晏珊
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中国医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miRNA与心血管疾病关系的研究进展被引量：11
- 2018年
- miRNA是一类内源性非编码小RNA,通过影响m RNA和蛋白质来调控基因的表达。miRNA与心血管疾病之间有很大的联系,如与血管形成、血管衰老、心肌纤维化、心肌肥大、动脉粥样硬化和冠心病等。还可作为一种生物标记物,为疾病诊断与治疗提供新依据。
- 于佳慧祝旭东李菁瑗晏珊郝丽英
- 关键词：心血管疾病心肌纤维化心肌肥大MIRNA
- 钙调蛋白N_2和C_2突变体载体的构建、表达纯化和鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的构建钙调蛋白(CaM)N_2和C_2突变体的表达性载体,表达纯化并进行活性鉴定,为进一步研究CaM与钙通道片段的相互作用奠定基础。方法将CaM的N-lobe和C-lobe的cDNA分别与相应的N-lobe和C-lobe的cDNA相连,制备N_2和C_2突变体的cDNA。将N_2和C_2的cDNA分别插入p GEX-6p-3载体,并将重组质粒转入E.coli BL21菌株,IPTG诱导转化成功的菌株表达GST融合蛋白,超声破碎法提取,GS-4B beads纯化,SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白相对分子质量及纯度,pull-down实验鉴定活性。结果酶切鉴定以及DNA测序结果证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE电泳图显示突变体蛋白纯度和浓度均较高;pulldown实验结果证明突变体蛋白有生理活性,能与钙通道片段结合。结论本研究成功构建了N_2和C_2表达质粒,并提取、纯化了有活性的钙调蛋白N_2和C_2突变体。
- 晏珊雷帅陈思充于佳慧祝旭东孙嘉瑶杜逸李墨唐子鉴郝丽英
- 关键词：钙调蛋白N2C2
- Ca_v1.2钙通道GST-CT1蛋白片段与胞浆钙调蛋白提取纯化的比较被引量：3
- 2016年
- 目的对比分析心肌Ca_V1.2钙通道片段GST-CT1融合蛋白与胞浆钙调蛋白(calmodulin,CaM)提取与纯化方法的异同。方法将pGEX-6p-3/CT1和pGEX-6p-3/CaM重组质粒转入E.coli BL21菌株,筛选得到转化成功的菌株并用IPTG诱导其表达,GS-4B beads分离纯化,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定目的蛋白及其相对纯度,Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白和CaM蛋白的生物学活性。结果采用超声破碎法,应用N-laurylsarcosine和Triton X-100处理后提取的GST-CT1融合蛋白浓度和纯度显著高于未用两者处理的对照组,而N-laurylsarcosine和Triton X-100对胞浆蛋白CaM的提取和纯化无明显影响。结论细胞膜通道蛋白GST-CT1的提取和纯化方法与胞浆蛋白Ca M存在明显差别。
- 晏珊封瑞杨磊孙宇王千慧郭凤赵美眯孙雪菲郝丽英
- 关键词：钙通道钙调蛋白
- Cav1.2钙离子通道三维结构的同源建模及其应用被引量：3
- 2017年
- 目的构建心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,检验模型的准确性与可靠性。方法利用SWISS-MODEL同源建模服务器,对豚鼠心肌细胞Cav1.2通道α1亚基进行同源建模,建模结果提交至加州大学蛋白质结构在线检测服务器进行检测评估,并对结构模型进行打分。利用MOE软件分子对接程序模拟阻断剂或药物与Cav1.2通道模型的结合,进一步验证通道模型的准确性与可靠性。结果在SWISS-MODEL服务器上搜寻到的模板序列Cav1.1α1S与目标序列Cav1.2α1C均为L型钙通道,序列比对结果显示其同源性高达71.5%,选择自动模式(automated mode)进行同源建模。L型钙通道阻断剂维拉帕米、硝苯地平、地尔硫卓能结合到Cav1.2通道三维结构模型的特定区域,而钠通道特异性阻断剂河豚毒素并未与该模型相结合,中药有效成份白花前胡甲素和小檗碱与该模型也有一定的结合。结论成功构建了心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,为后续研究提供了可靠样本,也为同源建模在研究离子通道三维结构预测中的应用奠定了基础。
- 雷明苏敬阳李卓晏珊孙雪菲朱彤郝丽英
- 关键词：离子通道同源建模分子对接
- 钙调蛋白镁结合位点突变体载体的构建、表达纯化及鉴定
- 2016年
- 目的构建钙调蛋白3种镁离子结合位点突变体的质粒载体,并进行表达纯化及鉴定,为深入研究钙调蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用钙调蛋白cDNA进行点突变,制备3种镁离子结合位点突变的cDNA。将突变后的cDNA分别插入pGEX-6P-3载体,制备钙调蛋白突变体载体质粒。质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,培养大肠杆菌,并诱导GST融合蛋白表达。利用Glutathione-Sepharose 4B珠子和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序证实成功构建钙调蛋白突变体质粒;表达纯化得到的钙调蛋白突变体经电泳图鉴定纯度较高,浓度约1.0mg/mL。结论本研究成功构建了钙调蛋白镁结合位点突变体融合蛋白原核表达质粒,分离纯化可获得较高浓度较高纯度的钙调蛋白突变体。
- 赵美眯李卓邵冬雪梁洪玥晏珊封瑞孙雪菲郭凤郝丽英
- 关键词：钙调蛋白突变体融合蛋白
