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排序方式：

牛β-酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆: 1998年; 采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ，将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物，引物长度１９ｎｔ，跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示，在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近，出现一明显亮带，这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物，煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒，ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ，Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中，经筛选、酶切、测序鉴定，结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。; 刘松财张玉静欧阳红生张永亮刘万臣黎诚耀赵建军金扩世汪玉松; 关键词：Β-酪蛋白 PCR 克隆

犬红细胞Cu·Zn－SOD的纯化及其部分特性: 1996年; 采用乙醇－氯仿处理、加热、丙酮沉淀和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析的方法，从犬血红细胞中提纯了铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ·Ｚｎ－ＳＯＤ），并对其部分性质进行了研究。比活力为４１５０Ｕ／ｍｇ，不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现１条区带，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的亚基分子量为１６３００，紫外最大吸收峰位于２５９ｎｍ，氨基酸组成中不含有色氨酸。; 刘万臣刘松财马林崔建华张永亮欧阳红生张玉静汪玉松; 关键词：铜锌超氧化物歧化酶红细胞纯化

中国人血小板生成素基因的克隆被引量：1: 1997年; 从5mo龄水囊引产胎儿肝脏中分离提取mRNA，经反转录PCR方法扩增出中国人全长血小板生成素（TPO）cDNA，然后将该cDNA片段重组入pGEM3Zf载体，并进行了限制性内切酶鉴定与序列分析，该cDNA全长1059bP，编码353个氨基酸。为开展TPO在真核细胞中的表达打下了基础。; 刘万臣张玉静李爱民谭芬张永亮欧阳红生; 关键词：血小板生成素聚合酶链反应基因克隆克隆

凋亡素基因的克隆被引量：8: 1998年; 为了探索应用凋亡素杀死肿瘤细胞的可能性，用ＰＣＲ方法扩增了鸡贫血病毒（ｃｈｉｃｋｅｎａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＣＡＶ）的ＶＰ３基因（凋亡素）片段，然后将该片段重组于ｐＵＣ１９载体，并进行了限制性内切酶鉴定与序列分析，证实该片段与鸡贫血病毒Ｃｕｘ－１株的ＶＰ３ＤＮＡ序列一致，该ＤＮＡ全长３６３ｂｐ，编码１２１个氨基酸。; 谭芳张玉静徐彦波刘万臣张永亮欧阳红生; 关键词：凋亡素 VP3 鸡贫血病毒聚合酶链反应克隆

生长激素释放因子(GRF)的基因改造及化学合成被引量：12: 1998年; 为了提高生长激素释放因子（ＧＲＦ）的体内活性，根据猪ＧＲＦ的天然序列，设计了改造后ＧＲＦ（１～３２）的基因序列（含信号肽），两端加设ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ的粘性末端，分４段由ＤＮＡ合成仪合成，每段长度分别为９５、９７、８６、１０６ＮＴ，２条链间有１５个碱基的粘端。用尿素变性ＰＡＧＥ纯化合成片段，用Ｔ４多核苷酸激酶对合成ＤＮＡ磷酸化，混合４个片段复性，然后用Ｔ４连接酶连接。提取ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔ质粒，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ在Ｍｕｌｔｉｃｏｒｅｂｕｆｅｒ中酶切完全后，琼脂糖电泳，由ＧｅｎｅＥｌｕｔｅＡｇｒｏｓｅＳｐｉｎＣｏｌｕｍｓ回收酶切大片段。将该酶切片段与上述合成的ＧＲＦ基因由Ｔ４连接酶连接，并转化至氯化钙致敏的ＤＨ５α。选取重组菌落，提取质粒，用ＰＣＲ及双酶切鉴定阳性克隆。用Ｍｉｎｉｐｒｅｐ提取重组质粒，ＡＢＩ３７３自动测序仪测序。测序结果表明已克隆到合成的ＧＲＦ基因。; 冯立文张永亮张玉静欧阳红生刘松财岳军明申建新刘万臣; 关键词：生长激素 GRF 基因改造化学合成

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张永亮