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黄悦: 作品数：13 被引量：24H指数：3; 供职机构：贵州医科大学更多>>; 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省教育厅科研项目贵阳市科技攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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神经生长因子对体外培养角膜缘干细胞的作用: 2017年; 目的探讨神经生长因子(NGF)对体外培养角膜缘干细胞(LSCs)的影响及其受体在LSCs上的表达与细胞增殖的关系。方法体外培养LSCs,分对照组和NGF组传代培养,分别选取各组培养1 d、3 d和5 d的细胞,免疫细胞化学检测p63、TrkA、p75表达。结果 NGF组在1 d、3 d、5 d时间点p63表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组各时间点TrkA表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组各时间点p75表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析TrkA表达平均灰度值与p63表达平均灰度值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NGF有维持LSCs的干细胞特性的作用,LSCs可表达NGF受体TrkA和p75,且TrkA的表达与LSCs的增殖有相关性。; 高杰刘强胡蓉黄悦苏敏李红; 关键词：神经生长因子 P63 TRK P75

β-神经生长因子基因克隆和诱导表达及其对PC12细胞的诱导分化作用被引量：5: 2016年; 目的构建β-神经生长因子(β-NGF)慢病毒表达载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,应用Tet-on 3G四环素诱导表达系统,探讨β-NGF在人胚肾(HEK293FT)细胞中的过表达情况,及其对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞分化的影响。方法从SD大鼠脑组织提取总RNA,反转录成c DNA,利用分子生物学技术,克隆鼠β-NGF基因完整编码区,将β-NGF基因定向插入载体p LVX-TRE3G-IRES中。将重组载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF和载体p LVX-Tet3G分别转染空白HEK293FT细胞,制备收获慢病毒,共转染HEK293FT细胞,同时用不同剂量强力霉素(Dox)诱导NGF表达(分为未转染组、0、100、500和1000μg/L Dox诱导表达组)。48h后收集细胞,免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞内β-NGF表达情况。同时收集培养上清,1.ELISA检测各组上清内β-NGF的分泌量;2.制作条件培养基,加入PC12细胞培养基中进行诱导培养,观察PC12细胞诱导分化情况。结果双酶切和测序鉴定重组质粒p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF序列和方向正确;β-NGF在转染细胞内被诱导表达,随着Dox剂量增加,表达量增强;β-NGF在培养基的上清内表达,表达量随Dox剂量增加而增多。诱导表达的条件培养基可诱导PC12细胞形态改变,表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)蛋白。结论成功重组慢病毒载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,转染后β-NGF基因能够在HEK293FT细胞中表达和分泌,且该蛋白具有诱导PC12细胞向神经元样细胞分化的能力;运用Tet-On 3G四环素诱导表达系统,可成功诱导表达获得不同剂量β-NGF蛋白。; 高杰严会文李红黄悦胡蓉苏敏; 关键词：Β-神经生长因子 PC12细胞强力霉素酶联免疫吸附法免疫印迹法

小鼠同种异体造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病模型的构建被引量：4: 2016年; 目的建立同种异体造血干细胞移植（HSCT）后的急性移植物抗宿主病（a GVHD）小鼠模型。方法用C57BL/6小鼠胫、腓骨骨髓制备T细胞删除的（TCD）BM细胞,4~6周的同种异体BALB/c小鼠接受900 c Gy全身放疗2~4 h后,静脉注射供体5×10~6个TCD-BM细胞和不同剂量的脾细胞,分别以1.25×10~6、2.5×10~6、5×10~6个脾细胞作为实验组1、2、3,仅TCD-BM移植的作对照组,每组10只小鼠。通过临床GVHD评分、生存率和靶器官损害等检测模型建立情况。结果实验组2于移植后7~14 d出现严重腹泻、拱背、活动性降低和毛皱褶等典型a GVHD临床表现,结肠、肺和肝等靶器官组织可见明显的GVHD病理学改变,45 d生存率为0。对照组和实验组1、3皆未见明显a GVHD临床表现。移植60 d后,实验组1生存率为80%,对照组为100%。实验组3移植后10 d,生存率为0。结论用供体C57BL/6小鼠来源的5×10~6个TCD-BM细胞和2.5×10~6脾细胞静脉注射,成功构建HSCT后4~6周的BALB/c小鼠a GVHD模型。; 胡蓉黄悦李红苏敏; 关键词：急性移植物抗宿主病造血干细胞移植小鼠动物模型

大承气汤对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流影响分析被引量：2: 2017年; 目的:探讨大承气汤含药动物血浆对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流影响,为大承气汤对胃肠道Cajal间质细胞的离子通道的研究提供参考依据。方法:选取8~14天SPF级的Wistar大鼠共20只,雌雄不限,培养大鼠小肠Cajal间质细胞,并采用免疫细胞化学法对其进行鉴定;取Wistar大鼠20只,体重350±20克,雌雄不限,制备服大承气汤含药动物血浆;采用膜片钳技术记录并分析大乘气汤含药动物血浆对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流影响。结果:免疫细胞化学法鉴定小肠Cajal间质细胞培养成功。大乘气汤含药血浆条件下,Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流为~418±60PA,电流振幅相对对照组增加52.6%,差异有统计学意义(P<0.05);频率为15±0.82次/分钟,相对对照组增加76.4%,差异有统计系意义(P<0.05)。结论:大承气汤含药动物血浆对Wistar大鼠小肠Cajal间质细胞的起搏电流有明显的加强作用,大承气汤可通过加强胃肠道Cajal间质细胞起搏电流,改善MODS胃肠运动功能障碍。; 王燕燕黄悦; 关键词：大承气汤 CAJAL间质细胞膜片钳技术

大半夏汤对化疗呕吐家兔胃Cajal间质细胞水平影响研究被引量：4: 2018年; 目的:分析大半夏汤对治疗呕吐家兔胃Cajal间质细胞水平的影响,为揭示大半夏汤止呕机理提供参考依据。方法:选取健康家兔,随机分为对照组、DDP组、大半夏汤高剂量组、大半夏汤中剂量组、大半夏汤低剂量组和胃复安组共6组,对DDP组、大半夏汤高中低剂量组和胃复安组家兔采用腹腔注射顺铂法,制备化疗呕吐家兔,制备成功后,按要求分别给药。连续给药7天后,记录6组家兔24小时内的呕吐物量、呕吐次数等情况;检测各组呕吐家兔胃排空率及血浆SP含量;采用ELISA法,分别检测6组家兔胃Cajal间质细胞(ICC)水平。结果:大半夏汤高中低剂量组、胃复安组家兔的呕吐物量和呕吐次数明显少于DDP组,差异有统计学意义(P<0.05);大半夏汤高中低剂量组、胃复安组胃排空率、SP含量、ICC含量均高于DDP组,差异有统计学意义(P<0.05);大半夏汤高剂量组呕吐物量、呕吐次数、胃排空率、SP含量及ICC含量与胃复安组相近,差异无统计学意义(P>0.05);大半夏汤高剂量组胃排空率、SP含量、ICC含量分别为(68.32±7.19)%、(16.34±2.32)ng/L、(0.26420±0.01621)IU/ml,大半夏汤中剂量组三指标分别为(54.68±6.37)%、(12.50±2.16)ng/L、(0.21325±0.010252)IU/ml,低剂量组三指标分别为(46.15±7.21)%、(9.23±2.08)ng/L、(0.18645±0.005469)IU/ml,三组之间各指标两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大半夏汤对化疗所致呕吐有较好疗效,能提高化疗呕吐家兔胃ICC含量,大半夏汤的止呕机理可能与其能提升ICC水平有关。; 王燕燕黄悦; 关键词：大半夏汤化疗呕吐 CAJAL间质细胞

维生素E和C抗镉雄性生殖毒性的形态计量学研究: 苏敏许庭良姜俸蓉黄悦臧贵勇; 该项目通过对慢性染镉小鼠同时给予维生素E、C处理，用免疫组化技术、电镜技术观察睾丸和附睾细微结构改变及细胞凋亡情况。通过对主要细胞用形态计量法测定细胞核的平均截面积、平均体积和平均表面积等值，对凋亡细胞进行计数，从形态学...; 关键词：; 关键词：形态计量学维生素E

骨髓间充质干细胞异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用被引量：3: 2017年; 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)异体移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法全骨髓贴壁培养法获得大鼠BMSCs,流式细胞术检测细胞免疫表型,并诱导成骨方向分化。取雌性C57BL/6小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组和大鼠BMSCs组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35~55联合完全弗氏佐剂诱导建立EAE模型。小鼠免疫后38d和48d腹腔注射PBS或大鼠BMSCs进行治疗,神经功能评分观察各组小鼠神经功能变化。二次治疗12d后取各组小鼠脊髓、脾脏和外周血。HE染色及Luxol fast blue染色观察脊髓炎性细胞浸润及髓鞘脱失情况;脾脏制成单细胞悬液,细胞CFSE标记后10mg/L刀豆球蛋白(Con A)和MOG_(35~55)刺激培养3d,观察脾细胞增殖情况。ELISA检测大鼠BMSCs移植后外周血细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)含量。结果流式细胞术显示,大鼠BMSCs第3代(P3)细胞表达抗原CD29、CD90、CD106,不表达CD45。体外诱导其能向成骨分化。小鼠发病后,大鼠BMSCs组小鼠神经功能缺损症状较PBS组减轻,评分降低。HE染色和Luxol fast blue染色结果显示,大鼠BMSCs组脊髓炎细胞浸润和脱髓鞘比同时间点PBS组减轻(P<0.05)。Con A和MOG_(35~55)刺激培养后,PBS组和大鼠BMSCs组脾细胞增殖增加,而大鼠BMSCs组又较PBS组降低。与PBS组相比,大鼠BMSCs组血浆细胞因子IFN-γ、IL-17含量降低(P<0.05)。结论全骨髓贴壁培养法能有效分离纯化BMSCs,大鼠BMSCs异体移植对小鼠EAE模型有治疗作用。; 廖文萍胡蓉黄悦李红闫丽丽苏敏; 关键词：骨髓间充质干细胞异体移植实验性自身免疫性脑脊髓炎脾细胞增殖流式细胞术小鼠

大鼠PAX6基因真核表达载体构建和表达以及PAX6/mESC细胞系的建立: 严会文苏敏黄悦胡蓉李红高杰廖文萍闫丽丽

以羊膜为载体体外培养大鼠角膜缘干细胞的实验研究被引量：1: 2016年; 目的比较角膜缘干细胞(LSCs)在不同羊膜上的生长情况,寻求LSCs体外培养的最佳载体。方法取健康剖宫产孕妇胎盘的羊膜组织,分别制备保留上皮的新鲜羊膜、去除上皮的新鲜羊膜和冷冻羊膜。消化法分离大鼠LSCs后将其按相同浓度分别种植于3种事先准备好的羊膜载体和无载体孔中,分为4组。实验1组:保留上皮的新鲜羊膜组;实验2组:去除上皮的新鲜羊膜组;实验3组:去除上皮的冷冻羊膜组;对照组:无羊膜载体组。4组细胞分别作细胞凋亡检测,p63、PCNA免疫荧光检测,检测阳性细胞计数。结果培养第3天,3个实验组培养的细胞排列紧密,融合形成单层,其中可见大小不等的团块状集落,细胞大小基本一致,多呈圆球形或卵圆形。对照组培养的细胞排列相对稀疏,基本融合,形成单层,可见散在的、大小不等的桑葚样细胞集落,集落细胞的生长特征及形态特点与实验组相似。实验组的细胞凋亡率均低于对照组,p63阳性率和PCNA阳性率均高于对照组(P<0.01),尤以实验1组变化最为明显(P<0.01)。结论羊膜载体有利于体外培养大鼠LSCs的扩增,保留上皮的新鲜羊膜能更好地维持体外培养LSCs的特性,是体外角膜缘干细胞培养的理想载体。; 胡蓉高杰梁雅茹黄悦李红苏敏; 关键词：角膜缘干细胞羊膜角膜 P63 PCNA

体内转染血管内皮生长因子基因对慢性低氧诱导小鼠肺动脉高压的影响被引量：1: 2018年; 目的探讨血管内皮生长因子(Vegf)体内转基因对慢性低氧诱导小鼠肺动脉高压(PAH)的治疗作用。方法将昆明雄性小鼠36只随机分为3组:低氧Vegf治疗组(P-V组),模型组(PAH组),对照组(C组),每组12只。采用间断性常压缺氧法复制小鼠PAH模型。观察4周后,P-V组经尾静脉注射聚乙烯亚胺(PEI)包被的pBudCE4.1-Vegf-EGFP载体,其他组注射等量生理盐水,继续低氧处理。转基因治疗后30 d,观察小鼠的一般情况、平均肺动脉压(mPAP)、动脉血气、右心肥大指数[右心室/(左心室+室间隔)]及肺小动脉形态学改变,RT-PCR方法检测增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况;Real-time PCR方法检测各实验组肺组织Vegf mRNA量; ELISA方法及硝酸还原酶法分别检测各实验组肺组织VEGF和NO含量。结果 PAH组小鼠出现代谢性酸中毒,平均肺动脉压升高,右心室肥厚,肺小动脉管壁厚度(WT)增加,与C组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。与PAH组相比,P-V组小鼠平均肺动脉压升高、右心室肥厚及肺小动脉管壁增厚减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。与PAH组小鼠相比,P-V组小鼠外源基因Vegf的mRNA及蛋白水表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Vegf转基因治疗能上调慢性低氧诱导小鼠的肺组织中Vegf mRNA和VEGF的表达,从而拮抗肺动脉压升高,减轻右心肥厚及肺动脉血管增厚。; 黄悦黄悦胡蓉胡蓉高杰李红; 关键词：血管内皮生长因子肺动脉高压转染实时定量聚合酶链反应小鼠

黄悦

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