沈琦
- 作品数:6 被引量:41H指数:3
- 供职机构:复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金霍英东基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- D-box附近泛素化位点突变对Cdc20介导的Sp100蛋白降解的影响被引量:1
- 2015年
- 前期的研究发现Cdc20介导Sp100通过泛素-蛋白酶体途径降解,Sp100中的D-box在底物识别过程中具有重要作用.尽管在PML和DAXX中都存在典型的D-box序列,但是这两种蛋白都不能被Cdc20所识别.本研究中,我们构建了一系列含D-box的Sp100截断体来探讨Cdc20底物识别的必要序列.研究发现GFP-Sp100(152-182)截断体包含D-box但是不能被APC/C-Cdc20降解.GFP-Sp100(151K→G)突变潜在泛素结合位点后,Sp100降解显著受到抑制.远离D-box的潜在泛素化位点(217K,219K,225K)破坏后对Sp100降解没有影响.我们的结果表明,Sp100蛋白中D-box附近泛素化位点(151K)在Cdc20介导的蛋白降解中是必要的.
- 阮婕王然李一忱沈琦薛京伦陈金中
- 关键词:SP100
- 几何活动轮廓模型用于高分辨率遥感影像海岸线自动提取被引量:21
- 2012年
- 潮湿的潮滩以及近陆浑浊的海水往往使得遥感影像中的海岸线表现为模糊边界,此外潮滩表面复杂的微地形以及大量潮沟存在,使得传统基于边缘检测或分类的海岸线提取方法都难以获得连续、完整的岸线.针对上述问题,提出了一种结合区域信息改进的几何活动轮廓模型从遥感影像中快速、自动提取海岸线的方法.该方法首先利用二维最大方差阈值化分割并辅以形态学滤波对海岸线进行粗定位,以此作为初始演化轮廓,再利用改进的几何活动轮廓模型对海岸线进行精确提取.通过SPOT5全色影像的仿真试验证明该方法能够快速、准确地提取海岸线,得到的矢量岸线可直接用于地理信息系统(GIS)分析.
- 沈琦汪承义赵斌
- 关键词:高分辨率遥感影像海岸线几何活动轮廓模型水平集
- 利用精原干细胞建立人凝血因子Ⅸ转基因小鼠被引量:13
- 2003年
- 用玻璃针将Effectene^(TM)包裹的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达载体注入小鼠的曲精细管. 通过PCR和Southern印迹法对子代41只小鼠进行鉴定,有2只小鼠的基因组中整合有hFⅨ基因表达框架,整合率为4%(2/41).通过ELISA方法在其中1只小鼠的血浆中检测到hFⅨ的表达,表达量为4.6 ng/mL.实验证明,精原干细胞法是建立转基因动物的有效途径,为乳腺反应器的研究提供了另一个技术手段. 同时也为通过生殖细胞途径治疗血友病B提供了新的选择.
- 王宁陈晓光姚纪花沈琦薛京伦
- 关键词:精原干细胞转基因基因组基因表达
- 小鼠造血干细胞的分离、培养及重组慢病毒载体介导的离体hFⅨ基因表达被引量:1
- 2005年
- 造血干细胞是基因治疗理想的靶细胞之一,尤其适用于遗传性血液病.而重组慢病毒载体能高效感染造血干细胞,成为造血干细胞途径基因治疗的理想载体.从小鼠骨髓细胞中分离出单个核细胞(MNCs)进行体外悬浮培养,并用免疫磁珠法分离得到高纯度的小鼠Lin-CD117+造血干细胞(HSCs).体外悬浮培养期间,添加细胞因子的造血干细胞的细胞数和集落数逐渐增加,而未添加细胞因子的对照组的细胞数量无明显增加,细胞集落递减.用磷酸钙介导的共转染法制备了携带FⅨ基因的FUXW重组慢病毒,用慢病毒载体分别感染从ICR小鼠和C57小鼠中分离得到的MNCs,7d后测得细胞上清中hFⅨ的表达量分别为41.7±4.2和34.5±6.6ng/mL,而慢病毒感染C57小鼠造血干细胞,添加细胞因子组上清中hFⅨ的表达量为46.6±5.7ng/mL,不添加细胞因子组为33.3±4.8ng/mL.实验结果表明,重组FUXW慢病毒载体可有效感染小鼠单个核细胞和Lin-CD117+造血干细胞,添加细胞因子可提高转移基因的表达量.
- 姚恒美陈浩明黄璐沈琦贾韦国薛京伦
- 关键词:单个核细胞重组慢病毒载体
- 结核分枝杆菌EF4蛋白在应激条件下的功能研究
- 2018年
- 目的探讨结核分枝杆菌EF4蛋白在应激条件下的功能表现。方法将编码结核分枝杆菌EF4蛋白的pSMT-EF4质粒转入大肠杆菌BL21,使其表达结核分枝杆菌EF4蛋白,观察在不同应激条件下的生长情况,绘制其生长曲线。结果分别在含氨苄青霉素、G418和链霉素的培养基中,表达结核分枝杆菌EF4蛋白的大肠杆菌BL21的生长情况好于未表达结核分枝杆菌EF4蛋白的对照组,分别在6h、9h、2h后表现出显著性差异;在含H2O2以及pH3、20℃和45℃的培养基中,两者的生长情况无显著性差异。结论带有过表达结核分枝杆菌EF4蛋白突变的大肠杆菌BL21对抗生素类药物产生了一定的耐药性;结核分枝杆菌EF4蛋白没有直接参与氧化、酸性和温度的应激响应。
- 顾晔星陈金中沈琦
- 关键词:结核分枝杆菌抗生素耐药性
- 尾静脉大容量快速注射法介导的人凝血因子Ⅸ基因在小鼠肝内的高效表达被引量:6
- 2003年
- 尾静脉大容量快速注射裸质粒DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达,采用此方法将人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达质粒pCMV-hFⅨ2.2 mL于7 s内导入小鼠体内,hFⅨ在小鼠体内表达水平最高为2921 ng/mL(血浆).hFⅨ表达水平与裸质粒DNA注射剂量呈正相关,重复注射的hFⅨ表达水平偏低(最高1459 ng/mL).PCR检测发现小鼠多种器官中存在hFⅨ cDNA,RT-PCR和免疫组化切片检测表明,hFⅨmRNA和蛋白主要在肝脏中表达.转氨酶水平与病理切片检测表明,注射1 d后5%的肝脏细胞受到损伤,但在3~10 d内恢复.研究结果表明,尾静脉大容量快速注射法能够介导hFⅨ在小鼠体内高水平表达,为基因治疗研究提供了一项简便而实用的动物实验手段.
- 贺晨霞冯登敏陈立陈浩明姚纪花沈琦卢大儒薛京伦吴文君丁友法
- 关键词:基因转移裸质粒基因治疗血友病