华明
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：浙江大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人TNFβ缺失体融合表达及其产物一步纯化法研究被引量：4
- 2000年
- 本文将hTNFβN端缺失 2 3aa的缺失体基因克隆于 pET 2 8 C(+ ) 表达载体 ,构建成T7lac启动子控制下His6 TNFβ融合表达质粒 ,转化到E coliBL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,His6 TNFβ表达量约占总菌体蛋白的 2 5 % ,Mr2 0 5 0 0。表达产物大部分以包涵体形式存在。包涵体经过洗涤 ,70mol/L脲变性溶解 ,用Ni2 + 亲和层析一步快速纯化 ,所得His6 TNFβ的纯度达 90 %以上 ,回收率在 90 %左右。纯化产物稀释复性后 ,其细胞毒活性为 (0 5～ 1 0 )× 10 6U/mg蛋白左右。这些研究结果将为制备重组人TNFβ缺失体以及进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 徐建芬周晴马志章余建法华明丁仁瑞
- 关键词：肿瘤环死因子经法TNFΒ
- 人His6-TNF-β融合表达质粒的构建及其产物一步纯化法研究
- 1999年
- 人β-肿瘤坏死因子（tumor mecrosis factor beta,TNF-β）又称淋巴毒素（lymphotoxin,LT）、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.成熟的人TNF-β由171个aa组成,其N端为非功能区,研究发现若N端缺失25个aa,仍可保持其细胞毒活性;若缺失24个aa,则该缺失体的细胞毒作用可提高2～6倍,而对小鼠致死率却降低5倍.TNF-βC端结构的完整性对保持细胞毒活性是必需的,因此可通过构建N端的不同缺失体来重组高抗癌效应和低毒副作用的生物制剂.本文选用融台表达载体来组建人N端缺失体的表达质粒,并且借T（?）-lac启动子、His6-tag等元件,以期获得高效表达和利用Ni2+螯合树脂柱来亲和纯化,为进一步研究TNF-β缺失体的生物学活性和TNF-β的开发利用打下基础.
- 徐建芬周晴马志章华明丁仁瑞余建法沈丙辉
- 关键词：肿瘤坏死因子质粒纯化
