李红霞
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：大连大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金大连市科技计划项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 缺乏葡萄糖和谷氨酰胺对黑色素瘤A375细胞增殖与凋亡的影响
- 2016年
- 目的:探讨体外培养条件下,缺乏葡萄糖(No-Glu)或谷氨酰胺(No-Gln)对黑色素瘤细胞生长和凋亡的影响。方法:分别利用MTT、流式细胞术、化学发光、Western blotting以及免疫荧光染色等方法检测No-Glu和No-Gln对人恶性黑色素瘤A375细胞初级纤毛形成、增殖、ATP含量、细胞周期以及细胞凋亡等多方面的影响。结果:在No-Glu或No-Gln培养液中培养,A375细胞的细胞增殖率显著低于对照组(正常培养液)[(21.0±1.9)%或(46.2±9.8)%vs 100%,P<0.01或P<0.05]。No-Gln培养液使A375细胞纤毛形成阳性细胞率显著高于对照组[(16.8±2.3)%vs(6.2±1.0)%,P<0.01],G1期细胞减少(14.4±6.7)%(P<0.05)、S期细胞增加(75.0±1.9)%(P<0.05)。No-Glu培养液对A375细胞纤毛形成与G1和S期细胞比例均无显著影响。此外,No-Gln使A375细胞内ATP含量下调了(64.5±4.9)%(P<0.01),而No-Glu仅使ATP含量下降了(11.1±2.1)%(P>0.05)。No-Glu使A375细胞的凋亡率显著高于对照组[(26.1±1.5)%vs(6.1±7.1)%,P<0.01],并上调促凋亡蛋白Noxa、降低抗凋亡蛋白Mcl-1的表达水平。No-Gln对细胞凋亡率、Noxa和Mcl-1蛋白表达无明显影响。结论:No-Glu或No-Gln均可抑制A375细胞增殖,但No-Gln导致S期细胞周期阻滞、抑制ATP合成的作用更明显,而No-Glu诱导细胞凋亡的作用更强。
- 于田田张帆路遥李红霞谢敏刘庆平卢腾秦建中迟彦
- 关键词：黑色素瘤A375细胞葡萄糖谷氨酰胺
- 2-脱氧葡萄糖增强顺铂对人黑色素瘤细胞杀伤作用及其机制
- 2016年
- 目的：探讨2-脱氧葡萄糖（2-deoxy-glucose,2-DG）和顺铂（cisplatin）药物组合对人黑色素瘤细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：用MTT法检测细胞活力,Annexin-V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡。Western blotting检测相关蛋白表达。细胞内ATP含量用生物发光试剂盒检测。结果：不同浓度顺铂（5-25μmol/L）单药处理虽然能以剂量和时间依赖方式抑制A375细胞活力,但与2-DG（10 mmol/L）联合使用,顺铂处理浓度除5μmol/L外都显示增强对细胞活力的抑制作用。2-DG（10 mmol/L）单独处理并不诱导A375细胞出现明显死亡（〈10%）,顺铂（20μmol/L）单独作用导致50%左右的细胞死亡,而两者联合则导致大于80%的细胞死亡,与单独用药组比较差异显著（P〈0.01）。顺铂单药或与2-DG联合均诱导Caspase-3和PARP-1裂解,并抑制抗凋亡蛋白Mcl-1的表达。2-DG联合顺铂（20μmol/L）能明显抑制Ⅱ型己糖激酶表达,并且使细胞内ATP含量降低于对照组（6.3 vs 33.0μmol/mg）,与单药组比较差异显著（P〈0.01）。2-DG联合顺铂不诱导正常人黑色素细胞凋亡。此外该药物联合对另外三种人黑色素瘤细胞（SK-100,C8161和Mum-2C）也有增强杀伤的作用。结论：2-DG能特异地增强顺铂诱导人黑色素瘤细胞凋亡的敏感性,作用机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1表达,抑制肿瘤己糖激酶水平和ATP合成有关。
- 李红霞朱国方谢敏路遥薄俊霞刘庆平王若雨秦建中
- 关键词：黑色素瘤2-脱氧葡萄糖顺铂细胞凋亡三磷酸腺苷
- 2-脱氧-D-葡萄糖联合顺铂对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:研究2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)与顺铂(Cisplatin,Cis-DDP)单独及联合对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响。方法:培养Hela细胞,2-DG、Cis-DDP单独及联合作用于Hela细胞,MTT法检测细胞的存活率;流式细胞仪检测各组药物处理后Hela细胞的凋亡率;ATP实验检测各处理组ATP生成情况;Western blot测定AKT、Caspase-3、PARP-1、MCL-1蛋白表达水平。结果:2-DG、Cis-DDP单独及联合作用Hela细胞均可降低细胞活性,呈时间剂量依赖性,联合用药组与其他各组存活率之间具有显著差异(P<0.05);用药组比对照组细胞ATP生成量降低但24h差异无统计学意义,48h联合用药组ATP生成量明显低于其他各组,且差异具有统计学意义(P<0.05);用药组细胞凋亡率均大于对照组,联合用药组凋亡率大于单药组,且具有明显差异(P<0.05);Western blot显示,联合用药可明显降低AKT、PARP-1、MCL-1蛋白的表达量,并使PARP-1、Caspase-3蛋白分解。结论:2-DG、Cis-DDP可有效抑制肿瘤细胞增殖,诱导其凋亡,2-DG联合Cis-DDP抗肿瘤作用明显增强。
- 朱国方王若雨李红霞孙英明秦建中刘庆平
- 关键词：顺铂HELA细胞凋亡
- 富马酸二甲酯对人角质形成细胞HaCat生长和自噬的影响被引量：1
- 2016年
- 该文探讨了富马酸二甲酯（dimethyl fumarate，DMF）对人角质形成细胞HaCat增殖、细胞周期和细胞自噬的调节作用以及相关机理的影响。应用MTT实验和流式细胞术分别检测细胞增殖和细胞周期的变化。并用免疫荧光染色、Western blot技术检测自噬相关蛋白的水平与分布。结果显示，DMF在25μmol／L时，可较明显地抑制HaCat细胞的增殖，当浓度达到150μmol／L时，细胞几乎完全失去增殖能力。低剂量DMF（25～50μmol／L）同时也可显著抑制HaCat细胞DNA合成，与对照组相比，S期细胞减少50％（P〈0．01），而G1期细胞增高近20％（P〈0．05）；高剂量DMF（100μmol／L）可导致G2与M期阻滞（P〈0．01），而氧自由基抑制剂NAC（N-Acetyl—L—cysteine）预处理则几乎完全逆转这一现象。DMF处理诱导细胞出现明显的自噬特征，表现为LC3-II（microtubule associated protein 1 light chain 3-II）免疫荧光染色呈点状分布并与溶酶体颗粒重合，LC3蛋白质脂化为LC3-II以及自噬相关蛋白成熟型Cathepsin D、LAMPI（lysosome—associated membrane glycoprotein 1）、p62水平增加。此外，DMF对ERK（extracellular regulated protein kinases）、AKT（phosphatidylinositol 3 kinase）以及mTOR（mammalian target of rapamycin）信号相关蛋白的磷酸化也有显著的抑制作用。这些结果表明，DMF可显著抑制人角质形成细胞增殖、抑制DNA合成、诱导细胞发生自噬，其机理可能与DMF抑制AKT／mTOR、ERK信号功能有关。
- 李红霞张帆姚廷燕樊星王仁军刘庆平秦建中
- 关键词：富马酸二甲酯HACAT细胞自噬AKT/MTOR
- 沉默ERK增强A375黑素瘤细胞对TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨直接抑制细胞外信号调节激酶（extra cellular signal-regulated kinase,ERK）表达后,对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对黑素瘤细胞杀伤作用的影响及其作用机制。方法：用携带ERK特异或对照shRNA的慢病毒感染A375黑素瘤细胞,48 h后加入终浓度为100μg/ml基因重组TRAIL蛋白继续培养6h,收获细胞,碘化丙啶染色,用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和TRAIL受体的表达;Western blotting检测相关蛋白的表达水平。结果：亚型特异的ERK shRNA分别沉默ERK1或ERK2,导致A375细胞出现G_1期阻滞（对照shRNA组的G_1期细胞比例为71%,ERK1、ERK2、ERK1＋2 shRNA组分别增加到85%、90%和81%,P〈0.01）;S期细胞从对照组的11%减少到2%左右（P〈0.001）、G_2/M期细胞也从对照组的17%减少到3%（P〈0.01）。细胞周期改变伴有P21、P27蛋白上调和Cyclin D1蛋白降低,但未见明显的细胞凋亡。经对照shRNA和TRAIL处理的细胞,仅有15%的凋亡率,而ERK shRNA和TRAIL联合处理则使凋亡率达到40%~60%（P〈0.01）。抑制ERK蛋白表达能显著上调细胞表面TRAIL受体DR4的表达（从对照组32%增加到75%~80%,P〈0.01）,但DR5变化不明显。ERK抑制还明显降低A375细胞的葡萄糖转运受体1（Glut 1）和己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）的蛋白表达水平。结论：直接抑制ERK不仅可以抑制肿瘤细胞周期的进展,而且可以增强TRAIL对A375黑素瘤细胞的杀伤作用,其机制与上调细胞表面DR4的表达和干扰肿瘤细胞糖代谢有关。
- 李红霞张帆李坤刘庆平秦建中
- 关键词：黑素瘤A375细胞细胞外信号调节激酶TRAIL细胞凋亡
- 2-D-脱氧葡萄糖对二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响及机制被引量：1
- 2019年
- 目的观察己糖激酶抑制剂2-D-脱氧葡萄糖(2-DG)对降糖药二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的2-DG、二甲双胍单药或联合作用于人结肠癌HT-29细胞,采用台盼蓝染色法测算细胞死亡率观察细胞活力,MTT掺入法测算细胞存活率观察细胞增殖能力,流式细胞术以Annexin V/PI双染色法测算细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞中的蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(TOR)信号通路相关蛋白[AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、核糖体p70S6激酶(p70S6K)、磷酸化核糖体p70S6激酶(p-p70S6K)]、自噬相关蛋白p62。结果不同浓度2-DG(1、5、10 mmol/L)和二甲双胍(5、10 mmol/L)联合处理24 h后,HT-29细胞死亡率均高于单药处理细胞(P均<0. 05);在2-DG、二甲双胍均为10 mmol/L时,HT-29细胞死亡率最高(P均<0. 01)。以10mmol/L 2-DG与不同浓度的二甲双胍(0、1、5、10、15、20 mmol/L)联合处理48 h,在二甲双胍浓度≥5 mmol/L后HT-29细胞存活率低于单药处理的细胞(P均<0. 05),10 mmol/L时HT-29细胞存活率最低(P均<0. 01),20 mmmol/L时HT-29细胞存活率未继续明显降低。不同浓度2-DG(5、10 mmol/L)和10 mmol/L二甲双胍联合处理24 h,仅10 mmol/L 2-DG与二甲双胍处理时HT-29细胞凋亡率高于单药处理细胞(P均<0. 05),且细胞中p-AKT、pp70S6K、p62蛋白相对表达量低于单药处理细胞(P均<0. 05)。结论 2-DG能增强二甲双胍抑制人结肠癌HT-29细胞活力、增殖和诱导细胞凋亡的作用,以10 mmol/L 2-DG时增强作用最明显;其作用机制可能与两者协同抑制AKT/mTOR信号通路及细胞自噬有关。
- 谢敏李红霞顾馨仪郝舒捷王仁军王仁军刘庆平秦建中
- 关键词：二甲双胍细胞自噬
