魏春梅
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SPARC基因过表达对SKM-1细胞凋亡的影响
- 2014年
- 构建SPARC基因过表达载体,转染人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞系SKM-1细胞,探讨SPARC基因过表达对人MDS细胞系SKM-1细胞凋亡的影响。以pcDNA-SPARC为引物,PCR扩增SPARC基因;将靶基因克隆入慢病毒载体pGC-GV,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC,测序检测正确性;将构建载体pGC-GV-SPARC转染人MDS细胞系SKM-1,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR检测SKM-1细胞中SPARC mRNA表达,Western blot检测SPARC蛋白表达,MTS法测定小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)对实验组增殖抑制的影响,Annexin V检测SPARC基因转染后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果显示,构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC转染效率为(64.25±1.42)%;转染后,SPARC mRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组增多。小剂量阿糖胞苷对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显增高,加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组明显增高。由此说明,作者成功构建了携带人SPARC基因的慢病毒载体,转染人SKM-1细胞系后稳定表达SPARC基因,SPARC过表达可抑制细胞增殖,且联合小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)更有效地抑制SKM-1细胞的增殖,并诱导其凋亡。
- 年青魏春梅黄婧但春莉肖青杨泽松王利
- 关键词：阿糖胞苷慢病毒载体骨髓增生异常综合征
- miR-143通过抑制AF9调控SKM-1细胞增殖和凋亡被引量：1
- 2018年
- 目的探讨miR-143在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)中的表达情况及AF9对人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测收集的33位MDS/AML患者以及11位健康人(健康对照)的骨髓标本中miR-143的表达;细胞实验分为过表达组(SKM-1细胞感染含LV-hsa-miR-143的慢病毒载体)、低表达组(SKM-1细胞感染含LV-hsa-miR-143-inhibitors的慢病毒载体)和阴性对照组(SKM-1细胞感染含空病毒LV-control的慢病毒载体),分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测各组SKM-1细胞增殖、周期和凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测miR-143对下游靶基因AF9在转录水平的影响;Western blot测定miR-143对下游靶基因AF9蛋白表达水平的影响。结果与健康对照比较,MDS患者的miR-143相对表达水平明显降低(P <0. 05);过表达组的光密度值在第3天为(0. 562±0. 069),明显低于阴性对照组(P <0. 05);低表达组的光密度值在第3天为(1. 537±0. 094),明显高于阴性对照组(P <0. 05);过表达组G0/G1期细胞比例为(57. 92±3. 58)%,明显高于阴性对照组(P <0. 05);低表达组G0/G1期细胞比例为(29. 73±2. 44)%,明显低于阴性对照组(P <0. 05);过表达组细胞凋亡率为(29. 80±2. 53)%,明显高于阴性对照组(P <0. 05);而低表达组细胞凋亡率为(5. 17±1. 04)%,明显低于阴性对照组(P <0. 05);miR-143可以显著抑制AF9 3’-UTR野生型的报告基因活性;低表达组AF9蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P <0. 05)。结论 miR-143在MDS患者中的相对表达水平明显减低;过表达miR-143后骨髓增生异常综合征SKM-1细胞增殖活性降低、G0/G1期细胞阻滞增多、凋亡率增加;同时miR-143能够负性调节其靶基因AF9。
- 崔佳奇魏春梅邓琳丽王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征MIR-143细胞凋亡细胞周期
- miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响
- 2016年
- 目的研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响。方法我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞。然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达。用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证。结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)%,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)%、(2.78±1.04)%,P<0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高。用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达。结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达。
- 匡兴怡魏春梅张涛王利
- 关键词：骨髓增生异常综合征细胞凋亡
- CALR基因在MDS患者中的表达及其对细胞生长和凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 该文研究了钙网蛋白(Calreticulin,CALR)基因在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者中的表达,并构建了CALR-RNAi慢病毒载体,观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞生长和凋亡的影响。反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)检测34例低危、高危MDS患者、8例非MDS患者骨髓标本及细胞株中CALR的表达;设计3条含靶向沉默CALR基因的Oligo DNA,与酶切后的GV248质粒连接形成表达载体,经筛选、鉴定后得到3种GV-CALR-RNAi重组慢病毒载体。分别转染SKM-1细胞,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR及Western blot验证干扰效果,筛选出最佳靶向序列。然后,使用含最佳靶向序列的慢病毒载体转染SKM-1,CCK-8法和Annexin V/7-AAD双染法分别观察其对细胞生长和凋亡的影响,Western blot检测caspase-3的表达。34例低危、高危MDS患者中有31例检测到CALR基因表达较正常组明显降低(P<0.01)。成功构建了3种CALR-RNAi慢病毒载体,流式细胞术检测平均转染效率在70%以上。RT-PCR及Western blot检测结果显示,CALR-RNAi(3)慢病毒载体敲除效率最高,为最佳靶点。结果发现,CALR-RNAi(3)转染SKM-1后可促进细胞生长、抑制细胞凋亡(P<0.05),同时CALR-RNAi(3)组的G0/G1期细胞减少,S期细胞增多。Western blot证实凋亡因子cleaved-caspase-3的水平降低。CALR基因在MDS中起到抑癌基因的作用,构建的GV-CALR-RNAi(3)重组慢病毒载体有利于进一步研究CALR基因在MDS中的作用机制。
- 张涛匡兴怡魏春梅张端众王利
- 关键词：慢病毒载体RNA干扰细胞生长骨髓增生异常综合征
