邹卫
- 作品数：14 被引量：31H指数：3
- 供职机构：河北科技大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人脑利钠肽制备中内毒素的去除工艺被引量：1
- 2018年
- 在重组人脑利钠肽(BNP)的分离纯化过程中去除内毒素,选用Chelating Sepharose FF亲和柱层析、Q Sepharose FF阴离子交换柱层析、Source 15反相柱层析、SP Sepharose FF阳离子交换柱层析组合的方法对BNP进行分离纯化。按照2015版药典中鲎试剂法检测各层析柱纯化阶段得到蛋白溶液中的内毒素含量;用HPLC方法检测各阶段所得蛋白的浓度和纯度。BNP制备过程中每一步层析在内毒素去除方面都有良好的效果,内毒素去除率超过90%;最终纯化所得BNP原液内毒素含量降至0.34 EU/0.5 mg,去除率高于99.99%,蛋白纯度高于98%。所设计的四步层析纯化分离方法在纯化重组人脑利钠肽的同时也能高效的去除蛋白溶液中内毒素,所得原液内毒素的含量远远低于国家药典对注射剂内毒素含量的最低限制,为重组人脑利钠肽的工业化生产奠定了基础。
- 朱重悦李力周志艳邹卫周晓雷
- 关键词：内毒素重组蛋白柱层析
- 一种拮抗乙肝病毒X蛋白结合蛋白的多肽、包含该多肽的药物及其应用
- 本发明涉及一种拮抗乙肝病毒X蛋白结合蛋白（HBXIP）的多肽，包含SEQIDNo.1的氨基酸序列或与SEQIDNo.1具有70％~100％相似性的氨基酸序列。本发明还涉及包含上述多肽的药物组合物及其在治疗和预防乳腺癌中的...
- 周晓雷朱重悦褚洁张世光邹卫
- 文献传递
- 一种N-聚糖修饰的胰高血糖素样肽-1类似物及其制备方法和应用
- 本发明公开一种N‑聚糖修饰的胰高血糖素样肽‑1类似物及其制备方法和应用。本发明首先公开了N‑聚糖修饰的胰高血糖素样肽‑1类似物，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，且所述氨基酸序列的天冬酰胺残基上修饰N‑聚糖。本发...
- 吴志刚邹卫刘欢梁增伟王瑜
- 重组人血管内皮生长因子165在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化与体外活性评价被引量：2
- 2016年
- 人血管内皮生长因子165(VEGF165)可有效促进血管新生和增加血管通透性,在伤口愈合方面有重要医疗价值。建立获取高纯度、高活性的优质重组VEGF165蛋白的方法具有重要意义。研究利用带有6组氨酸标签的二硫键形成蛋白A(Dsb A)的E.coli表达系统实现了Dsb A-VEGF165融合蛋白的可溶性表达;诱导过程中添加5%(v/v)的乙醇可显著提高工程菌中可溶性融合蛋白表达水平。融合蛋白通过Ni亲和层析粗纯,并经牛肠激酶酶切去除标签蛋白。随后利用肝素亲和层析精纯获得重组人VEGF165蛋白。非还原及还原SDS-PAGE电泳检测到分子量为约40 k Da的同源二聚体蛋白,促HUVEC细胞增殖实验显示重组蛋白具有较优的活性,EC50为13 ng/m L。研究实现了Dsb A-VEGF165的在E.coli中可溶性表达,建立了经济、高效的纯化方法,获得了高质量、高活性的重组人VEGF165蛋白。
- 周晓雷朱重悦张世光李海潮张竞王岩勃邹卫
- 关键词：人血管内皮生长因子165融合蛋白原核表达蛋白纯化
- NDRG2上调PTEN表达抑制乳腺癌细胞迁移的实验被引量：6
- 2017年
- 目的利用具有相同遗传背景但不同转移能力的乳腺癌细胞模型MCF-7、LM-MCF-7以及MDA-MB-231细胞,研究NDRG2调控乳腺癌细胞迁移的作用及机制。方法利用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测MCF-7、LM-MCF-7以及MDA-MB-231细胞中NDRG2和PTEN mRNA和蛋白表达水平;构建pCMV-NDRG2和pCMV-PTEN表达载体以及设计合成NDRG2和PTEN siRNA,通过转染过表达或沉默NDRG2和PTEN表达,Transwell迁移实验检测转染后细胞迁移能力改变,Western blot检测NDRG2和PTEN表达调控关系。结果 MCF-7细胞中NDRG2和PTEN mRNA水平和蛋白表达水平显著高于LM-MCF-7和MDA-MB-231细胞(P<0.05);在LM-MCF-7和MDA-MB-231中上调NDRG2表达可降低细胞迁移能力至13.02%和26.33%(P<0.01);在MCF-7细胞中沉默NDRG2表达可增强细胞迁移能力至354.62%(P<0.01);蛋白免疫印迹检测显示PTEN表达受NDRG2调控;沉默(或过表达)NDRG2表达,同时过表达(或沉默)PTEN,MCF-7(或LM-MCF-7)细胞迁移能力未发生显著变化(P>0.05)。结论乳腺癌细胞中,NDRG2的表达下调,导致PTEN表达下降,解除了对乳腺癌细胞迁移的抑制作用。NDRG2/PTEN信号途径的沉默是乳腺癌细胞获得高迁移能力的重要机制。
- 周晓雷朱重悦张世光周志艳李海潮邹卫
- 关键词：乳腺肿瘤NDRG2PTEN细胞迁移
- NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖被引量：5
- 2016年
- 背景与目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型,研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)调控乳腺癌细胞增殖的作用及分子机制。方法:通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测MCF-7/LM-MCF-7细胞中NDRG2蛋白表达水平;构建NDRG2真核表达载体及si RNA干扰片段,通过转染上调或沉默NDRG2表达,流式细胞实验检测细胞增殖能力,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)表达,免疫荧光染色检测β-catenin细胞定位;共转染MCF-7细胞NDRG2 si RNA和pCMV-Tcfδ,流式细胞实验检测细胞增殖能力。结果:NDRG2的蛋白表达水平同乳腺癌细胞增殖能力负相关;在增殖的LMMCF-7细胞中上调NDRG2表达,细胞增殖指数(proliferation index,PI)由47.18%下降至31.78%(P<0.001);在低增殖的MCF-7细胞中沉默NDRG2表达,PI由32.00%上升至52.59%(P<0.001);Western blot及免疫荧光结果显示,NDRG2可抑制β-catenin表达,并抑制其聚集入核;流式细胞检测结果显示,共转染si RNA和pCMV-Tcfδ的MCF-7细胞增殖能力未增强,进一步说明NDRG2是通过抑制β-catenin的转录调节作用抑制肿瘤细胞增殖。结论:在乳腺癌细胞中,NDRG2的表达水平下调,导致β-catenin聚集入核,并激活下游靶基因,促进乳腺癌细胞增殖。此分子机制对阐明乳腺癌细胞增殖调控机制具有重要意义。
- 周晓雷朱重悦张世光周志艳李海潮邹卫
- 关键词：乳腺肿瘤Β-连环蛋白细胞增殖
- 重组人脑利钠肽(rhBNP)不同给药方式对治疗慢性心力衰竭急性失代偿性重症的影响被引量：17
- 2017年
- 重组人脑利钠肽(新活素,rh BNP)已经广泛地应用于治疗慢性心力衰竭急性失代偿性重症(ADHF),给药方式对于治疗ADHF患者临床疗效的影响尚缺乏报道。本研究试图通过对比持续给药和间歇给药两种方式阐明给药方式对其疗效的影响。本研究选择入我院的ADHF患者50例,随机分为对照组和实验组各25人,对照组为持续给药组,实验组为间歇给药组。给药后观察两组患者的心率、每搏输出量、心脏指数、心功能指标、平均动脉压、尿量及血浆脑钠肽水平的变化。研究结果表明:治疗后,两组患者的上述观察指标均得到改善(p<0.05)。持续给药组的疗效强于间歇给药组,但两组无统计学差异(p>0.05)。实验组在血流动力学等参数改善不优于对照组。因此,我们初步认为rh BNP治疗慢性心力衰竭急性失代偿重症患者的疗效显著,但与持续给药方式相比,间歇给药方式无明显优势。因此,我们建议重组人脑利钠肽(rh BNP)在临床治疗应用上应该采取持续给药方式对ADHF患者进行治疗。
- 李靖褚洁周晓雷张世光张世光邹卫
- 一种白介素39特异性拮抗蛋白及其在治疗自身免疫性疾病中的应用
- 本发明涉及一种白介素39特异性拮抗蛋白，编码该蛋白的基因，及其在治疗自身免疫性疾病中的应用，本发明可通过与IL‑39的结合，抑制其在自身免疫疾病中的功能。实验结果显示，白介素39特异性拮抗蛋白对狼疮小鼠MRL/lpr具有...
- 周晓雷朱重悦褚洁张世光邹卫
- 文献传递
- 重组人脑利钠肽的纯化与活性测定被引量：1
- 2016年
- 目的:建立重组人脑利钠肽(BNP)的纯化方法,筛选疏水作用层析纯化介质并优化纯化条件。方法:根据带有6×His标签的Dsb A-BNP融合蛋白的特性,采用金属螯合亲和层析(IMAC)、凝血酶酶切去除His-Dsb A、阳离子交换层析等步骤进行粗纯;利用BNP的疏水性,分别选用不同疏水性质的介质Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)及Source 15进行精纯;用SDS-PAGE和HPLC检测纯化获得的BNP的含量及纯度;用细胞法对BNP进行活性检测。结果:经IMAC、酶切去除标签蛋白及阳离子交换层析纯化后,获得纯度为60%的BNP;Hi Trap Butyl FF、Hi Trap Phenyl(HS)等疏水介质与BNP的吸附效果不佳,而经Source 15反相层析后,BNP的纯度可达98.98%,活性检测与对照品一致。结论:利用Source 15反相层析可获得高纯度、活性优的BNP原液,可满足后期制剂处方实验的要求,为后续研究奠定了基础。
- 朱重悦周晓雷张世光李海潮张竞王岩勃邹卫
- 关键词：人脑利钠肽疏水作用蛋白活性
- 重组人脑利钠肽等电点分析全柱成像毛细管等电聚焦电泳法的建立及验证
- 2023年
- 目的建立重组人脑利钠肽等电点(isoelectric point,pI)分析的全柱成像毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing-whole column imaging detection,CIEF-WCID)法,并进行验证。方法采用CIEF-WCID法对两性电解质、占位剂、蛋白浓度、聚焦时间等进行优化后,获得检测重组人脑利钠肽的最佳检测条件。对建立的方法进行重复性、样品间精密度和耐用性验证,并对连续生产的3批重组人脑利钠肽进行pI分析。结果选择HR AESlyte 8-10.5为两性电解质,25 mmol/L氢氧化钠为占位剂,以87.5μg/mL为样品检测终浓度,聚焦时间为8 min。同一样品连续进样6次,检测pI相对标准偏差(RSD)为0.1%;6份样品检测pI RSD为0.1%;在样品不同终浓度下,主峰pI RSD为0.1%,不同放置时间下,样品pI RSD为0.1%,但pI标记物不可随意更改。连续3批重组人脑利钠肽样品pI均可检出。结论建立的重组人脑利钠肽pI分析的CIEF-WCID法,重复性好、精密度高,可用于重组人脑利钠肽后续的质量控制。
- 张竞周志艳李丹丹安丽康王岩勃邹卫
- 关键词：重组人脑利钠肽等电点
