刘晓文
- 作品数：4 被引量：25H指数：3
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- 兔牙髓干细胞与Pluronic F-127嵌段共聚物的体外相容性被引量：2
- 2016年
- 目的探讨牙髓干细胞(DPSC)与Pluronic F-127水凝胶生物相容性。方法酶解组织块法获得DPSC,镜下观察细胞形态。制备20%、25%、30%(w/v)的Pluronic F-127水凝胶,扫描电镜(SEM)观察水凝胶支架空间形态,检测支架材料的溶胀率,凝胶化时间。用不同浓度Pluronic F-127水凝胶包封DPSC进行三维培养,并以普通培养皿的二维培养作为对照,镜下观察细胞生长情况。培养第1、3、5、7天通过噻唑蓝(MTT)法检测支架对DPSC增殖的影响。将最佳浓度的Pluronic F-127用于包封DPSC,常规矿化液诱导14 d进行茜素红、甲苯胺蓝染色、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨相关骨桥蛋白(OPN)、Ⅱ型胶原,以评价Pluronic F-127对DPSC成骨及成软骨分化的影响。数据分析采用单因素方差分析。结果成功分离并纯化DPSC,细胞在支架内生长良好;MTT结果显示:第1天各组间差异无统计学意义;第3天,20%Pluronic F-127组细胞增殖A标准值(0.774±0.095)显著高于其他培养组(A_(对照)=0.353±0.096、A_(25%PF)=0.559±0.053、A_(30%PF)=0.532±0.093),差异有统计学意义(F=15.993,P=0.000);第5天时,20%Pluronic F-127组细胞增殖A标准值(0.554±0.510)显著高于其他培养组(A_(对照)=0.260±0.097、A_(25%PF)=0.353±0.049、A_(30%PF)=0.212±0.049),差异有统计学意义(F=20.821,P=0.000)。成骨及成软骨诱导后茜素红及甲苯胺蓝染色呈阳性,对照组呈阴性。实时荧光定量PCR显示,三维诱导组m RNA相对表达水平显著高于其他培养组,差异有统计学意义(F_(OPN)=65.576,P_(OPN)=0.000;F_(COL-2)=38.382,P_(COL-2)=0.000)。结论 20%Pluronic F-127适合DPSC的培养,并可支持其生长及分化。Pluronic F-127可作为DPSC的生物载体,有望成为理想的组织工程支架材料。
- 帕尔哈提.阿布肚热合曼白尔娜.吾守尔木合塔尔.霍加刘晓文
- 转化生长因子-β_3对兔牙髓干细胞增殖及骨向分化的影响被引量：15
- 2016年
- 目的探讨转化生长因子-β3（transforminggrowthfactor-β3，TGF-β3）对体外培养的兔牙髓干细胞（dentalpulpstemceils，DPSCs）增殖和分化的影响。方法采用酶解组织块法将兔DPSCs分离培养获得DPSCs，光镜下行形态学观察；将体外培养的第3代DPSCs分为5组，分别为对照组、20μg／LTGF-β3组、40μg／LTGF-β3组、80tag／LTGF-β3组和100μg／LTGF-β3组，分别加入0、20、40、80、100μg／LTGF-β3；采用MTT法检测5组DPSCsA490值，采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物骨钙素（osteocalcin，OC）、I型胶原酶（collagenI，Col—I）、骨涎蛋白（bonesialoprotein，BSP）表达情况，采用茜素红染色检测出现矿化结节情况，并进行比较。结果兔DPSCs呈集落状生长，在体外有一定克隆形成能力；对照组及20、40、80、100μg／LTGF-β3组兔DPSCsA490值分别为0．34±0．55、0．34±0．19、0．33±0．47、0．334±0．30、0．34±0．47，各组间两两比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；80、100μg／LTGF—B3组诱导后第3天出现Col—I阳性表达，第7天开始消失，第5-7天出现BSP阳性表达，第7-14天出现0c阳性表达，第7天出现矿化结节；40μg／LTGF-β3陆组第5-7天均有Col—I阳性表达，第7天出现BSP阳性表达，第14天出现OC阳性表达，第14天出现矿化结节；20μg／L组第7天出现Col—I阳性表达，第14天消失，第14天出现BSP阳性表达，第21天出现OC阳性表达，第21天出现矿化结节；对照组Col-I、BSP和OC均为阴性，未出现矿化结节。结论TGF-β3风对体外培养的兔DPSCs增殖无影响，但对兔DPSCs向成骨细胞分化能力有一定促进作用，并在一定范围内呈浓度依赖关系。
- 刘晓文木合塔尔.霍加麦麦提依明.哈力克帕尔哈提.阿布肚热合曼庄友梅张晓莉买布拜木.买买提依明
- 关键词：牙髓干细胞转化生长因子-Β3增殖
- 肝素促进转化生长因子-β_3在体外诱导兔牙髓干细胞成骨向分化中的作用被引量：7
- 2016年
- 目的探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_3联合肝素在体外诱导兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化中的能力。方法新西兰幼兔4只,采用酶解组织块法分离培养兔DPSCs,传代培养至第3代兔DPSCs,分为空白对照组、TGF-β_3组和TGF-β_3+肝素组;空白对照组正常培养,TGF-β_3组在细胞培养基中加入20μg/L TGF-β_3,TGF-β_3+肝素组在细胞培养基中同时加入20μg/L TGF-β_3和5u/mL肝素。采用碱性磷酸酶(alkailine phosphate,ALP)试剂盒检测各组兔DPSCs成骨向诱导后第7、14天细胞内ALP活性,细胞爬片采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物RUNT相关转录因子2(runt related transcription factor 2,RUNX-2)和骨钙素(osteocalcin,OC)表达情况,采用茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果兔DPSCs在诱导体系中生长状态良好;TGF-β_3+肝素组第7、14天ALP活性[(27.20±1.01)、(29.06±1.39)u/(mg·pro)]高于TGF-β_3组[(12.69±1.03)、(9.44±1.05)u/(mg·pro)]和对照组[(5.96±3.68)、(6.10±3.66)u/(mg·pro)](P<0.01),TGF-β_3组高于对照组(P<0.01);TGF-β_3组和TGF-β_3+肝素组成骨诱导第7天RUNX-2开始出现阳性表达,第14天OC有阳性表达,对照组均为阴性;第21天茜素红染色对照组为阴性,TGF-β_3组为阳性,TGF-β_3+肝素组为强阳性。结论肝素有促进TGF-β_3体外诱导兔DPSCs成骨向分化的能力。
- 麦麦提依明.哈力克木合塔尔.霍加刘晓文帕尔哈提.阿布都热合曼
- 关键词：牙髓干细胞转化生长因子-Β3肝素
- 体外诱导聚氧乙烯-聚氧丙烯醚共聚物水凝胶内兔牙髓干细胞成骨向分化的研究被引量：6
- 2016年
- 目的 探讨牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSC）与聚氧乙烯-聚氧丙烯醚嵌段共聚物（Pluronic F-127）水凝胶的生物相容性,以及DPSC在Pluronic F-127水凝胶支架内的成骨活性,以期为颌骨缺损的组织工程修复提供依据.方法 酶解组织块儿法分离DPSC,有限稀释法进行纯化,镜下观察细胞形态.制备质量浓度为20％的Pluronic F-127水凝胶,扫描电镜观察水凝胶支架材料的微形态.用Pluronic F-127水凝胶包封DPSC进行三维培养,并以普通培养皿的二维培养作为对照组,光学显微镜下观察细胞生长情况.培养第1、3、5、7天甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl terazolium,MTT）法检测支架对细胞增殖活性的影响.常规成骨矿化液诱导14d进行茜素红、免疫细胞化学染色,荧光定量PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2,RUNX2）、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白,以评价牙髓干细胞的成骨活性.结果 成功分离并纯化DPSC,二维及三维培养的细胞镜下观察均生长良好,扫描电镜图显示多孔管状结构.培养第1、3、5、7天时A570值：二维培养DPSC分别为0.30±0.06、0.30±0.17、0.35±0.04、0.25±0.06,三维培养的DPSC分别为0.36±0.06、0.54±0.18、0.70±0.10、0.32±0.10,三维培养DPSC的增殖率显著高于二维培养（P＜0.05）,DPSC的细胞活性均在培养第5天时达峰值.常规矿化液诱导14d后茜素红染色结果显示：对照组及三维培养组矿化结节计数分别为（6.8±1.3）和（7.0±1.2）个,两组差异无统计学意义（P＞0.05）.免疫细胞化学染色显示,对照组及三维培养组DPSC中RUNX2、Ⅰ型胶原呈强阳性,骨钙蛋白染色呈弱阳性.荧光定量PCR结果显示：三维培养组Ⅰ型胶原相对表达量显著高于对照组（P=0.015）,其余基因相对表达水平组间差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 Pluronic F-127具有良好的生物相容性,可支持DPSC的成骨向分化;Pluronic F-t27可�
- 帕尔哈提·阿布肚热合曼木合塔尔·霍加多力昆·吾甫尔麦麦提依明·哈力克刘晓文
- 关键词：水凝胶成骨细胞牙髓干细胞
