付婷
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 雷替曲塞通过诱导自噬增强耐药结直肠癌细胞的敏感性及机制研究被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨雷替曲塞对顺铂耐受的结直肠癌细胞(R-HCT116)化疗敏感性的影响,并初步探究其分子机制。方法:建立顺铂耐受的结直肠癌细胞株R-HCT116,CCK-8法检测结直肠癌细胞(HCT116)和R-HCT116细胞活力的影响;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测各组R-HCT116细胞凋亡情况;通过透射电子显微镜观察各处理组R-HCT116细胞自噬体;免疫荧光染色检测各处理组R-HCT116细胞中LC3表达;蛋白免疫印迹法检测分析自噬蛋白及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果:不同浓度的雷替曲塞(0.1、0.5、1.0、2.0μg·ml^(-1))处理HCT116细胞48 h和72 h,细胞存活率下降且呈剂量依赖性(P<0.05);与顺铂组比较,使用0.5、1.0、2.0μg·ml^(-1)的雷替曲塞联合20μg·ml^(-1)顺铂作用的R-HCT116细胞存活率下降,细胞凋亡率上升,细胞中自噬体数量增加,LC3表达荧光强度增加,Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达增高而P62蛋白表达降低;细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR均降低(均P<0.05)。结论:雷替曲塞能明显增强结直肠癌细胞HCT116细胞对顺铂化疗敏感性其机制可能与增强细胞自噬有关。
- 熊毅付婷
- 关键词：雷替曲塞顺铂结直肠癌自噬
- TRPM8通道介导的自噬调节可能通过JNK信号通路影响肾癌细胞的存活被引量：3
- 2020年
- 目的:探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)与肾癌细胞增殖及凋亡的关系。方法:qRT-PCR检测肾癌细胞(A498、GRC-1、786-0)中TRPM8的表达水平。利用shRNA转染A498细胞来构建TRPM8低表达的稳定细胞株,qRT-PCR和Western blotting验证shRNA的干扰效率。细胞集落形成实验检测沉默TRPM8后A498细胞的增殖能力;流式细胞术检测沉默TRPM8后A498细胞的凋亡能力;自噬检测试剂盒检测沉默TRPM8后A498细胞的自噬通量的变化;Western blotting检测沉默TRPM8后自噬相关标志物(ATG3、ATG5、ATG6、ATG7和ATG12)的变化和c-Jun N末端激酶(JNK)通路相关蛋白的表达。结果:TRPM8在肾癌细胞中高表达;转染TRPM8 shRNA后,TRPM8的表达明显降低(P<0.01);沉默TRPM8后,A498细胞的增殖能力明显下降(P<0.01),凋亡率明显增高(P<0.01);转染TRPM8 shRNA,A498细胞的自噬通量也明显减少(P<0.05),且ATG3、ATG5、ATG6、ATG7和ATG12蛋白的表达也下降(均P<0.05);沉默TRPM8后,JNK的磷酸化水平降低(P<0.05);使用JNK抑制剂(SP600125)后,ATG5和ATG7蛋白水平明显降低(均P<0.05)。结论:沉默TRPM8通道介导的自噬调节通过JNK信号通路可抑制肾癌细胞的增殖,促进其凋亡。
- 付婷熊毅
- 关键词：自噬JNK信号通路肾癌细胞
- 肺癌细胞外泌体来源的miR-718通过靶向PTEN诱导血管新生
- 2023年
- 目的:探究肺癌细胞外泌体(exosome,exo)对血管新生的影响及机制。方法:提取人肺上皮细胞HFL-1和人肺癌细胞A549、H522、H460细胞分泌的外泌体,记为HFL-1 exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo,将上述外泌体以及等体积的PBS缓冲液与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,记为HFL-1 exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组和PBS组,PBS组作为对照组。HUVEC转染PTEN siRNA和Negative control,记为si-PTEN组和si-NC组。提取转染miR-NC、miR-718 mimic、miR-718 inhibitor的A549细胞所分泌的外泌体,记为A549/miR-NC exo、A549/miR-718 mimic exo、A549/miR-718 inhibitor exo,将上述外泌体与HUVEC细胞共孵育,记为A549/miR-NC exo组、A549/miR-718 mimic exo组、A549/miR-718 inhibitor exo组,HUVEC细胞与A549/miR-718 mimic exo孵育后转染PTEN过表达质粒,记为A549/miR-718 mimic exo+PTEN组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测各组细胞及外泌体miR-718的表达;Transwell小室法和小管形成实验检测各组细胞的迁移能力和小管形成情况;Western blot检测PTEN蛋白的表达。结果:本文所提取的HFL-1 exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo均符合外泌体的结构特征;与PBS组比较,A549 exo、H522 exo、H460 exo组HUVEC细胞迁移数和小管形成数显著升高(P均<0.05)。与HFL-1细胞比较,A549、H522、H460细胞中miR-718表达显著升高(P均<0.05)。与HFL-1 exo比较,A549 exo、H522 exo、H460 exo中miR-718表达显著升高(P均<0.05),并且miR-718可靶向调控PTEN的表达。相比于si-NC组,si-PTEN组HUVEC细胞小管形成和细胞迁移数显著升高(P均<0.05)。相比于A549/miRNC exo组,A549/miR-718 mimic exo组细胞迁移和小管形成数显著增加(P均<0.05),A549/miR-718 inhibitor exo组细胞迁移和小管形成数显著减少(P均<0.05);相比于A549/miR-NC exo组,A549/miR-718 mimic exo+PTEN组细胞迁移和小管形成数显著升高(P均<0.05)。结论:肺癌细胞外泌体miR-718能够通过靶向抑制PTEN的表达而促进血管生成。
- 付婷李芳潘大燕夏园园张秋园
- 关键词：肺癌外泌体PTEN血管新生
