魏虹
- 作品数：14 被引量：39H指数：4
- 供职机构：西安交通大学口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 牙龈卟啉单胞菌肽酰精氨酸脱亚氨酶的克隆与表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白肽酰精氨酸脱亚氨酶(PAD)克隆表达重组子,转化于大肠杆菌BL21中,并在最适宜条件下诱导表达。方法:以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277全基因组DNA为模板,利用PCR技术获得目的基因PAD,将扩增得到的PAD基因定向插入线性克隆载体PMD18-T Vector中,得到克隆重组子PMD18-T-PAD。经PCR和双酶切鉴定正确的克隆重组子PMD18-T-PAD与表达载体PET-28a经Xhol和Ncol双酶切后,在一定连接体系下,连接构建表达质粒PET-28a-PAD。鉴定正确的原核重组表达质粒PET-28a-PAD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)及时间诱导下表达融合蛋白。以抗His Tag单克隆抗体为一抗,Western免疫印迹鉴定。结果:DNA测序结果表明,PAD与NCBI核酸数据库中收录的PAD序列同源性达100%;37℃,IPTG浓度为0.5mmol/L,250r/min振摇培养6h的诱导条件下,PAD可高效表达。结论:本实验成功构建了PAD的克隆表达重组子,并在大肠杆菌中表达了PAD蛋白,为进一步研究PAD的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。
- 李昂朱春晖石建峰魏虹刘瑾苟建重
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌原核表达
- RNA干扰沉默涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞HER2基因表达
- 2010年
- 目的通过RNA干扰(RNAi)沉默HER2基因在涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞中的表达。方法将目的基因靶序列小干扰RNA(siRNA)转染Mc3细胞,并设置对照组,采用RT-PCR、免疫组化检测RNA干扰后HER2基因在Mc3细胞中的表达情况。结果RT-PCR结果显示RNA干扰后,HER2基因mRNA在涎腺黏液表皮样癌细胞中的表达与对照组比较明显降低;免疫组化实验结果显示RNA干扰后HER2基因蛋白在涎腺黏液表皮样癌细胞中的表达降低,与mRNA表达情况相一致。结论RNA干扰成功抑制了涎腺黏液表皮样癌细胞中HER2基因的表达,为口腔涎腺黏液表皮样癌针对癌基因HER2为靶基因的基因治疗提供研究基础。
- 刘晓华张引成任文豪曹腾腾魏虹
- 关键词：RNA干扰涎腺黏液表皮样癌HER2基因
- 核酸吸附快速分离法与国外同类试剂盒及传统方法的比较与评估
- 2014年
- 目的评价核酸吸附材料及配套系列核酸分离试剂，与国外同类试剂盒及传统方法提取核酸结果的比较，探讨其替代国外同类产品的可行性。方法将核酸吸附法、传统法及国外三种试剂盒分为5组（A，B，C；D，E）进行比较，每组分别从细胞、细菌、血液、植物中提取DNA和RNA，采用紫外分光光度法检测浓度，以吸光度A值检测样品纯度，凝胶电泳法检测核酸完整性。结果DNA含量：A组14．0734±0．033μg／ml，B组4．31±0．041tμg／ml，C组14．325±0．030ug／m!，D组13．876±0．023μg／ml，E组12．654±0．012μg／ml，A组与B组相比差异有统计学意义（￡=11．175，P〈O．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=0．014，P=0．989；t=-0．525，P=0．627；t=0．453，P=0．674）。RNA含量：A组287．740±0．036μg／ml，B组32．121±0．055μg／ml，C组285．12士0．027μg／ml，D组276．10±0．034μg／ml。E组264．36±0．071μg／ml，A组与B组相比差异有统计学意义（t=29．284，P〈0．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=-0．22，P=0．836；t=-0．825，P=0．456；t=0．474，P=0．66）。DNA纯度}A组1．828士0．016，B组1．e01±0．013，C组1．836±0．022，D组1．819±0．014，E组1．796±0．025，A组与B组相比差异有统计学意义（t=7．448，P〈0．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=-0．099，P=0．926；f=0．111，P=0．917；f=-0．833，P=0．452）。RNA纯度：A组1．952±0．021，B组1．331±0．017，c组1．950±0．018，D组1．947±0．026，E组1.879±0．034，A组B组相比差异有统计学意义（t=8．755，P〈0．05），与其他各组相比差异无统计学意义（t=0．024，P=0．982；t=0．061，P=0．954；t=1．434，P=0．225）。A组和C，D，E组提取的核酸无降解，完整性好。B组核酸出现降解现象，完整性差。结论核酸吸附分离法较传统法简单快速，提取的核酸纯度�
- 饶国洲石建峰李昂魏虹苟建重周洪李晓红
- 关键词：DNARNA试剂盒
- 口腔医学研究生培养模式的创新与实践被引量：4
- 2015年
- 针对我国口腔医学研究生培养过程中出现的学生创新观念薄弱、科研能力不强、平台建设不足、培养模式封闭等问题,提出了以提高创新能力为核心,发挥学科交叉优势的、开放式研究生创新能力培养模式,并进行了初步的实践和探索,以期构筑与高水平研究型大学相适应的口腔医学研究生培养体系,培养出有创新思维方式、较高科研能力的口腔医学创新型人才。
- 李昂魏虹高歌周洪
- 关键词：口腔医学
- 牙龈卟啉单胞菌PAD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 朱春晖李昂石建峰魏虹刘瑾苟建重
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌大肠杆菌
- BMP-2促进人炎症牙髓干细胞骨向诱导分化的体外研究被引量：3
- 2015年
- 目的:研究人骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein,BMP-2)对人炎症牙髓组织来源的牙髓干细胞(dental pulp stem cells from inflamed pulps,DPSCs-IPs)体外骨向诱导分化的影响。方法:取第三代DPSCs-IPs,按是否于培养基中加入BMP-2分成:BMP-2+DPSCs-IPs组(实验组)和DPSCs-IPs组(对照组)。无成骨诱导条件培养1周后,对各组分泌的胶原基质行Trichrome染色,观察并比较实验组和对照组之间的骨向诱导分化情况;实时定量RT-PCR检测二者的Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL-Ⅰ)mRNA表达情况。在成骨诱导条件下,培养3周后对各组分泌的钙化基质行Von Kossa染色,通过实时定量RT-PCR检测转录因子及成骨相关基因的表达。结果:无成骨诱导培养1周后,实验组DPSCs-IPs分泌的胶原基质Trichrome染色较对照组深,COL-ⅠmRNA的表达水平显著上调(P<0.05),说明BMP-2可诱导DPSCs-IPs沉积更多的胶原基质;成骨诱导培养3周后,相对于对照组,实验组DPSCs-IPs沉积了更多的钙化基质,Nanog、八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)、性别决定区因子(SRY-related high-mobility group box 2,Sox2)等转录因子表达升高,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP),牙骨质蛋白1(cementum protein 1,CEMP-1)、COL-Ⅰ等成骨相关基因表达水平显著上调(P<0.05)。结论:BMP-2在成骨诱导条件下可促进DPSCs-IPs进行体外骨向诱导分化。
- 邓云贞李珏丹魏虹石建峰李昂苟建重
- 关键词：牙髓干细胞炎症牙髓骨形态发生蛋白-2BONE
- 柚皮苷对人牙周膜细胞功能调节的作用被引量：6
- 2011年
- 目的:通过研究中药有效成分柚皮苷对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖、矿化成骨及骨保护素(OPG)表达的影响,探讨柚皮苷对人牙周膜细胞增殖及成骨功能的调节作用。方法:采用酶消化结合组织块法,体外原代培养hPDLCs,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附法和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,测定不同质量浓度(100、10、1.0、0.1、0.01mg/L)柚皮苷作用后,hPDLCs增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原蛋白、OPG表达的变化,采用SPSS16.0统计包对数据进行统计学处理。结果:原代培养的hPDLCs形态良好,1.0mg/L浓度组的柚皮苷对hPDLCs增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原蛋白表达的促进作用最强,此浓度柚皮苷对细胞OPG mRNA的调节作用在测定时段内呈时间依赖性。结论:柚皮苷有促进hPDLCs增殖及向成骨方向转化的作用。
- 李昂赵俊杰刘瑾石建峰饶国洲魏虹苟建重
- 关键词：人牙周膜细胞柚皮苷碱性磷酸酶骨保护素
- 黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备及释药性能检测被引量：2
- 2012年
- 目的:将黄芩苷和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)载入壳聚糖温敏凝胶,构建双缓释体系,检测凝胶对药物的体外释放情况。方法:采用乳化缩聚法制备黄芩苷-明胶微球(gelatin microspheres,GMS);用不同配比的壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate,β-GP)溶液制备壳聚糖温敏凝胶,观察在37℃的成胶情况,选择最佳配比;在此基础上,将不同浓度的黄芩苷-GMS与BSA共混于壳聚糖凝胶溶液,测定载药后的成胶情况及黄芩苷和BSA的体外释放情况。结果:成功制备了黄芩苷-GMS,载药率5.62%,包封率72.05%;1.8%壳聚糖溶液与9%的β-GP混合10min后可获得状态良好的凝胶;加载两种药物后的凝胶溶液相转变时间未发生改变;30d时低浓度组累积释放了63.79%,两个较高浓度组分别释放了74.86%、77.63%。结论:壳聚糖温敏凝胶可以同时负载黄芩苷-GMS和BSA两种药物,在室温下呈溶液状态,37℃下经过10min可转变成半固体凝胶,在体外释药可达30d。黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备和释药性能检测为牙周组织修复再生药物的研制提供了基础。
- 姬小婷李凤魏虹石建峰饶国洲李昂苟建重
- 关键词：壳聚糖温敏凝胶体外释放
- Survivin和Bcl-2基因靶向siRNA对舌癌Tca-8113细胞生长抑制及诱导凋亡作用的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨Survivin联合Bcl-2siRNA对舌癌细胞的诱导凋亡作用。方法:实验分空白组、脂质体组、阴性干扰组、Survivin干扰组、bcl-2干扰组、Survivin/bcl-2干扰组,以舌癌细胞系Tca-8113为研究对象,应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)分别和同时沉默下调Survivin和Bcl-2两种基因的表达,采用MTT检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构变化,比较各组对肿瘤细胞生长的抑制及诱导凋亡作用。结果:转染24h后可见Survivin/bcl-2干扰组的细胞形态发生明显改变,体积缩小变圆,染色质浓集于核膜内侧,核碎裂,电镜下呈典型的细胞凋亡形态学改变,并有凋亡小体出现,MTT显示细胞生长明显抑制,MCF检测凋亡率分别为空白组0.85%、脂质体组2.46%、阴性干扰组3.06%、Survivin干扰组15.48%、bcl-2干扰组11.02%、Survivin/bcl-2干扰组29.18%,与空白组相比差异有统计学显著性意义(P<0.01),转染阴性siRNA及脂质体组无抑制和诱导凋亡作用,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向特异性Survivin联合Bcl-2siRNA双基因沉默下调较单基因沉默下调作用显著增强,并且能有效抑制舌癌细胞的增殖及诱导其发生凋亡。
- 饶国洲石建峰王欣欣魏虹李昂孙惠玲张引成
- 关键词：舌肿瘤基因,BCL-2
- rAAV-hBMP7的包装纯化及感染滴度的测定
- 2013年
- 目的:包装纯化具有感染性的腺相关病毒rAAV-hBMP7,检测其包装效率及感染滴度。方法:应用AAV Helper-Free System、磷酸钙三质粒共沉淀法,将病毒质粒pAAVIRES-hrG-FP-hBMP7、辅助质粒pAAV-Helper和包装质粒pAAV-RC转染AAV-293细胞,进行病毒包装,荧光计数法测定病毒包装效率;反复冻融收获病毒液,按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀的方法浓缩纯化;纯化的病毒液感染AAV-HT1080细胞观测荧光表达,原位β-半乳糖苷酶染色测定病毒感染效率和滴度。结果:转染AAV-293细胞后6h即有绿色荧光表达,包装效率为94.16±0.13%。纯化的rAAV-hBMP7在HT1080细胞中的感染效率为78%,计算病毒物理滴度为2.34×1011v·g/ml。结论:磷酸钙三质粒共沉淀法可实现病毒在AAV-293细胞中的高效包装,纯化的rAAV病毒载体能介导hBMP7基因转染真核细胞并具有较高的转染效率和感染滴度。
- 石建峰饶国洲魏虹张晨李昂
- 关键词：转染骨形态发生蛋白质类
