杨锐
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省中青年科技研究基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 寄生蠕虫胰岛素受体的研究进展
- 胰岛素受体家族是一类重要的受体酪氨酸激酶(RTKs)。作为起始胰岛素信号传导的第一步,胰岛素(insulin)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)作为配体分别结合至胰岛素受体(IR)与胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)...
- 杨锐张少华骆学农史云洁才学鹏
- 关键词：胰岛素胰岛素样生长因子蠕虫
- 文献传递
- 寄生蠕虫胰岛素受体的研究进展
- 胰岛素受体家族是一类重要的受体酪氨酸激酶(RTKs)。作为起始胰岛素信号传导的第一步，胰岛素(insulin)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)作为配体分别结合至胰岛素受体(IR)与胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)...
- 杨锐张少华骆学农史云洁才学鹏
- 关键词：胰岛素胰岛素样生长因子蠕虫
- CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白及免疫原性分析被引量：2
- 2022年
- 旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2蛋白,并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性。本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础,构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2,转染经悬浮培养的CHO细胞进行分泌表达,收集细胞培养上清,进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达和纯化,Western blot鉴定与His抗体和BVDV阳性血清反应性,利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔,用细胞间接免疫荧光(IFA)和ELISA鉴定E2蛋白的反应活性。纯化E2蛋白经BCA蛋白定量试剂盒检测后表达量高达1.228 mg·mL^(-1);Western blot结果显示,利用His抗体和BVDV阳性血清均可检测到目的蛋白的特异性条带;新西兰大白兔一免后第7天利用间接ELISA可检测到血清抗体阳性,并持续至免疫后第28天,血清抗体效价水平达到1∶1024000;IFA试验结果显示,该血清抗体可检测到BVDV感染MDBK细胞中E2蛋白的表达,进一步证实纯化的E2蛋白具有良好的免疫原性和特异性。本研究成功利用CHO悬浮培养真核表达系统制备了纯化的BVDV E2蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为BVDV的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。
- 李亚军茹毅郝荣增蒋成辉王伟张越张贵才刘华南卢炳州杨洋陶世宇杨锐宋向东陈娇余四九郑海学
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白真核表达免疫原性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2023年
- 为了制备重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的单克隆抗体,首先,通过在N基因序列5′端添加标签序列,构建重组表达质粒pET28a-PRRSV-N,将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,诱导表达重组PRRSV N蛋白;然后,将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选和亚克隆,制备单克隆抗体并鉴定。SDS-PAGE结果显示,在诱导温度为16℃、0.1 mmol/L IPTG、诱导时间12 h时,可以表达大小约19 ku可溶性的重组N蛋白;Western-blot分析也证实,重组N蛋白能与PRRSV阳性血清反应;通过间接ELISA筛选得到2株能稳定分泌抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体细胞株(4G2、2E5);单抗亚型鉴定表明,单克隆抗体均为Ig G1亚型κ轻链;4G2、2E5细胞的培养上清和相应腹水的ELISA检测抗体效价分别为:1∶1600、1∶800和1∶51200、1∶51200。综上,成功制备了可溶性重组PRRSV N蛋白并筛选出特异性的单克隆抗体,这为进一步探究PRRSV N蛋白的结构和功能以及PRRSV诊断试剂的研制奠定了基础。
- 杨锐杨锐王凡张世民邓瑞雪常艳燕张勇张勇
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白可溶性表达单克隆抗体
- 豆状带绦虫胰岛素样生长因子受体基因的克隆分析及原核表达被引量：5
- 2016年
- 采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)法克隆了豆状带绦虫(Taenia pisiformis)胰岛素样生长因子受体基因(TpIGFR)的全长cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析和原核表达。结果显示,Tp IGFR cDNA全长5 154 bp,其ORF为4 953 bp,编码1 651个氨基酸。系统进化分析表明,TpIGFR与多房棘球绦虫、猪带绦虫胰岛素样生长因子受体的相似性均大于83%,处于同一进化分支。蛋白结构预测表明,该蛋白由胞外配体结合区、跨膜区和酪氨酸蛋白激酶区组成,具有IGFR的特征结构域。Western-blot结果表明,该重组蛋白能被豆状囊尾蚴感染家兔血清及抗His抗体特异识别,具有反应原性。本研究为后续带科绦虫IGFR基因的功能研究奠定了基础。
- 杨锐张少华骆学农史云洁曾巧英才学鹏
- 关键词：RACE原核表达
- 猪带绦虫胰岛素受体TsIR-4810的鉴定及LBD区表达
- 2016年
- 目的克隆鉴定猪带绦虫胰岛素受体TsIR-4810基因,并表达其LBD区。方法设计猪带绦虫胰岛素受体TsIR-4810特异性引物,并分段进行RT-PCR扩增。TsIR-4810的完整ORF序列经BLAST同源比对,SMART预测其结构域,SWISS-MODEL同源建模,并用PhyML构建系统发育树。将TsIR-4810的LBD区克隆至pET-30a中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果获得的目的基因完整的ORF为4 920bp,其编码蛋白的氨基酸序列与其他生物的胰岛素受体一样,具有相对保守的分泌信号肽、受体L1和L2结构域、FnⅢ结构域、跨膜区和受体酪氨酸激酶域。构建的LBD重组菌株诱导表达了63ku的目的蛋白,与预期大小相符,且主要以包涵体形式存在。结论 TsIR-4810为猪带绦虫胰岛素受体基因,其LBD区的成功表达,将为开展基于胰岛素受体LBD区的新型疫苗和药物奠定基础。
- 魏艳玲郭爱疆刘光学杨锐张少华侯俊玲骆学农
- 关键词：猪带绦虫胰岛素受体LBD
