陈文生
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：广州医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达被引量：2
- 2016年
- 目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG);诱导1、2、4和6h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果:重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1∶1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论:成功制备pETGHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)、诱导时间为2h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。
- 郭晓兰谭茵陈文生林玉茵戴建威
- 关键词：重组蛋白抗体黑色素瘤
- 番茄红素解除PM2.5暴露内皮细胞的氧化损伤被引量：3
- 2015年
- 目的探讨番茄红素对PM2.5暴露内皮细胞氧化损伤的分子机制。方法利用CCK-8明确番茄红素减轻PM2.5暴露内皮细胞损伤的最适宜浓度;检测细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,评估番茄红素解除PM2.5对内皮细胞氧化损伤的作用;Western印迹检测细胞内缺氧诱导因子(HIF)-1α表达;q-PCR、ELISA检测细胞白介素(IL)-6表达水平。结果解除因PM2.5暴露造成氧化损伤的最佳番茄红素浓度为80μg/ml;番茄红素作用使PM2.5暴露内皮细胞氧化应激指标SOD活性升高48.04%,MDA含量下降38.89%,IL-6、HIF-1α恢复到正常细胞水平。结论番茄红素具有解除PM2.5暴露内皮细胞氧化损伤的作用。
- 陈文生孙灿兴戴建威
- 关键词：番茄红素PM2.5氧化应激白细胞介素缺氧诱导因子
- 人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨人生长激素释放激素受体剪接变异体1型(GHRHR SV1)对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,阐明GHRHR SV1对人肿瘤细胞的促增殖作用。方法:将GHRHR SV1真核表达载体导入HepG2细胞建立HepG2-SV1细胞系。设计对照组(野生型HepG2)、空载质粒组(HepG2-pCDNA 3.0细胞系)和干扰组(HepG2-SV1细胞系)。采用PCR和Western blotting法鉴定HepG2-SV1细胞系,CCK-8法检测各组细胞的增殖率,克隆形成实验检测各组细胞的单克隆形成率,细胞划痕实验检测细胞的迁移率。结果:PCR与Western blotting法检测,构建的HepG2-SV1细胞系能稳定表达GHRHR SV1;CCK-8法检测,干扰组HepG2-SV1细胞系的增殖率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05);克隆形成实验,干扰组HepG2-SV1细胞系的单克隆形成率约为空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系的3.5倍(P<0.05);细胞划痕实验,所构建的干扰组HepG2-SV1细胞系的迁移率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05)。结论:GHRHR SV1能促进HepG2细胞的增殖。
- 林玉茵陈文生郭晓兰谭茵贺小松戴建威
- 关键词：HEPG2细胞克隆形成率迁移率
- GHRH-RSV1调控小鼠皮肤黑色素瘤细胞B16BL6增殖的影响
- 陈美贞陈文生温晓君林娥
- PM2.5暴露通过调节miR-21表达诱发血管内皮通透性改变
- 目的： 血管内皮通透性改变不会引起显著的病变，但通透性的增大可能导致诸如冠心病、动脉粥样硬化等血管疾病，甚至癌症。文献报道血管内皮通透性改变是血管疾病发生的初始环节，通透性的增大导致血管弹性变化，血液中脂质也会沉积到血...
- 陈文生
- 关键词：转录因子血管疾病
- 穿心莲内酯抑制肿瘤细胞分泌物诱导的血管新生被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨穿心莲内酯(andrographolide,Andro)对人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成管能力的影响。方法:将不同体积浓度的Andro溶液作用于HUVECs,采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞存活率。采用半数致死量(IC50)的Andro溶液作用于HUVECs,采用Matrigel胶使HUVECs成管,通过计算成管率来评估Andro溶液对HUVECs成管能力的影响。此外,将A549细胞分泌物与Andro溶液同时处理HUVECs,检测其成管情况。采用Western印迹检测Andro溶液对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达水平的影响。结果:Andro溶液可抑制HUVECs的增殖,且呈浓度依赖性;Andro溶液对HUVECs的IC50为20μmol/L。选取20μmol/L的Andro溶液作用于HUVECs 24 h,发现Andro溶液显著抑制HUVECs的成管能力。另外,A549细胞分泌物促进HUVECs成管作用,而Andro溶液拮抗肿瘤细胞分泌物对HUVECs成管的促进作用,降低MMP-9的表达。结论:Andro能够抑制HUVECs成管,而且能够拮抗肿瘤细胞分泌物对HUVECs成管的促进作用,从而抑制血管新生。
- 郭晓兰赵茂州林玉茵陈文生王诗雯戴建威
- 关键词：穿心莲内酯细胞活力肿瘤细胞血管新生
