王怡雯
- 作品数：10 被引量：54H指数：4
- 供职机构：北京农学院食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>
- 人源抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素‑7的抗体IgG及其应用
- 人源抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素‑7（sialic acid‑binding immunoglobulin‑like lectin‑7，Siglec‑7）的抗体IgG及其应用，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO...
- 朱旭辉曹勇平王怡雯朱进
- 文献传递
- 双抗夹心ELISA快速检测冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a被引量：3
- 2019年
- 为建立冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a双抗夹心ELISA检测体系,采用福氏志贺氏菌2a抗原免疫获得多克隆抗体,应用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选出1株福氏志贺氏菌2a单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为2C10。试验结果表明,2C10杂交瘤细胞株抗体效价为1∶10.24×104,抗体纯度为96%,免疫球蛋白亚型为IgG2a。用此单克隆抗体作为检测抗体,多克隆抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心ELISA体系,检测限为1 000 CFU/g。用此体系检测宋内志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌及阪崎肠杆菌,均无交叉反应。本研究可为冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a的检测提供一种特异性强,准确度高的ELISA检测方法。
- 王怡雯张帅张红星齐颖颖谢远红刘慧鲁舟
- 关键词：单克隆抗体多克隆抗体
- 单增李斯特菌单克隆抗体的研制及特性分析被引量：11
- 2016年
- 运用辐照法和热灭菌法自制单增李斯特菌的免疫原、检测原,运用尾静脉免疫方法免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备得到抗单增李斯特菌的单克隆抗体,并对其进行免疫学特性分析。结果表明,成功筛选4株能稳定分泌抗单增李斯特菌的单克隆杂交瘤细胞株,腹水抗体效价为1∶102 400～1∶409 600,免疫球蛋白亚型为Ig G1、Ig2a、Ig2b,亲和力常数在1×107～1×1010L/mol;经测定分析出最佳配对抗体;并与绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌及大肠杆菌、沙门氏菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等菌属无明显交叉反应;进行双抗体夹心ELISA方法对模拟单增李斯特菌污染肉样检测其灵敏度达1×103 CFU/m L。获得高效价、特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,为食品中致病菌单增李斯特菌残留的免疫学检测方法奠定了基础。
- 齐颖颖吴萌王怡雯刘慧谢远红张红星
- 关键词：单增李斯特菌杂交瘤单克隆抗体
- 快速检测生鲜肉中三种食源性致病菌被引量：12
- 2016年
- 为同时快速检测生鲜肉中鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌和福氏志贺氏菌3种食源性致病菌,降低检测成本,制备了特异性单克隆抗体和多克隆抗体,研制出能够同时检测以上3种致病菌的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本试验成功筛选出3株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2E3、2E7和2E8,3种单克隆抗体效价均在128×10^6以上,3种多克隆抗体效价均在200×10^6以上。制备的胶体金免疫层析试纸条对鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌和福氏志贺氏菌3种食源性致病菌的特异性良好,灵敏度均为1×10^4CFU/g。
- 张帅齐颖颖张红星王怡雯谢远红刘慧
- 关键词：食源性致病菌单克隆抗体多克隆抗体胶体金免疫层析试纸条
- 双抗夹心酶联免疫吸附快速检测冷鲜肉中的6种血清型沙门氏菌被引量：25
- 2016年
- 为快速检测冷鲜肉中的沙门氏菌,筛选出1株产抗6种沙门氏菌单克隆抗体的细胞株,运用产生的抗体建立酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。实验采用6种血清型致病沙门氏菌制备出混合抗原,对BALB/c小鼠及新西兰大白兔进行免疫,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备出抗沙门氏菌单克隆抗体以及多克隆抗体,并建立双抗夹心ELISA体系检测冷鲜肉中沙门氏菌。结果表明,成功筛选出1株能稳定分泌抗沙门氏菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株6E7,保藏编号为CGMCC 10313以及多克隆抗体,效价分别为1∶1.28×106和1∶8.0×105;将多抗作为包被抗体吸附于96孔酶标板上,并用辣根过氧化物酶标记单抗,建立双抗夹心ELISA体系;检测模拟污染肉样中沙门氏菌,其检测限为800 CFU/g;并与其他血清型沙门氏菌、志贺氏菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌均无交叉反应,特异性良好。
- 张帅齐颖颖张红星王怡雯谢远红刘慧
- 关键词：沙门氏菌杂交瘤技术单克隆抗体
- 福氏志贺氏菌2a单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立被引量：2
- 2017年
- 为制备特异性和灵敏度较高的抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体,并建立双抗夹心酶联免疫吸附检测法,用于检测生鲜食品中的福氏志贺氏菌2a。本研究利用自制的福氏志贺氏菌2a抗原免疫BALB/c小鼠,并用杂交瘤技术进行细胞融合,经筛选克隆后,获得3株分泌抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞,分别命名为5C12、1B5和6A11。3株杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后,诱导产生的腹水中抗体的效价为1∶2.048×10~5~1∶1.024×10~5,免疫球蛋白亚型均为IgG。3株抗体识别抗原表位的最佳配对为5C12和6A11,由此建立双抗夹心ELISA体系,测得其灵敏度为1 000 CFU/g,且具有良好的特异性。
- 王怡雯齐颖颖张红星张帅谢远红刘慧
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素突变体H35A抑制α-溶血素的细胞毒性被引量：2
- 2017年
- 目的:研究金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-hemolysin,Hla)突变体H35A在人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,h PBMC)和THP-1巨噬细胞中对于野生型Hla毒性作用的影响。方法:H35A与Hla共同作用于h PBMC和THP-1巨噬细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α等炎症因子的m RNA转录水平差异,台盼蓝染色计算THP-1巨噬细胞存活率。结果:预孵育突变体H35A 1 h的h PBMC和THP-1巨噬细胞,经Hla刺激产生IL-1、IL-6、TNF-α的m RNA转录水平显著降低;台盼蓝染色计数发现,H35A与Hla共同作用的THP-1巨噬细胞存活率显著高于Hla单独处理组。结论:突变体H35A可抑制野生型Hla对于h PBMC和巨噬细胞的毒性作用,为金黄色葡萄球菌早期感染防治药物的研发提供了更多选择。
- 孙倩男郑峰周婷婷岳岩王怡雯朱旭辉王长军余伯阳朱进
- 关键词：炎症因子细胞毒性
- 人源抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-7/9的抗体IgG及其应用
- 人源抗唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素‑7/9的抗体IgG及其应用，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。实验结果证实，该人源抗体能够同时与Siglec‑7、...
- 王怡雯曹勇平朱进朱旭辉
- 文献传递
- 人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的 :将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体Ig G,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性。方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子Ig G抗体重、轻链表达载体,共转染293 Free Style(293F)细胞,表达并纯化Ig G抗体。应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基。结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建Ig G真核表达载体。获得的全分子Ig G抗体重、轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素。微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6μg/m L。鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200μg时可达100%保护率。血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基。结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素Ig G抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础。
- 陈雅熊四平唐奇王怡雯耿以如顾慧徐亚如周荧仇镇宁冯振卿朱进
- 关键词：血凝素中和抗体
- 金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)特异性抗体的制备及其功能分析被引量：2
- 2018年
- 目的:制备金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,并分析其体外功能。方法:以USA300基因组为模板,PCR扩增SraP_(L-Lectin)基因序列,克隆到pET28a表达载体中,0.1 mmol/L IPTG 25℃诱导6 h,镍柱亲和层析纯化SraP_(L-Lectin)-His蛋白。以纯化的SraP_(L-Lectin)-His重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,间接ELISA法、West-ern blot法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。扩大培养阳性细胞株后注射小鼠腹腔,收集腹水,经Protein G柱纯化anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体。以不同终浓度的单克隆抗体预先孵育A549细胞和注射小鼠腹腔,涂板计数单克隆抗体阻断细菌黏附、侵入和感染的能力。结果:成功构建了SraP_(L-Lectin)-pET28a重组表达载体,经镍柱纯化后获得高纯度的重组蛋白,获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,小鼠腹水经Protein G柱纯化后获得纯度高达95%以上的特异性抗体,效价1∶32万。终浓度100 ng/mL单克隆抗体预先孵育A549细胞2 h,能够显著降低金黄色葡萄球菌对A549细胞的黏附和侵入。提前1 d向小鼠腹腔注射1μg anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,能够显著降低小鼠血液中的金黄色葡萄球菌数量。结论:本研究制备的anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体能够阻断金黄色葡萄球菌对宿主细胞的黏附和侵入,为将SraP_(L-Lectin)作为防控金黄色葡萄球菌感染药物靶点的研发奠定了基础。
- 岳岩郑峰曹清心王怡雯周婷婷王长军
- 关键词：金黄色葡萄球菌
