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胡娟
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
供职机构:
中南大学湘雅医学院
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发文基金:
湖南省科技厅重点项目
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
罗伟光
中南大学湘雅医学院
邹义洲
中南大学湘雅医学院
郭靖
中南大学湘雅医学院
刘萍
中南大学湘雅医学院
李婷婷
中南大学湘雅医学院
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2015
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肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化
被引量:2
2015年
目的探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本,应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选;用Luminex抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链A(MICA)的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后,用HUVEC将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来,再用Protein-A/G磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体Ig G。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体(Ig G)。结果在386例肾移植受者的血清中,选取血清肌酐(Scr)>400μmo I/L、抗HLA抗体阴性、抗MICA抗体阴性和荧光反应强度(MFI)>16的5例受者的血清样本,纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体Ig G在SDS-PAGE凝胶显示免疫球蛋白重链(纯度>95%)。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。
刘丹
胡娟
刘萍
罗伟光
李婷婷
郭靖
明英姿
邹义洲
关键词:
肾移植
免疫排斥反应
人血管内皮细胞
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