刘梦楠
- 作品数：10 被引量：16H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胚胎干细胞抑制人肝癌细胞系SK-Hep1增殖并促进凋亡
- 2017年
- 目的探究在人胚胎干细胞hESCs与人肝癌细胞系SK-Hep1共培养微环境中,hESCs对SK-Hep1人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法建立hESCs与SK-Hep1人肝癌细胞系的非接触式共培养体系,将与hESCs共培养的SK-Hep1细胞作为实验组,单独培养的SK-Hep1细胞作为对照组。MTT法检测SK-Hep1细胞的增殖能力;Transwell小室法检测SK-Hep1的侵袭与迁移能力;Hoechst33258染色后观察共培养后SK-Hep1细胞核的变化;流式细胞术检测SK-Hep1细胞凋亡率。结果与hESCs共培养后,SK-Hep1细胞的增殖能力受到抑制,随着时间增加,抑制效果越显著(P<0.05);细胞侵袭、迁移穿过Transwell小室的数量显著减少(P<0.05);发生核固缩、变形和浓染的SK-Hep1细胞较对照组增多;细胞凋亡比率较对照组显著增加(P<0.05)。结论人胚胎干细胞对SKHep1人肝癌细胞系有抑制作用。
- 张婷霍本念刘洁刘梦楠冯涛
- 关键词：胚胎干细胞肝癌细胞
- 胚胎干细胞对急性髓系白血病细胞KG-1a的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:研究人胚胎干细胞H9在体外对人急性髓系白血病细胞KG-1a增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外将人胚胎干细胞H9和白血病细胞KG-1a进行接触式共培养,用CCK8检测KG-1a的增殖情况;用流式细胞术检测共培养后细胞的凋亡以及周期改变;荧光定量PCR检测BAX、BCL-2、caspase-3的m RNA表达;Western blot分析BAX、BCL-2、caspase-3的蛋白表达。结果:H9能明显抑制KG-1a细胞的增殖,将细胞阻滞于G2/M期,共培养后的KG-1a细胞的凋亡率高于对照组。BAX、Caspse-3的m RNA和蛋白表达均上调,BCL-2的m RNA和蛋白表达下调。结论:胚胎干细胞能抑制KG-1a细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与BCL-2表达下调和BAX、Caspse-3表达上调有关。
- 刘洁刘洁张婷张婷刘梦楠王薛
- 关键词：胚胎干细胞急性髓系白血病细胞共培养
- H9与HepG-2体外共培养上清对HepG-2增殖迁移及凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:研究胚胎干细胞H9与肝癌细胞株Hep G-2共培养上清对肝癌细胞Hep G-2增殖、迁移及凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:体外共培养H9与Hep G-2,于不同时间即12、24、36、48 h取得上清,并把不同浓度上清即20%、40%、60%、80%作用于Hep G-2细胞,于倒置荧光显微镜下观察细胞的生长情况和形态变化;用MTS法检测不同浓度上清分别作用Hep G-2细胞24、48 h后细胞的增殖情况;应用流式细胞术检测细胞的凋亡情况;用Hochest33258染色检测细胞的凋亡情况;Transwell小室法检测上清对细胞侵袭迁移的影响。结果:不同浓度的共培养上清液均对Hep G-2细胞的增殖有一定的抑制作用,并且40%浓度及以上的浓度能明显促进肝癌细胞的凋亡,主要是早期和晚期凋亡,小室法也看出,上清对肝癌细胞的侵袭和迁移也具有明显的抑制作用,同时,上清对正常的肝细胞L02无明显的作用。结论:胚胎干细胞与肝癌细胞Hep G-2共培养上清能够在体外明显抑制肝癌细胞Hep G-2的增殖、迁移和侵袭,并且促进其凋亡,并且具有浓度依赖性,共培养时间越长,抑制效果越好。说明此上清具有一定的抗肿瘤效应。
- 何雪梅郑良栋张婷刘梦楠冯涛
- 关键词：肝癌细胞HEPG-2细胞增殖
- 人胚胎干细胞对肝癌HepG2细胞体外抑制作用的研究
- 2017年
- 目的:研究体外共培养情况下人胚胎干细胞H9对肝癌HepG2细胞的抑制作用。方法:建立人胚胎干细胞(H9)与肝癌HepG2细胞共培养体系,显微镜下观察胚胎干细胞对肿瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞仪检测H9细胞对肿瘤细胞的凋亡与周期的影响,Transwell小室法检测H9细胞对HepG2细胞侵袭和迁移的影响,基因芯片分析共培养后HepG2细胞全基因组的表达谱变化。结果:结果发现共培养过程中,肝癌HepG2细胞生长受到抑制,随共培养时间延长,细胞数量逐渐减少,出现老化或凋亡迹象;流式细胞术检测发现HepG2细胞凋亡率显著增加,细胞周期被阻滞于G0/G1期;Transwell实验发现HepG2细胞侵袭、迁移力均降低;基因芯片结果发现HepG2细胞全基因组表达谱发生了显著变化,差异基因涉及多条信号通路。结论:人胚胎干细胞H9体外对人肝癌细胞HepG2有一定程度的抑制作用。
- 郑良栋何雪梅张婷刘洁霍本念刘梦楠王薛冯涛
- 关键词：胚胎干细胞肝癌共培养
- 乙肝病毒X蛋白上调骨桥蛋白表达增强肝癌细胞干性的研究被引量：2
- 2017年
- 目的在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中探讨乙肝病毒x蛋白(HBx)对骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达及肝癌细胞干性的影响。方法采用免疫印迹(Western blot,WB)及免疫组化等方法在肝癌组织标本上检测OPN表达水平与患者性别、年龄、AFP、HBV病毒复制量、肿瘤大小、TNM分期等临床病理因素的关系;在稳定整合HBV基因组的HepG2.2.15细胞系及慢病毒介导的HBx转染HepG2细胞中,进一步验证HBV及HBx过表达对OPN及干性相关转录因子Nanog、Oct4,干性细胞表面标记分子CD44、CD90、Ep CAM表达水平的影响。结果免疫组化及WB检测结果均表明OPN在HBV阳性的HCC肝癌组织中的表达水平显著高于HBV阴性的肝癌组织(P<0.05)。HepG2.2.15细胞中OPN的mRNA及蛋白质含量较HepG2细胞显著增加(P<0.05);在HepG2细胞中,过表达HBx显著上调OPN mRNA及蛋白质水平(P<0.05),流式细胞术定量分析显示过表达HBx的HepG2细胞中Ep CAM、CD90阳性的干性细胞数量明显升高(P<0.05),实时定量PCR显示干性相关转录因子Nanog、Oct4及其表面标志分子CD44、CD90、Ep CAM水平显著升高。结论 HBx能够显著上调OPN的表达,并增强肝癌细胞的干性,提示HBx/OPN/肝癌细胞干性增强通路可能在HBV相关HCC患者预后不良中具有重要作用。
- 李政言祥蔚王晓东刘梦楠冯涛甘立霞谢斌
- 关键词：骨桥蛋白乙肝病毒X蛋白肝细胞肝癌干性
- 人胚胎干细胞对A549、HepG2细胞增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2018年
- 本研究以探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,h ESCs）对肿瘤细胞A549、Hep G2增殖与凋亡的影响为目的,以h ESCs、A549细胞、Hep G2细胞作为研究对象,采用transwell小室在体外分别建立h ESCs与A549、Hep G2细胞的非接触式共培养的方法,设置Co-A549、Co-Hep G2作为实验组,单独培养的A549、Hep G2细胞作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,Hochest33258染色和流式细胞术检测细胞的凋亡,q RT-p CR和Western blotting检测Bcl2、Bax及Caspase-3的m RNA转录水平和蛋白表达水平。CCK-8检测显示,实验组细胞的增殖受到显著抑制（p〈0.05）,Hochest33258染色观察到实验组细胞出现核固缩、变形,流式细胞术检测到实验组细胞的凋亡率显著高于对照组（p〈0.05）,q RT-p CR和Western blotting显示h ESCs可上调实验组细胞Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl2的表达（p〈0.05）。由此我们得到人胚胎干细胞对肿瘤细胞A549、Hep G2有明显的增殖抑制作用并可诱导A549、Hep G2肿瘤细胞的凋亡的结论,为干细胞治疗肿瘤的研究奠定了实验基础。
- 霍本念刘洁刘洁张婷刘梦楠王薛
- 关键词：人胚胎干细胞凋亡
- 感染HBVx的肝前体细胞的小鼠体内稳定表达模型构建被引量：3
- 2017年
- 为了探究HBVx是否累及其他组织器官,本研究构建了携带HBVx基因的慢病毒表达载体,感染14-19肝前体细胞,使其能稳定表达HBVx基因,并构建了门静脉动物模型,使肝前体细胞在小鼠体内存活并能够进一步分化,并在不同时间段分别检测小鼠各个组织中HBVx目的基因的表达情况。通过PCR扩增HBVx目的基因,使之与逆转录病毒表达载体(p Lenti-CMV-HA-3FLAG-PGK-EGFP-F2A-Puro)连接,后通过酶切、菌落PCR、测序验证质粒是否构建成功。构建成功后用携带HBVx逆转录病毒感染14-19肝前体细胞,嘌呤霉素(puromycin)连续筛选4周后进行细胞HBVx目的基因检测。同时进行门静脉动物模型构建,分别在第3天、7天、14天、30天、60天进行检测小鼠各个组织器官中的HBVx的表达情况。成功构建携带HBVx的慢病毒表达质粒、稳定携带HBVx的14-19肝前体细胞、门静脉动物模型。同时检测了各个组织器官HBVx的表达情况,HBVx可在肝脏内生长分化且可在肝脏内长时间高表达,其余组织不表达。携带HBVx的肝前体细胞可在肝内生长分化,且HBV具有嗜肝性,不累及其他脏器。构建了一个长期表达HBVx的动物模型,为本课题组后续研究HBVx导致肝癌发生发展奠定了良好基础。
- 刘梦楠张婷刘洁张杰霍本念冯涛
- 关键词：HBVX肝前体细胞慢病毒动物模型
- HBVx基因在体内对肝组织的影响及作用研究
- 目的： 构建携带HBVx基因的慢病毒表达载体，感染14-19肝前体细胞使其稳定表达HBVx基因。通过门静脉注射肝前体细胞入动物体内，将HBVx基因导入动物体内后建立动物模型，分别检测小鼠各个组织中HBVx目的基因的表达...
- 刘梦楠
- 关键词：慢性乙型肝炎HBVX基因慢病毒表达载体肝组织生物学行为
- 文献传递
- HBx基因抑制肝前体细胞凋亡与分化的小鼠体内研究被引量：4
- 2018年
- 目的构建将乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)基因导入小鼠肝脏内的动物模型,探讨HBx蛋白对小鼠体内肝前体细胞凋亡与分化的影响。方法从小鼠肝门静脉注射携带HBx基因的肝前体细胞和生理盐水,于第30、60、90、120天收取小鼠肝前体细胞标本,通过RT-PCR和Western blot验证HBx基因在肝前体细胞中的表达;通过荧光显微镜、免疫组织化学染色法、RT-PCR检测细胞株是否到达小鼠肝脏并表达目的基因;使用TUNEL-FITC/DAPI法、RT-PCR和Western blot检测肝前体细胞的凋亡和分化情况。结果携带了HBx基因的肝前体细胞株成功到达小鼠肝脏内并表达HBx蛋白,TUNEL-FITC/DAPI法显示HBx显著抑制小鼠肝前体细胞发生凋亡,RT-PCR和Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl2、Mcl-1的表达上调,促凋亡蛋白Bax的表达下调,细胞分化早期指标CK19表达增加,而细胞晚期分化指标CK18表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 HBx蛋白在小鼠体内可以抑制肝前体细胞凋亡和分化成熟,诱发肝癌发生的早期事件。
- 霍本念刘洁王薛张婷刘梦楠冯涛
- 关键词：乙肝病毒X蛋白肝前体细胞凋亡分化
- 乳腺癌细胞-干细胞共培养上清液对乳腺癌细胞的体外抗肿瘤作用研究被引量：5
- 2016年
- 研究人胚胎干细胞H9与肿瘤细胞MDA-MB-231共培养上清液对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用。建立人胚胎干细胞H9与乳腺癌MDA-MB-231细胞接触式共培养体系,收集共培养上清液。以单独培养的H9细胞上清为对照,显微镜下观察共培养上清液对肿瘤细胞生物行为学的影响,用MTT法检测上清液对MDAMB-231细胞增殖能力的影响,Hoechst染色及流式细胞术检测上清液对肿瘤细胞的凋亡影响;transwell小室法检测上清液对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。结果显示,共培养上清液能抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,而单独培养的H9细胞上清液对MDA-MB-231细胞几乎没有影响。因此得出结论,人胚胎干细胞H9与人乳腺癌MDA-MB-231细胞共培养的上清液对MDA-MB-231有一定的体外抑癌效应。
- 郑良栋冯涛何雪梅张婷刘梦楠廖红
- 关键词：胚胎干细胞共培养乳腺癌
