李雯
- 作品数：9 被引量：8H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：5
- 2017年
- 从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5'和3'端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后,电转至毕赤酵母X-33,筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29℃、pH 6.0的条件下诱导表达72 h,获得重组体CLYG.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示,在毕赤酵母中成功表达了重组体CLYG.
- 李雯陶妍
- 关键词：鲤鱼毕赤酵母
- 斑马鱼防御素defbl3的优化基因及其重组蛋白的制备方法
- 本发明公开了斑马鱼防御素defbl3的优化基因，其重组蛋白的制备方法。本发明还提供了包含该优化基因的重组表达载体和酵母宿主细胞，该优化基因在生产斑马鱼防御素defbl3中的应用，和该重组蛋白在制备抗菌药物中的应用。本发明...
- 陶妍宋长丰李雯
- 一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用。所述杂合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，编码该杂合抗菌肽的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。本发明通过体外构建多拷贝表达盒表达载体，获得含编码杂合抗...
- 陶妍李雯宋长丰冯亚东
- 文献传递
- 鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达
- g型溶菌酶是参与鱼体先天性免疫的重要物质。本研究在鲤鱼(Cyprinus carpio)腮组织中发现并克隆到一种新型的g型溶菌酶基因(CLYG)。该c DNA序列全长558bp,编码185个氨基酸。推导的氨基酸序列没有信...
- 李雯陶妍
- 关键词：鲤鱼毕赤酵母
- 文献传递
- 斑点叉尾鮰LEAP-2和NK-lysin抗菌肽在毕赤酵母中的串联表达被引量：1
- 2015年
- [目的]合成密码子优化的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)LEAP-2与NK-lysin成熟肽的串联基因(LN),构建真核重组表达载体p PICZαA-LN,实现LN在毕赤酵母中的重组DNA表达并对其纯化。[方法]参考编码斑点叉尾鮰LEAP-2和NK-lysin成熟肽的c DNA序列,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏爱性,优化合成LEAP-2与NK-lysin成熟肽的串联基因LN,两者之间通过α因子信号肽酶切位点对应的核苷酸序列连接;选择表达载体p PICZαA,构建重组表达载体p PICZαA-LN;电转化至毕赤酵母X-33,29℃、p H 6.0条件下,采用1.0%甲醇诱导表达目的蛋白;采用阳离子交换层析对表达产物进行分离纯化。[结果]Tricine-SDS-PAGE分析显示,培养72 h的表达产物经阳离子交换层析,获得了重组体LEAP-2成熟肽、NK-lysin成熟肽和两者的串连表达物;LEAP-2成熟肽的分泌表达效率较NK-lysin成熟肽的高。[结论]实验构建了斑点叉尾鮰LEAP-2与NK-lysin串联基因的真核重组表达载体,并在毕赤酵母X-33中成功表达。
- 宋长丰李雯陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰成熟肽毕赤酵母
- 斑马鱼防御素defbl3的优化基因及其重组蛋白的制备方法
- 本发明公开了斑马鱼防御素defbl3的优化基因，其重组蛋白的制备方法。本发明还提供了包含该优化基因的重组表达载体和酵母宿主细胞，该优化基因在生产斑马鱼防御素defbl3中的应用，和该重组蛋白在制备抗菌药物中的应用。本发明...
- 陶妍宋长丰李雯
- 文献传递
- 一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种杂合抗菌肽及其制备方法和应用。所述杂合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，编码该杂合抗菌肽的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。本发明通过体外构建多拷贝表达盒表达载体，获得含编码杂合抗...
- 陶妍李雯宋长丰冯亚东
- 斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性被引量：6
- 2017年
- C型溶菌酶是存在于各种生物组织中的数种溶菌酶成员中的一员,是重要的细胞内免疫蛋白,具有稳定的空间结构和显著的抑菌功能,被认为是良好的食品保鲜剂和饲料添加剂。为了开发鱼类来源的C型溶菌酶,研究建立了基于毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)C型溶菌酶的制备方法。首先通过PCR获得5'和3'端分别添加Xho I和Xba I酶切位点的编码斑点叉尾鮰C型溶菌酶的c DNA(cflyC),其编码由127个氨基酸残基组成的多肽;将该cflyC与表达载体p PICZαA连接以构建重组表达载体p PICZαA-cflyC;转化至毕赤酵母X-33后,通过不同浓度的博来霉素和对酵母基因组DNA的PCR鉴定,筛选得到高拷贝的酵母转化子;经0.5%甲醇诱导,在p H6.0、29℃、250 r/min下培养144 h,得到的表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化,得到重组蛋白;经Tricine-SDS-PAGE分析,表明重组蛋白的分子量为15.1 k D;进一步通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,证明该重组蛋白为预期的重组cflyC。通过福林酚法测得重组cflyC的表达量为2.75 mg/L。琼脂糖凝胶扩散法和酶活力测定证明,重组cflyC对枯草芽孢杆菌具有抑菌活性。本研究首次实现了斑点叉尾鮰C型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达,为其大规模制备奠定了基础。
- 冯亚东陶妍李雯崔旭王强厚
- 关键词：斑点叉尾鮰毕赤酵母抑菌活性
- 鱼类来源的抗菌肽在毕赤酵母中的表达
- 鱼类栖息的水域环境易遭遇各种病原微生物的侵染，它们的机体拥有比其他生物更强的免疫系统来抵御这种复杂的生存环境。这种超强的免疫系统得益于它们的机体中有许多天然的抗菌肽（antimicrobial peptides，简称AM...
- 李雯
- 关键词：毕赤酵母溶菌酶Β-防御素
- 文献传递
