李幸
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Blimp1-短发夹RNA基因转染对骨髓源性树突状细胞前体细胞分化的影响
- 2013年
- 目的探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1（Blimp1）-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞（DcC）诱导分化的影响。方法构建Blimp1-短发夹RNA。在Balb／c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中，于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中。实验分为3组：空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体，空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预，实验组培养体系中进行lenti—Blimp1-短发夹RNA干预。转染1周内观察转染效率，观察细胞的形态变化，记录细胞的生长曲线；于培养第4、5天收集细胞，实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组Blimp1信使RNA和Blimp1的表达情况；检测培养第8天CD11c^＋、CD86^＋及主要组织相容性复合物Ⅱ（MHC-Ⅱ）＋细胞的百分率。结果病毒转染后第3天细胞出现荧光，其后荧光持续存在；培养过程中出现典型DC形态，接受病毒转染的细胞有形态受损表现。空白对照组细胞在培养的前3d内呈对数增长，第4天细胞数目达到峰值，为（2．45±0．26）×10^6／孔，第8天为（2．27±0．19）×10^6／孔；空载体对照组和实验组细胞在病毒侵染后细胞增殖停滞，细胞数目稳定在（1．69±0．39）×10^6／孔。空载体对照组和实验组细胞中Blimp1信使RNA及Blimp1蛋白的表达量分别为空白对照组的76％和1％以及105％和74％。在空白对照组、空载体对照组和实验组中CD11c^＋细胞分别占（69．2±5．0）％、（68．6±5．9）％和（72．8±5．5）％（P〉0．05）；CD86^＋细胞分别占（51．1±4．9）％、（49．5±4．3）％和（50．2±6．0）％（P〉0．05）；MHC-Ⅱ^＋细胞分别占（56．3±7．3）％、（69．4±4．5）％和（46．5±5．7）％，3组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢病毒介导的短发夹RNA基因治疗是调控骨髓源性DC�
- 李幸戴晓敏姜汉英周平陈知水宫念樵
- 关键词：树突细胞慢病毒
- Axl-siRNA核转染对髓源性DC前体细胞分化的影响
- 2013年
- 目的 将Axl（Anexelekto）-siRNA（small interfering RNA）序列核转染于髓源性树突状细胞（dendritic cells,DC）前体细胞中,观察转染效率、细胞生长及分化情况.方法 构建Axl-siRNA序列,用核转染法将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞并诱导向DC分化;根据是否转染Axl-siRNA,将实验分为空白对照组和Axl-siRNA核转染组;转染后荧光显微镜观察细胞荧光水平以评估转染效率;通过锥虫蓝染色观察细胞的存活情况;观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况,绘制生长曲线;转染后第8天流式细胞术检测DC的表面标志CD11c＋.结果 转染后1～3 d荧光表达率分别为（70.5±6.3）%、（72.6±7.3）%、（68.8±6.5）%,而后荧光逐渐减弱并淬灭;核转染后细胞的死亡率为（21.2±5.4）%;空白对照组细胞在培养的前3d内的生长曲线呈对数增长,第4至6天,细胞数稳定在（2.38～2.47）×10^6/孔,培养后第7、8天细胞数略有下降,为（2.23～2.31）×10^6/孔;Axl-siRNA核转染组细胞生长曲线也呈现相同的趋势,但与空白对照组相比每阶段的细胞计数略有减少;细胞培养8 d后,空白对照组和Axl-siRNA核转染组CD11c＋的细胞百分比分别为（70.28±6.13）%和（67.53±7.45）%.结论 Axl-siRNA核转染法对髓源性DC前体细胞具有较高的转染效率,不影响DC的生长和分化;Axl-siRNA核转染法是研究DC功能的一种有效手段.
- 李幸王浩戴晓敏马俊磊汪晶姜汉英宫念樵
- 关键词：树突状细胞
- 小鼠胰岛移植模型的系列改进被引量：1
- 2013年
- 目的改进小鼠胰岛的分离、纯化及移植方法。方法基于传统小鼠胰岛移植模型,优化胶原酶消化液配方,标准化胰腺组织的消化过程,改用Histopaque 1077作为纯化胰岛的离心介质,改进胰岛制备物输送至肾包膜下的方法;相差显微镜下观察所获胰岛的形态,用双硫腙(DTZ)对胰岛进行特异性染色并计算胰岛产量及纯度;采用吖啶橙-碘化丙啶(AO-PI)染色法观察胰岛活性;制备糖尿病小鼠模型,设计胰岛移植组(10只)及假手术对照组(10只),检验胰岛移植物治疗糖尿病的效果。结果健康胰岛有完整包膜,DTZ染色后呈猩红色,平均每只小鼠可收获(200±30)个胰岛团,终纯度(90±5)%;荧光显微镜下,AO-PI染色后,正常胰岛显示绿色,死亡胰岛显示红色,胰岛存活率为(93±3)%;糖尿病小鼠接受同系胰岛移植后,90%的小鼠逆转糖尿病,对照组小鼠的血糖无改善。结论成功改进胰岛移植模型,简化和标准化小鼠胰岛的分离、纯化及移植过程,有助于该模型成为胰岛移植研究的常规方法。
- 马俊磊曾怡张冬梅姜松李幸戴晓敏汪晶宫念樵
- 关键词：胰岛纯化小鼠胰岛移植
