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多重核酸检测试剂盒RespiFinder■ 2SMART在检测12种呼吸道感染病毒中的临床应用性能评价被引量：3: 2020年; 目的评价多重核酸检测试剂盒RespiFinder■2SMART在临床呼吸道感染病原体检测中的性能。方法选取2012年5月至2015年5月青海省发热呼吸道症候群病例哨点医院收集的471份鼻咽拭子作为研究材料,采用单管多重核酸检测试剂盒RespiFinder■2SMART及实验室自建方法对12种病毒进行平行检测,分析两种方法的检测结果一致性。对于不一致的样本采用巢式PCR结合测序或单重荧光定量PCR方法进行分析。以实验室检测结果为参照,分析试剂盒的阳性预测值、阴性预测值、灵敏度、特异度及约登指数等指标,综合评估试剂盒的性能。结果两种方法对12种呼吸道病毒的检出符合率均超过95.00%。对结果不一致的样本(10.20%,48/471)复核,证实了试剂盒检出的HCoV-229E、HAdV和HRV/HEV部分样品为真阳性(38.00%,23/48)。以实验室检测结果为参考标准,试剂盒对大部分病原检出的阳性预测值和阴性预测值均可达到100.00%,但检出HCoV-229E和HAdV的阳性预测值偏低(50.00%和87.93%,95%CI为2.56~97.44和77.13~94.03);试剂盒对大部分病原体检出的灵敏度和特异度均可达到100.00%,但检出PIV-1、PIV-2和RSV-A的灵敏度偏低(58.33%,57.14%,64.28%,95%CI为31.95~80.67,99.17~100.00,38.76~83.00);试剂盒检测大部分病原的约登指数均超过0.98,但检测PIV-1、PIV-2和RSV-A的约登指数分别为0.58、0.57和0.64。结论RespiFinder■2SMART试剂盒用于临床样本中HCoV、HMPV、HAdV、HRV、PIV-3及RSV-B的检测性能好,但对于PIV-1,PIV-2和RSV-A的检测灵敏度还有待提高。; 刘高山李红牛培华黄保英谭文杰; 关键词：呼吸道病毒性能评价

中东呼吸综合征冠状病毒多重荧光定量RT-PCR检测技术的建立被引量：12: 2016年; 建立中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染的筛查与诊断应用的核酸检测方法。本研究建立了基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重的三种荧光定量RT-PCR检测技术方法,分别与前期建立的单重荧光定量RT-PCR(upE或N2)检测方法做了比较,并且采用MERS-CoV病毒毒株、上海提供的口岸发烧病人样本以及由首例中国MERS-CoV韩国地区输入病例的咽拭子样品和全血的样品做了临床验证。结果显示:采用MERS-CoV病毒毒株作为模板,三种新建立的多重检测方法与单重荧光定量RT-PCR检测方法最低检测限均能达到10PFU/mL,且与其他常见呼吸道病毒的阳性样本均无交叉反应,特异性良好。对临床样品的验证中,上海病人咽拭子样本均为阴性,而中国首例MERS输入病例的急性期咽拭子样品均为阳性,而全血样的检测结果显示N2靶标有较高检出率,明显优于基于upE单一靶标。本研究所建立的基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重荧光定量RT-PCR检测技术方法用于MERS-CoV感染的实验室诊断,具有较高灵敏度与特异性及适用性。; 牛培华陆柔剑蓝佳明刘高山王文玲谭文杰; 关键词：冠状病毒荧光定量RT-PCR

上海市重症急性呼吸道感染儿童中可检出多种型别的人腺病毒被引量：9: 2016年; 目的了解上海市重症急性呼吸道感染（SARI）儿童中人腺病毒（HAdV）的感染情况及其分型特征。方法2013年6月至2014年3月从上海复旦大学附属儿科医院收集441份重症急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物（NPAs）。采用巢式PCR的方法进行人腺病毒的检测，对阳性样本进行分型分析及基本流行病学特征分析。结果人腺病毒共检出51例（11．6％，95％CI8．6％～14．6％）阳性，以0．5—1岁之间的患儿感染率较高，分型分析发现感染者中B组所占比例最高，共33例（64．7％），其中HAdV-3共17例（33．3％），HAdV-7共检出16例（31．4％）；其次为C组共14例（27．5％）；HAdV—D（HAdV-8）与HAdV—E（HAdV-4）各1例；HAdV—F（HAdV-41）检出2例。结论人腺病毒在上海市重症急性呼吸道感染患儿中有较高的感染率．存在多种基因型且以HAdV—B中的HAdV．3、7型感染最为常见。; 李亚敏刘高山周为民赵彦杰李玉川沈军谭文杰; 关键词：儿童人腺病毒分型检测

中东呼吸综合征冠状病毒流行病学进展被引量：3: 2016年; 中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome，MERS）是由中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavims，MERS．CoV）引起的一种严重呼吸道传染病。本文将对MERS病原学特征与流行病学特征及研究进展进行简要综述。; 刘高山谭文杰; 关键词：冠状病毒流行病学

北京、上海严重急性呼吸道感染儿童中肠道病毒D68的检出与基因特征分析被引量：13: 2016年; 为了解肠病毒D68（EV-D68）在北京、上海地区严重急性呼吸道感染（SARI）儿童中的流行情况和分子特征。本研究采集2008～2010年北京儿童医院SARI儿童呼吸道样品259份,2013～2014年上海复旦大学附属儿科医院SARI儿童呼吸道样品441份,采用套式RT-PCR结合测序方法检测筛选EV-D68阳性样品,设计EV-D68全基因组通用引物,对EV-D68阳性样品进行全基因组扩增,收集NCBI核酸数据库中目前所有的EV-D68全基因组序列进行序列分析,比较EV-D68中国和美国流行株的差异。结果发现：北京地区检测EV-D68阳性样品1例,阳性率为0.4%,上海地区检测EV-D68阳性样品4例,阳性率为0.9%。结合目前中国已上传的所有EV-D68相关序列,分析表明：目前中国地区流行的EV-D68主要属于Clade A2或Clade B2亚型,不同于美国的Clade A1、Clade B1、Clade B4和Clade B5亚型,另外EV-D68部分基因进化分析时出现树形结构冲突现象;上述结果表明目前EVD68在北京、上海地区的SARI儿童群体中的感染率较低（5/700;〈1%）;中国与美国流行的EV-D68毒株属于不同的分支,差异较大,部分序列分析表明EV-D68病毒可能存在组内重组现象。; 王延群赵彦杰沈军谢正德李亚敏刘高山楼永良陆柔剑谭文杰

人冠状病毒OC43易感细胞系的高效筛选: 2017年; 为了筛选获得可用于人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)分离与研究的细胞系,本研究利用表达海肾荧光素酶基因的重组HCoV-OC43(rOC43-ns2DelRluc)对28种常见真核细胞系进行了易感性高效筛选研究,进一步利用亲本病毒HCoV-OC43-WT进行了细胞病变效应的观察,并采用荧光定量PCR进行复制动力学分析。实验结果显示:18种细胞对HCoV-OC43易感,HCoV-OC43在其中5种细胞中表现出较强的复制能力,包括BHK-21、293T、Huh7.0、RD等常见贴壁细胞。复制高峰在第5d出现,但HCoV-OC43感染的细胞系在6d内均未观察到典型细胞病变效应。本研究为今后HCoV-OC43的复制规律、致病机制的研究以及筛选广谱抗冠状病毒药物的提供了参考细胞系。; 申梁朱娜牛军伟黄保英刘高山牛培华谭文杰; 关键词：易感性细胞系

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刘高山

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