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一个全新的铁皮石斛DoSWEET1基因的分子克隆与特性分析被引量：15: 2016年; SWEET(sugars will be eventually exported transporters)是真核生物中普遍存在的一类多基因家族糖转运蛋白,在植物生理代谢、生长发育及植物-微生物互作过程中起重要调控作用。本研究利用RT-PCR、RACE技术,从珍稀药用铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)中分离到一个全新的SWEET基因,命名为DoSWEET1(Gen Bank注册号KT957550)。DoSWEET1基因cDNA全长1 150 bp,编码1条262个氨基酸组成的多肽,分子质量29.18 kD,等电点9.49。推定的DoSWEET1蛋白无信号肽,具有7个跨膜域,包含植物SWEET家族2个保守MtN3_slv结构域(11-94、130-212)。多序列比对表明,DoSWEET1与多种植物SWEET蛋白一致性较高(45%~54.6%)。进化树结果显示,DoSWEET1与水稻OsSWEET13、OsSWEET14和OsSWEET15亲缘关系最近,隶属于SWEET蛋白家族分子进化树的ClassⅡ分支。qPCR分析揭示,DoSWEET1在石斛3个器官中差异表达,该转录本在根中相对表达量最高,叶中次之,分别为茎中的9.88倍和2.85倍;在胶膜菌Tulasnella sp.侵染石斛共生萌发的3级种子中,该基因转录本剧烈上调为对照的1 359.06倍,说明其参与种子接菌共生萌发过程。DoSWEET1克隆和分子特征为进一步研究该基因在铁皮石斛糖转运及种子共生萌发过程中的调控作用奠定基础。; 张岗刘思思杨新杰陈莹刘亮亮郭顺星; 关键词：铁皮石斛 SWEET 定量PCR

铁皮石斛转录因子基因DoWRKY3的克隆与分子特性分析被引量：8: 2017年; 目的克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛转录因子基因DoWRKY3,并进行生物信息学和表达模式分析。方法采用RT-PCR和RACE技术获取基因全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用软件DNASTAR 6.0和MEGA 6.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助定量PCR检测基因表达模式。结果分离到DoWRKY3基因(GenBank注册号KT957549),cDNA全长2 065 bp,编码1条由509个氨基酸组成的多肽,相对分子质量55 580,等电点6.58;推定的DoWRKY3氨基酸序列具有植物WRKY蛋白家族保守的2个WRKY结构域(217~279、381~449)、2个WRKYGQK位点和2个C_2H_2型锌指结构元件(C-X_4-C-X_(22-23)-H-X_1-H);该蛋白预测无信号肽或跨膜域,定位在细胞核;DoWRKY3蛋白与多种植物WRKY蛋白一致性较高(46.3%~57.4%),与拟南芥At WRKY3、At WRKY4和丹参Sm WRKY54蛋白等亲缘关系近,聚在WRKY分子进化树的Group 1分支;DoWRKY3基因具有组织表达特异性,其转录本在石斛根和叶中表达量较高,分别为茎中的2.32倍和1.69倍。结论 DoWRKY3基因全长的分子克隆与特征分析,为深入研究该基因在铁皮石斛生长发育、逆境生理以及次级代谢调控中的生物学功能奠定基础。; 张岗刘思思彭亮周丽思刘亮亮李欢黑小斌沈霞郭顺星; 关键词：铁皮石斛 WRKY 克隆定量PCR

关于《全国中药资源普查技术规范》的几点思考及建议被引量：11: 2016年; 《全国中药资源普查技术规范》是全国第四次中药资源普查工作的重要技术指导文件,应在实践中不断得到验证和完善。基于参加陕西省中药资源普查的工作实践,笔者通过对室内工作与外业调查工作的积累和综合分析,对《全国中药资源普查技术规范》中项目管理、技术执行方案和普查信息管理等三方面的部分内容提出了修订意见和建议,以期不断完善普查技术规范,为后续中药资源普查工作的顺利开展提供参考。; 程虎印刘亮亮李卫中; 关键词：中药资源普查项目管理信息管理

陕产重楼属药用植物的研究进展被引量：14: 2017年; 对陕产重楼属药用植物的种类及其植物学特性、化学成分、药用状况等做一综述,为起草陕产重楼属药材质量标准和资源有序开发奠定基础。; 程虎印徐进颜永刚王昌利刘亮亮; 关键词：重楼属药用植物植物学特性化学成分

华阴市产重楼属药用植物生态特点及资源状况调查被引量：13: 2017年; 目的掌握华阴市产重楼属药用植物生态特点及资源状况。方法采用文献调查、走访调查和外业调查方法,对华阴市主要区域重楼属药用植物的类群、自然分布、生态特点及资源状况进行调查、记录、整理分析。结果华阴市重楼属药用植物自然分布2种2变种,生态适宜性良好。南重楼组的1种2变种的根茎作中药重楼用,自然资源已处濒危状态。结论华阴市产重楼属南重楼组的宽叶重楼和狭叶重楼2变种为新分布,填补了华阴市产重楼属药用植物类群自然分布记载方面的漏缺,应对南重楼组药用植物自然资源开展进一步保护与培育工作。; 程虎印刘亮亮程江雪颜永刚刘阿萍李卫中王继涛焦百乐张琳; 关键词：重楼属生态特点资源状况

铁皮石斛2个F家族ABC转运蛋白基因的克隆和表达研究被引量：10: 2017年; 目的克隆铁皮石斛Dendrobium officinale ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白F家族基因并进行生物信息学分析。方法利用RACE从铁皮石斛叶片cDNA中分离ABC基因,并进行编码蛋白相对分子质量、等电点、结构域、信号肽、跨膜域及亚细胞定位等生物信息学分析;采用DNASTAR和MEGA6进行氨基酸多序列比对和分子进化分析;借助实时荧光定量PCR技术检测基因组织表达模式。结果从铁皮石斛中分离到2个F家族ABC转运蛋白基因DoABCF1和DoABCF2(Gen Bank注册号KU160474和KU160475),全长为2 104 bp和2 193 bp,各编码1条由600和659个氨基酸组成的肽链,相对分子质量67 030和74 140,等电点6.20和5.71;DoABCF1和DoABCF2蛋白均包含2个保守的ABC结构域(分别为74~314、385~600和65~323、392~607)和多个基元;2个蛋白不含信号肽或跨膜域,预测均定位在叶绿体。2个基因与植物F家族ABC转运蛋白基因相似性高达80%以上,与玉米和水稻等单子叶植物F家族ABC转运蛋白基因亲缘关系较近。DoABCF1和DoABCF2基因转录本在石斛3个器官中差异表达且均在叶中高度表达,茎和根中相对表达量差异不显著;以茎为校正样本,前者在根中相对表达量为茎中的1.74倍,后者在叶中表达量为茎中的3.44倍。结论成功获得DoABCF1和DoABCF2基因全长cDNA,二者在铁皮石斛叶中的高表达特征暗示其可能在铁皮石斛生长发育过程中起一定作用。; 李依民雷根平颜永刚彭亮张娜刘亮亮黑小斌李欢张岗郭顺星; 关键词：铁皮石斛 ATP-BINDING CASSETTE 转运蛋白

渭河下游典型区域药用植物资源多样性调查——以华阴市为例被引量：1: 2017年; 目的以华阴市为例,查清渭河下游典型区域药用植物资源基本状况。方法采用文献调查法、访问调查法和外业调查法,对华阴市调查区域内药用植物的种类、自然分布及资源状况进行实地调查、记录和整理分析。结果华阴市调查区域内药用植物共有844种,隶属于136科485属,分布在秦岭山地、渭河平原、黄土台塬和山前洪积扇区等多种环境中,有药用、食用、作土农药等多重价值,药用植物资源显示出种类多样性、分布环境典型性和经济价值多重性,在渭河流域下游区域具有典型性。结论华阴市药用植物自然资源种类丰富,特色鲜明,其自然地理地貌和药用植物种类为渭河流域下游典型区域;华阴市药用植物资源多样性调查对中药资源区划与开发、渭河全流域药用植物资源调查有重要指导意义。; 程虎印岳明程江雪李卫中刘亮亮颜永刚刘清杨新杰陈艳杜乔丽; 关键词：渭河下游药用植物资源多样性

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刘亮亮

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