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念珠菌RPB1基因片段PCR扩增条件的优化被引量：1: 2016年; 目的:优化念珠菌RNA聚合酶Ⅱ大亚基(RPB1)基因片段的PCR扩增条件,筛选适宜念珠菌RPB1的PCR扩增体系。方法:使用改良CTAB法提取念珠菌基因组DNA,分别调整念珠菌RPB1基因片段PCR扩增过程中dd H2O含量、DNA模板含量、退火温度或循环次数,比较不同反应体系的PCR扩增效果。结果:在26μL的PCR反应体系中,DNA模板含量2μL、退火温度为56℃、循环40次时是念珠菌RPB1基因片段最稳定的PCR扩增反应体系,扩增得到24条皱褶念珠菌RPB1基因片段序列,上传至Gen Bank。结论:优化PCR扩增条件后,念珠菌RPB1基因片段的目的条带更明亮、清晰,为基因测序及深入研究念珠菌的工作奠定了基础。; 吕倩王颜颜刘涛华牟丽丽陈燕康颖倩; 关键词：念珠菌属 CTAB 基因扩增

D1/D2、MLST及MALDI-TOF MS在新生隐球菌分类中的应用被引量：7: 2016年; 目的:比较单一D1/D2区域测定、多位点测序分型技术(MLST)和基质辅助激光解吸-飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)在新生隐球菌(Cryptococcus podzolicus)及与之邻近的其他种属的分类研究的稳定性和可靠性。方法:挑选以Cryptococcus podzolicus为主及与之相邻的其他种和属的菌株共20株及1株outgroup模式菌株,运用酵母菌基因组提取试剂盒提取其DNA,PCR扩增5个管家基因(ITS,D1/D2,rpb1,rpb2,tef1)并测序,以Bayesian法(Mr Bayes3.2.1)、最大似然法、邻接法(MEGA 6.0软件)分别构建5个管家基因及D1/D2基因序列的系统发育树;应用MALDI-TOF-MS采集蛋白指纹图谱,在Bruker Daltonics数据库(BDAL)和CBS真菌保藏中心数据库信息的基础上,对20株菌进行聚类分型,构建聚类分型树状图。结果:3种方法所得树状图在种间的层面上,均出现了a、b、c 3个分支;在种内的层面上,特别是a这一分支,均为Cryptococcus podzolicus,单一D1/D2区域所构建的系统发育树分化程度不大,各菌株间无明显的分类多样性,而MLST及MALDI-TOF MS所得到的树状图在种内均出现了明显的分类多样性及亲缘关系的差异性。结论:MLST及MALDI-TOF MS均可作为隐球菌属中菌株分类鉴别中有效的分子生物学方法,能可靠地揭示隐球菌属中各菌种的种间及种内的遗传进化关系,MALDI-TOF-MS比MLST则更为快捷准确。; 刘涛华王颜颜吕倩牟丽丽陈燕康颖倩; 关键词：发育生物学

工厂化生产香肠肠衣腐烂黑斑中嗜盐细菌的分离鉴定及其特征特性被引量：3: 2016年; 为工厂化生产的相关食品及农产品储存过程中微生物的鉴定及抑菌对策提供理论依据,采用高盐察氏液体培养基（Czapek Dox Broth）梯度盐浓度培养法,CDA（Czapek Dox Agar）及TSA（Trypticase Soy Agar）固体培养基进行分离纯化,16SrRNA基因测序,邻接法构建16SrRNA序列的系统发育树等方法,对工厂生产香肠肠衣腐烂黑斑中嗜盐细菌进行分离鉴定,研究其特征特性。结果表明：25%~30%盐浓度固体培养基中分离到3株嗜盐细菌（Gyfl1,Gyfl2,Gyfl3）,经分子学分析鉴定Gyfl1为Halomonas variabilis,Gyfl2为Chromohalobacter israelensis,Gyfl3为Chromohalobacter canadensis;经药敏试验,庆大霉素、卡那霉素、利福平、红霉素和新霉素等常见抗生素均能抑制嗜盐菌株Gyfl1、Gyfl2和Gyfl3,而利福平抑菌效果更明显。; 牟丽丽涂云华Syren de Hoog刘涛华吕倩王颜颜陈燕康颖倩; 关键词：嗜盐细菌系统发育树抗生素敏感

蟾衣提取物对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用被引量：1: 2016年; 目的观察蟾衣提取物对大鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗作用。方法将60只SD大鼠随机分为治疗组、模型组和对照组各20只。模型组和治疗组于每只大鼠右后足跖皮内一次性注射0.1 m L弗氏完全佐剂,对照组注射等量的生理盐水。治疗组造模3周后按2 m L/kg腹腔注射蟾衣提取物,1次/d,连续给药3周,模型组和对照组腹腔注射等量生理盐水。在造模当天及造模后第1、2、3、4、5、6、7周分别测量大鼠体质量、左右后爪体积,各组大鼠在治疗第4周后行四肢关节X线摄片检查及四肢关节病理检查,观察大鼠不良反应发生情况。结果与对照组相比,模型组造模后3、4、5、6、7周左、右后爪体积大(P均<0.05)。与模型组相比,治疗组造模后5、6、7周左、右后爪体积小(P均<0.05)。X线检查结果显示,治疗组大鼠后肢爪关节与对照组相似,较模型组骨质疏松、骨质破坏明显修复,关节面光滑,周围软组织影增厚减轻。HE染色结果显示,治疗组足趾关节面较光滑,增生不明显,炎症细胞浸润明显减轻,关节间隙出现,边缘骨质破坏不明显,与对照组相似。各组大鼠未见明显不良反应。结论蟾衣提取物可有效减轻并修复大鼠AA所致的损伤。; 陈锡赟王恒余跃生陈燕贺勇张玲敏许键炜; 关键词：佐剂性关节炎类风湿性关节炎实验动物模型

异丙托溴铵雾化吸入治疗对COPD大鼠肺功能的保护作用及机制被引量：9: 2016年; 目的观察异丙托溴铵雾化吸入治疗对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺功能的保护作用,并探讨其作用机制。方法 48只SD大鼠随机均分为模型组、治疗3周组、治疗6周组和对照组,前三组制备COPD大鼠模型,停止熏烟后次日治疗3、6周组予以异丙托溴铵雾化治疗,4 m L/次,2次/d,分别治疗3、6周;对照组经气管插管注入生理盐水200μL。采用BL-420系统记录呼吸曲线计算第0.3 s用力呼气容积(FEV0.3)、FEV0.3占肺活量百分比(FEV0.3/FVC),用血气分析仪检测血气指标:p H、PaO_2、PaCO_2,采用ELISA法检测IL-8、IL-10、TNF-α水平。结果与模型组比较,治疗3周组、治疗6周组FEV0.3、FEV0.3/FVC、pH、PaO_2、IL-10水平升高,PaCO_2、IL-8、TNF-α水平降低(P均<0.05),治疗6周组以上指标变化(除PaCO_2外)更明显(P均<0.05)。结论异丙托溴铵雾化吸入治疗后COPD大鼠肺功能得到改善,该作用可能与降低IL-8、TNF-α水平,升高IL-10水平有关。; 熊英张金娟黄惠妍李玲陈燕周忠; 关键词：细胞因子异丙托溴铵

补脑胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆和抗氧化能力的影响被引量：2: 2016年; 目的探讨补脑胶囊对D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆及抗氧化能力的影响,为其用于防治AD提供实验依据。方法雄性SD大鼠90只,随机分为模型对照组、吡拉西坦组、假手术组和补脑胶囊小、中、大剂量(0.79,1.58,3.15 g·kg-1)组,每组15只。采用腹腔注射D-半乳糖联合双侧脑室注射Aβ25-35制备AD模型,连续灌胃给予相应药物治疗8周。采用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力变化;苏木精-伊红(HE)染色观察脑细胞形态学变化;分光光度法测定脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果补脑胶囊中、大剂量组大鼠目标象限滞留时间[分别为(20.39±7.75),(20.82±5.09)s]较模型对照组[(12.35±6.95)s]明显增加(P<0.01);补脑胶囊中、大剂量组大鼠脑神经细胞的形态较模型对照组明显改善,且接近假手术组;脑组织酶活性显著增强(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01)。结论补脑胶囊能剂量依赖性地改善AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与增强脑组织抗氧化酶的活性和增强清除氧化产物有关。; 贺勇李玲熊英张金娟陈燕; 关键词：阿尔茨海默病记忆能力

鼻通宁喷雾剂鼻黏膜及皮肤刺激性试验被引量：2: 2016年; 目的：研究鼻通宁喷雾剂对鼻黏膜及皮肤刺激性。方法：将16只家兔分为对照组（8只）和给药组（8只）,进行鼻腔黏膜刺激性试验,对照组予赋形剂鼻腔给药,给药组予鼻通宁鼻腔给药,观察给药后家兔的全身状况及局部刺激症状,于末次给药后24 h和7 d时分别处死各组半数家兔,观察呼吸道局部黏膜组织情况,并进行病理组织学检查;另将16只家兔随机分为皮肤完整组及皮肤破损组,采用自身对照的方法,于两组家兔背部两侧皮肤去毛处分别涂抹鼻通宁喷雾剂及赋形剂,每次给药前及末次给药后30-60 min、24、48和72 h观察皮肤情况,并进行皮肤刺激反应评分和强度评价,于末次给药后72 h和4 d时,处死各组半数家兔,取涂药部位皮肤行病理组织学检查。结果：鼻黏膜刺激性试验结果显示,给药组及对照组家兔均未出现全身反应及局部刺激症状,末次给药后24 h及7 d时所处死的两组家兔的鼻、喉、气管、支气管黏膜肉眼及镜下观察均未见异常;皮肤刺激性试验结果显示,皮肤完整组及皮肤破损组家兔给药部位皮肤均未见异常反应,皮肤刺激反应评分均为0分,皮肤刺激强度评价为无刺激性。结论：鼻通宁喷雾剂无明显鼻腔黏膜刺激性及皮肤刺激性。; 陈燕张金娟张彦燕许键炜熊英杨勤; 关键词：中药家兔

11株临床诺卡菌16S rRNA及药敏分析被引量：6: 2016年; 目的:探讨应用11株临床诺卡菌16S rRNA序列鉴定该菌菌种名,同时观察该菌的药敏情况。方法:将11株临床分离的诺卡菌菌株分别接种于脑心浸液琼脂培养基分离培养,观察其生长情况;提取菌株DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增其16S rRNA序列,并测定其基因序列,所获序列与Gen Bank数据库进行BLAST比对,鉴别其菌种名;采用Kirby-Bauey纸片扩散法检测11株菌株药敏情况。结果:11株临床诺卡菌在脑心浸液琼脂培养基上生长迅速;PCR扩增菌株16S rRNA基因序列经BLAST比对,结果与Gen Bank中已知的诺卡.菌同源性>98%,分离的菌株分别为Nocardia otitidiscaviarum 4株、Nocardia cyriacigeorgica 3株、Nocrdia wallacei1株及Nocardia farcinica3株;药敏实验结果显示11株诺卡菌均对阿米卡星敏感,对亚胺培南耐药,其中Nocardia cyriacigeorgica对氨苄西林、环丙沙星、克拉霉素及阿莫西林的药物敏感性结果与其它菌株截然不同。结论:测定16S rRNA序列能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌菌种,各菌株均对阿米卡星敏感,对亚胺培南耐药。; 刘涛华王颜颜牟丽丽吕倩陈燕张荣庆康颖倩; 关键词：诺卡菌放线菌 RRNA 聚合酶链式反应

慢性阻塞性肺疾病模型大鼠细胞因子水平变化的研究被引量：6: 2015年; 目的制备大鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型,监测造模不同时期大鼠血清细胞因子水平变化,探讨细胞因子水平监测对慢性阻塞性肺疾病病情发展的评估价值。方法采用气管内两次注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及熏香烟的复合刺激法制备COPD大鼠模型,于造模28 d、42 d、56 d分别测定大鼠肺功能、动脉血气,肺组织HE染色观察肺的病理形态变化,并用双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量。结果与对照组比较,造模不同时期大鼠第0.3 s用力呼气容积(FEV0.3)、第0.3 s用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC)、动脉血p H、氧分压(Pa O2)均降低,二氧化碳分压(Pa CO2)升高;大鼠血清IL-8、TNF-α含量升高,IL-10含量降低,且随着造模时间延长,细胞因子水平变化越明显;肺组织病理改变明显。结论 COPD模型大鼠血清中IL-8、TNF-α及IL-10的含量在造模早期就出现明显改变,且随病情的变化而变化,提示细胞因子的监测对COPD疾病早期诊断及病情评估有一定价值。; 陈燕熊英李玲张金娟贺勇; 关键词：血气分析细胞因子类

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陈燕

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