杨磊
- 作品数：12 被引量：26H指数：3
- 供职机构：天津市第一中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 超基因:基因表达的“多面手”
- 2021年
- 真核生物基因组的转录是基因表达的重要环节,转录产物不仅包括编码蛋白的信使RNA,还包括众多类型的非编码RNA。在转录过程中,有些基因位点可生成不止一种RNA分子,其中可能包括编码RNA分子,但更多的是非编码RNA分子,这类可转录生成多种RNA分子的基因位点被命名为超基因。根据转录模式的不同,超基因分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。本文结合实例,对各型超基因的转录特点及其在细胞中的调控作用进行综述。
- 刘涛王树森杨磊时乔沈中阳
- 关键词：非编码RNA转录基因调控
- 抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制被引量：4
- 2019年
- 目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。
- 段继惠杨磊穆红唐志琴
- 关键词：宫颈癌细胞凋亡
- 葡萄糖水平对自噬的影响研究进展
- 2022年
- 葡萄糖是一种重要的营养物质,在维持机体正常生理活动过程中起重要作用。当机体由于糖代谢紊乱或限制碳水化合物摄入而处于高血糖或低血糖状态时,可影响细胞自噬。自噬有益或有害,细胞在不利环境压力下通过适度自噬维持稳态,但超过自噬阈值细胞会发生损伤甚至死亡。近年来,葡萄糖影响自噬具体机制的研究取得了一定成果,同时靶向自噬治疗疾病也成为一种有前景的发展方向。因此,全面总结葡萄糖水平影响自噬的相关文献不仅可为自噬机制研究提供新的理论依据,也可为临床治疗疾病提供新思路。
- 杨澜杨磊周春雷范彩红王东强穆红
- 关键词：葡萄糖自噬细胞凋亡
- PKG抑制剂KT-5823对宫颈癌HeLa细胞活力、凋亡、自噬的影响
- 2023年
- 目的:明确宫颈癌HeLa细胞对环鸟苷酸依赖性蛋白激酶(PKG)抑制剂KT-5823的敏感性,探究KT-5823对HeLa细胞活力、凋亡和自噬的影响及机制。方法:使用不同浓度的KT-5823干预HeLa细胞24 h,CCK-8、免疫印迹试验分别测定细胞活力、PKG1表达水平,进而确定后续药物刺激浓度。将HeLa细胞分为两组,即DMSO组(对照组)和KT-5823组(实验组),流式细胞术检测细胞凋亡,GFP-LC3B荧光斑点实验检测自噬斑点形成数量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PKG1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin1 mRNA的表达水平,免疫印迹试验检测PKG1、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、自噬相关通路蛋白蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)蛋白的表达水平。增加自噬抑制剂SBI-0206965组观察自噬在此过程中的作用。结果:与对照组相比,实验组在3~100μmol/L刺激浓度下均可导致HeLa细胞活力降低(t=10.23~14.83,均P<0.05),PKG1蛋白表达水平逐渐降低(t=10.01~14.17,均P<0.05)。最终选取3μmol/L为刺激浓度,用于后续研究。与对照组相比,细胞凋亡增加(t=10.78,P=0.004),荧光自噬斑点数量增加(t=10.12,P=0.0005),PKG1 mRNA、蛋白的表达水平降低(t=13.56,P=0.0002;t=5.461,P=0.0055)、LC3Ⅱ、Beclin1 mRNA(t=8.359,P=0.0011;t=5.782,P=0.0044)、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1蛋白(t=6.924,P=0.0023;t=11.84,P=0.0003)的表达水平增加,p-Akt/Akt(t=5.194,P=0.0065)、p-mTOR/mTOR(t=12.78,P=0.0002)、Bcl-2/Bax(t=13.79,P=0.0002)的比值降低,Caspase 3表达增加(t=9.341,P=0.0007)。与实验组相比,30、50、70、100μmol/L自噬抑制剂SBI-0206965组可增加细胞凋亡(t=7.616,P=0.0016;t=15.43,P=0.0001;t=11.01,P=0.0004;t=15.39,P=0.0001)。结论:PKG抑制剂KT-5823可有效抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋�
- 杨澜周春雷王艺霖董贺楠杨磊穆红
- 关键词：PKG宫颈癌自噬凋亡
- MiR-26b通过抑制p53基因表达增强胰腺癌细胞对吉西他滨抗药性被引量：1
- 2017年
- 目的通过对miR-26b靶定p53促进胰腺癌细胞系PANC-1抗药性的研究,揭示胰腺癌细胞抗药机制,为临床治疗提供依据。方法 (1)构建p53的过表达和敲降质粒,以及含3′端非编码序列区(3′UTR)的荧光报告载体;(2)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验研究在吉西他滨存在的条件下p53和miR-26b对PANC-1生长增殖的影响;(3)采用生物信息学、实时定量聚合酶链反应(PCR)试验、荧光报告载体和Western印迹试验确定miR-26b与p53的靶定关系;(4)采用挽救试验研究过表达p53对miR-26b促进细胞生长作用的影响。结果(1)MTT试验证实,在吉西他滨存在的条件下,过表达p53抑制胰腺癌细胞系PANC-1生长增殖,而敲降p53可以促进PANC-1生长和增殖;(2)生物信息学预测显示miR-26b靶定p53,实时定量PCR、荧光报告载体试验和Western印迹试验证实p53是miR-26b的靶基因,miR-26b通过靶定3′UTR抑制p53的转录和翻译;(3)MTT试验证实,在吉西他滨存在的条件下,过表达miR-26b促进PANC-1细胞系生长增殖,增强PANC-1细胞系对吉西他滨的抗药性;(4)挽救试验证实,同时过表达p53挽救miR-26b对PANC-1抗药的促进作用。结论 miR-26b通过靶定p53基因3′UTR抑制其表达,增强胰腺癌细胞系PANC-1对吉西他滨的抗药性。
- 王艳丽杨磊常艳敏
- 关键词：胰腺癌P53吉西他滨抗药性MIR
- miR-130b对宫颈癌细胞修复TNF-α诱导性基因组双链DNA断裂作用的影响及机制被引量：4
- 2019年
- 目的观察miR-130b对宫颈癌细胞修复基因组双链DNA断裂作用的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌细胞Siha分成6组,分别转染细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A(CDKN1A)基因过表达质粒pc DNA3. 1-CDKN1A(CDKN1A组)、pc DNA3. 1空载质粒(pc DNA3. 1组)、miR-130b mimics (miR-130b组)、miR-130b阴性对照核酸(NC组),共转染pc DNA3. 1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b组)、pc DNA3. 1和miR-130b mimics (pc DNA3. 1+miR-130b组)。TNF-α刺激细胞,用彗星试验测定基因组DNA尾距,流式细胞术测定磷酸化组蛋白2A变异体(γ-H2AX)蛋白; Real-time PCR、Western blotting法检测CDKN1A mRNA及其蛋白。分别将pc DNA3. 1/EGFP、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-wtUTR(野生型)、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-mutUTR(突变型)与miR-130b mimics或NC共转染Siha细胞,测定报告基因荧光相对活性;以TNF-α和DNA损伤增强剂AZD2461刺激各组细胞,用流式细胞术测定细胞凋亡水平。结果与pc DNA3. 1组比较,CDKN1A组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平降低(P均<0. 05);与NC组比较,miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率升高,CDKN1A mRNA、蛋白表达水平下降(P均<0. 05);与pc DNA3. 1+miR-130b组比较,CDKN1A+miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率下降(P均<0. 05);与共转染NC细胞相比,共转染miR-130b mimics使野生型细胞荧光相对活性降低(P <0. 05),而未改变突变型细胞荧光相对活性。结论 miR-130b通过直接靶定CDKN1A mRNA抑制其表达干扰宫颈癌细胞修复双链DNA断裂位点,从而促进细胞凋亡。
- 杨磊刘涛段继惠穆红
- 关键词：宫颈癌DNA修复
- miR-130b-3p靶定AMPK基因抑制糖饥饿诱导的宫颈癌细胞自噬性死亡被引量：2
- 2022年
- 目的探究miR-130b-3p对糖饥饿诱导宫颈癌细胞自噬性死亡的影响及机制。方法将宫颈癌细胞分别置于低糖(0.1 mmol/L)和正常糖含量(5 mmol/L)、低糖+DMSO和低糖+雷帕霉素的培养液中培养,利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色实验、GFP-LC3B自噬泡形成检测实验、实时荧光半定量PCR(RT-qPCR)实验和Western blot实验,依次检测细胞死亡、自噬水平,细胞内miR-130b-3p、腺苷单磷酸激活激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)mRNA和AMPK蛋白水平;分别转染miR-130b-3p抑制物及AMPK过表达质粒,再利用自噬抑制剂SBI-0206965(SBI)检测miR-130b-3p、ampk对细胞死亡和自噬的影响;生物信息学工具预测miR-130b-3p的靶基因并利用荧光报告基因实验进行验证。结果低糖诱导宫颈癌细胞发生自噬、miR-130b-3p水平升高,AMPK表达水平降低(均P<0.05),死亡率无显著变化(均P>0.05);与低糖+DMSO组相比,低糖+雷帕霉素使得宫颈癌细胞死亡率显著增加(均P<0.05);转染miR-130b-3p抑制物后,低糖条件下宫颈癌细胞自噬水平和自噬性死亡率显著增加(均P<0.05);过表达AMPK能促进宫颈癌细胞自噬和自噬性死亡率显著升高(均P<0.05);荧光报告基因表达水平检测结果证实,AMPK是miR-130b-3p的直接靶基因(P<0.05)。结论低糖条件下,miR-130b-3p靶定AMPK基因抑制宫颈癌细胞自噬性死亡。
- 范彩红杨磊杨澜穆红
- 关键词：AMPK自噬性细胞死亡宫颈癌
- The levels of lymphocyte subsets in peripheral blood serve as new markers to differentiate septic patients from nonseptic ones
- 杨磊
- 脓毒症相关微小RNA标志物功能机制研究进展与诊疗价值被引量：12
- 2019年
- 脓毒症是一种生理学致病机制不明确的疾病综合征,严重威胁人类健康。最新定义指出脓毒症是指由感染诱发宿主反应失调造成危及生命的器官功能障碍。炎症反应过度伴随免疫抑制失衡会导致患者出现复杂的病理生理学变化。微小RNA(micr〇RNA,miRNA)在脓毒症相关性炎症反应以及器官损伤过程中发挥重要的调控作用。脓毒症病程发展伴随有miRNA表达水平的变化,监测分析miRNA水平可以辅助诊断脓毒症,判断疾病预后。调控脓毒症相关miRNA表达水平能缓解疾病造成的器官损伤和功能障碍。
- 穆红杨磊
- 关键词：脓毒症
- 微小RNA-106b靶向下调腺瘤性息肉病基因表达促进Hep-2细胞的增殖被引量：3
- 2015年
- 目的 探讨微小RNA（miRNA,miR）-106b影响喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖的分子机制.方法 应用噻唑蓝（MTT）法分析miR-106b对Hep-2细胞株增殖的影响;通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot技术检测miR-106b各转染组腺瘤性息肉病基因（APC） mRNA和蛋白表达水平;将APC基因3＇非翻译区（3＇UTR）-荧光素酶表达载体及其突变体与miR-106b共转染至Hep-2细胞,采用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性.结果 与miR-106b inhibitor和对照组比较,转染miR-106b-mimics能明显促进Hep-2细胞的增殖;APC蛋白在miR-106b-mimics转染组、对照组和miR-106b inhibitor中的表达水平分别为0.586 ±0.023,0.734 ±0.024和0.927±0.018,3组间差异有统计学意义（P＜0.05）;而APC mRNA的表达水平在3组间差异无统计学意义（P＞0.05）;在共转染野生型APC基因3＇UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性分别为4.37±1.04,8.376±1.23和23.75±1.63,3组间差异有统计学意义（P＜0.05）;而在共转染突变型APC基因3＇UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 在喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株中,miR-106b可结合到APC基因3＇UTR,在转录后水平负性调控APC基因的表达,从而促进Hep-2细胞的增殖.
- 段继惠杨磊王巍穆红唐志琴
- 关键词：喉肿瘤微小RNA
