾通道膜片钳术
- 二十二碳六烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉功能的影响及其机制
- 背景:糖尿病是一种以胰岛素分泌缺陷和/或胰岛素作用障碍引起机体血糖升高为特征的代谢性疾病,它可以引起心、脑、肾及视网膜等重要靶器官损害,其中糖尿病冠状动脉病变尤为严重,可引起心肌梗死、心律失常,甚至心源性猝死。大电导钙激...
- 夏大云
- 关键词：二十二碳六烯酸冠状动脉血管张力平滑肌细胞膜片钳
- 文献传递
- 瞬时受体电位C1通道在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞上的表达及对细胞内钙离子浓度的影响被引量：2
- 2017年
- 目的 探讨瞬时受体电位C1通道（TRPC1）在糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中的表达变化及对糖尿病冠状动脉功能影响的可能机制.方法 选用8~12周龄、体重（200±20）g的健康雄性SD大鼠160只,采用随机数字表法随机分为正常对照组（80只）和糖尿病组（80只）.采用腹腔链脲佐菌素注射建立1型糖尿病大鼠动物模型;采用酶消化法急性分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用Western blotting和实时荧光定量PCR分别测定正常组和糖尿病组冠状动脉TRPC1通道蛋白和基因的表达;采用细胞内钙离子荧光成像技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度及加入TRPC1通道阻滞剂SKF96365后细胞内钙离子浓度的变化;采用血管张力测定技术测定TRPC1通道阻滞剂SKF96365对糖尿病冠状动脉功能的影响.2组间比较采用t检验.结果 糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道蛋白表达量是正常组的（1.456±0.081）倍（t=-2.210,P〈0.05）;糖尿病组TRPC1通道基因表达量为正常组的（2.198±0.251）倍（t=-3.864,P〈0.05）;糖尿病组较正常组钙离子浓度变化增加（1.217±0.044比0.869±0.029,t=-6.644,P〈0.05）,正常组加入SKF96365后较加入前钙离子浓度减低（0.067±0.039比0.842±0.020,t=15.726,P〈0.05）,糖尿病组加入SKF96365后较加入前钙离子浓度减低（0.195±0.028比1.217±0.043,t=-19.807,P〈0.05）;正常组和糖尿病组冠状动脉在ET-1收缩血管后,加入10μmol/L TRPC1通道抑制剂SKF96365,糖尿病组较正常组冠状动脉舒张的百分比明显升高[（91.6±2.6）%比（69.2±6.0）%,t=-3.529,P〈0.05].结论 糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞上TRPC1通道表达增加,细胞内钙离子浓度增加,导致血管收缩和功能紊乱,这可能是糖尿病患者易发生冠状动脉病变的机制之一.
- 孙曼青汤徐钱玲玲党时鹏吴莹杨承健肖春晖刘晓宇夏大云柴强王如兴
- 关键词：糖尿病冠状动脉平滑肌细胞细胞内钙离子
- 二十碳五烯酸对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制被引量：4
- 2017年
- 目的探讨不同浓度二十碳五烯酸(EPA)对糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为正常组和糖尿病组,分离冠状动脉。采用微血管张力测定技术评估不同浓度(0.1、1、3、10、30、100μmol/L)EPA对正常和糖尿病大鼠冠状动脉的舒张作用并观察孵育(100nmol/L)大电导钙激活钾通道(BK通道)特异性阻滞剂伊比蝎毒素(IBTX)后血管张力的变化;酶消化法分离正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞并采用单通道膜片钳技术记录灌流不同浓度(0、10、30、100、300、1 000pmol/L)EPA时BK通道开放概率的变化;采用蛋白印迹技术测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉BK通道亚单位蛋白表达。结果 EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉舒张的比例随浓度升高而增加,孵育IBTX后舒张作用明显减弱;EPA对正常组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道的激活随浓度升高而增强,且与正常组比较,EPA对糖尿病组大鼠冠状动脉的舒张作用及BK通道的激活作用较弱。两组大鼠冠状动脉BK通道蛋白α亚单位表达无差异,但糖尿病大鼠冠状动脉BK通道蛋白β1亚单位表达明显低于正常组(0.424 7±0.036 2vs 0.892 3±0.053 5,n=6,P<0.05)。结论 EPA对糖尿病冠状动脉具有舒张作用,其机制与激活BK通道有关,糖尿病时BK通道β1亚单位表达减少,EPA对BK通道的激活作用减弱。
- 陈恒建夏大云钱玲玲孙曼青汤徐吴莹党时鹏季圆王湘芸王如兴
- 关键词：二十碳五烯酸冠状动脉大电导钙激活钾通道血管张力蛋白印迹法
- 糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道特性及开放动力学的变化被引量：2
- 2017年
- 目的研究糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的电压依赖性、钙敏感性及其开放动力学变化,探讨糖尿病时冠状动脉损伤的细胞电生理机制。方法采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型(糖尿病组,n=30),对照组相应注射生理盐水(n=30);采用酶消化法急性分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞;采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录BK单通道电流;采用Clampfit 10.4软件分析单通道数据。结果在电极外液钙离子浓度为1mmol/L,刺激电位分别为0,20,40,60,80,100,120和140mV时,随着刺激电位增加,正常组BK通道的NPo逐渐增加,其半数有效激活电压(V1/2)为(88.45±1.72)mV;糖尿病组BK通道NPo亦逐渐增加,V1/2为(104.29±1.09)mV,其电压-NPo曲线较正常组向左下移动。在刺激电位60 mV,电极外液钙离子浓度分别为0,0.01,0.1,0.5,1,5,10和50mmol/L时,随着电极外液钙离子浓度增加,正常组BK通道NPo逐渐增加,其半数有效激活浓度(EC50)为(2.26±0.27)mmol/L;糖尿病组BK通道NPo亦逐渐增加,EC50为(3.15±0.20)mmol/L,其浓度-NPo曲线较正常组向左下移动。在电极外液钙离子浓度为1mmol/L,刺激电位60 mV时,与正常组比较,糖尿病组BK通道NPo明显减少,电流幅度与平均开放时间无明显变化,而平均关闭时间显著延长[(451.35±113.71)ms vs(107.58±15.99)ms,P<0.05]。结论糖尿病时冠状动脉平滑肌细胞BK通道电压依赖性与钙敏感性均受损,开放概率减少,通道平均关闭时间延长,这可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因之一。
- 钱玲玲刘晓宇孙曼青夏大云汤徐季圆吴莹党时鹏柴强王如兴
- 关键词：心血管病学大电导钙激活钾通道电压依赖性钙敏感性
- 二十二碳六烯酸对视网膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道的激活作用
- 2017年
- 目的 观察二十二碳六烯酸（DHA）对视网膜动脉平滑肌细胞（RASMCs）大电导钙激活钾离子（BK）通道的激活作用。 方法 传代培养RASMCs，取第6～8代细胞用于膜片钳实验。采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术，分别记录DHA浓度0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L作用下RASMCs的BK通道开放概率（NP0）。以0.0、1.0、5.0 μmol/L不同浓度的DHA干预RASMCs，并以此分为对照组、低剂量组及高剂量组。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测RAMSCs的BK通道中β1亚基的相对蛋白表达量。 结果 DHA浓度为0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L时，RASMCs的BK通道NP0分别为0.044 4±0.001 2、0.081 2±0.004 2、0.209 0±0.006 1、0.310 5±0.005 3、0.465 0±0.007 8、0.497 7±0.014 5。随DHA浓度的升高，BK通道NP0增加。不同DHA浓度作用下RASMCs的BK通道NP0比较，差异有统计学意义（F=2.621，P＜0.05）。Western blot检测结果显示，对照组、低剂量组、高剂量组RASMCs的BK通道中β1亚基的相对蛋白表达量比较，差异无统计学意义（F=11.657，P＞0.05）。 结论 DHA可直接激活RASMCs的BK通道。
- 陈璇邵珺夏大云王如兴姚勇
- 关键词：视网膜动脉大电导钙激活钾通道膜片钳术
