吕玉伟
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金陕西省教育厅科研计划项目陕西省教育厅省级重点实验室科研与建设计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 贻贝粘蛋白Mgfp-5基因在烟草中的表达
- 贻贝粘蛋白(Mussel Adhesive Protein, MAP)是海洋软体动物贻贝(Mytilidae)足部的足丝腺分泌的一类具有粘性的蛋白质,也称贻贝足丝蛋白(Mussel foot protein, Mfp),...
- 吕玉伟
- 关键词：烟草
- 文献传递
- 贻贝粘蛋白Mgfp-5基因在烟草中的转化被引量：4
- 2016年
- 贻贝(Mytilus galloprovincialis)足腺分泌的粘蛋白Mgfp-5,是一种粘合强度高、生物相容性好的生物粘合剂,可以广泛应用于医学、化学表面以及海洋工程等领域。天然获取Mgfp-5时易固化且含量低,难获得、成本高制约了其应用,所以更多学者尝试基因工程方法获得粘蛋白Mgfp-5,其中鲜见借助植物基因工程表达Mgfp-5的报道。本研究构建携带Mgfp-5基因的植物表达载体p RI101-Mgfp,以秦烟95烟草叶片为受体,通过根癌农杆菌LBA4404介导方法,遗传转化外植体,历经转染、抗性筛选及分子生物学鉴定,获得转基因烟草植株。研究表明正确构建的植物表达载体p RI101-Mgfp,可以在外植体预培养3 d,农杆菌菌液OD600=0.6,侵染10 min,共培养3 d,20 mg/L卡那霉素抗性筛选培养的条件下,携带外源Mgfp-5基因,顺利转化进入烟草小苗,经过PCR、RT-PCR检测目标基因Mgfp-5在转化小苗基因组中可以整合及表达,得到转Mgfp-5基因烟草植株,生根后移栽成活。本研究为粘合蛋白Mgfp-5的表达、提取纯化及功能等深入研究提供参考,也是优质粘合剂粘合蛋白材料获得的一条新途径。
- 吕玉伟张雨靖吕亚维王睿劼杨泽熵王英娟
- 关键词：根癌农杆菌烟草
- 贻贝粘蛋白Mgfp-5基因重组表达载体的构建方法及转化菊苣
- 本发明公开了一种含有贻贝粘蛋白<I>Mgfp</I>‑5基因的植物表达载体，其将贻贝粘蛋白<I>Mgfp</I>‑5基因与植物表达载体pRI101‑AN重组得到表达质粒pRI101‑Mgfp，所构建的植物表达载体pRI1...
- 吕亚维王睿劼吕玉伟杨泽熵张雨靖王英娟
- 文献传递
- 贻贝蛋白Mgfp-5的原核表达与纯化被引量：2
- 2016年
- 贻贝(Mytilus galloprovincialis)足丝中黏附蛋白,是一种黏合强度高、生物相容性好、优质的生物黏合剂,可以应用于医学、表面化学、海洋工程等领域,其中富含DOPA(多巴,3,4-二羟基苯丙氨酸)的贻贝足丝蛋白5(Mytilus galloprovincialis foot protein type 5,Mgfp-5)显著表现出此特性。天然获取Mgfp-5含量低,易固化,纯化困难,越来越多学者尝试基因工程获得黏蛋白。文中构建重组质粒p ET28a-mgfp,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白Mgfp-5。为得到高质量的Mgfp-5蛋白,优化了Mgfp-5蛋白诱导表达参数:菌液OD_(600)=0.8,诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷(IPTG)0.8 mmol/L,37℃,诱导8h;优化镍离子亲和层析纯化蛋白Mgfp-5最佳条件为:Elution Buffer的p H为7.0,500 mmol/L咪唑。Western Blot鉴定到重组Mgfp-5可以特异性表达。该研究为得到大量Mgfp-5蛋白奠定了基础,为加速黏蛋白的黏附机理及生物医学黏合剂的开发提供参考。
- 吕玉伟吕亚维杨泽熵王睿劼张雨靖王英娟
- 关键词：贻贝原核表达纯化
