王吉平
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：贵州医科大学基础医学院生物学教研室更多>>
- 发文基金：贵阳市科学技术计划项目贵州省科学技术基金贵州省教育厅自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 致倦库蚊天蚕素(Cecropin)基因家族的克隆和表达分析
- 目的：克隆致倦库蚊Cecropin基因家族的4个基因;比较分析Cecropin家族基因的结构、氨基酸序列、蛋白理化特性，预测蛋白空间结构，以及其进化关系;了解Cecropin家族基因在致倦库蚊不同发育时期的表达谱;选择C...
- 王吉平
- 关键词：致倦库蚊基因克隆表达谱
- 文献传递
- 美洲大蠊几丁质酶基因的原核表达及蛋白纯化被引量：3
- 2016年
- 昆虫几丁质酶是昆虫几丁质代谢不可或缺的关键酶类。本研究旨在构建美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1基因原核表达载体,纯化并鉴定Pa Cht1重组蛋白,为后续酶活等测定奠定基础。定向克隆Pa Cht1基因成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将构建成功的pET32a-Cht1重组表达质粒导入大肠埃希菌Rosetta中,分别对诱导剂IPTG浓度和诱导时间进行优化,确定最佳诱导浓度和诱导时间,并对表达产物进行可溶性分析。表达产物经镍离子柱纯化后通过Western Blot鉴定。结果表明,美洲大蠊几丁质酶Pa Cht1成熟肽基因编码区长1 083 bp,编码360个氨基酸。最佳诱导浓度和诱导时间分别为0.2 mmol/L和4 h。所得重组蛋白大小约60 k D,与预期结果大小一致,重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Western Blot鉴定重组蛋白可与6×His-tag单克隆抗体特异性结合。说明成功构建了原核表达载体pET32a-Cht1,并诱导表达获得了重组几丁质酶蛋白。
- 李宏伟王吉平张堤张春林赵文静张晶翟素珍
- 关键词：美洲大蠊几丁质酶基因原核表达蛋白纯化
- 致倦库蚊Cecropin基因家族的比较和系统发育分析被引量：2
- 2016年
- 利用生物信息学方法比较分析了致倦库蚊Cecropin家族4成员的基因结构、氨基酸序列、蛋白理化特性,预测蛋白空间结构,并基于7种昆虫绘制分子进化树,随后使用RT-PCR方法获取致倦库蚊Cecropin家族4成员的c DNA。结果表明：致倦库蚊Cecropin家族基因有两条正向编码,两条反向编码,长度为330~544 bp,由2个外显子和1个内含子构成;氨基酸序列长度为59~61 aa,具有两条基序和多个保守位点;编码的蛋白理论分子量为6 284.6~6 619.0 k D,p I值为10.36~11.24,亲水性平均系数为0.393~0.551;蛋白预测的二级结构和三级结构结果基本一致,它们具有1个信号肽结构域和1个催化结构域,结构域主要由α-螺旋构成;7种昆虫的Cecropin蛋白进化关系与物种进化关系基本一致,并以“目”或“亚目”为单位分别聚类,CPIJ005108与致倦库蚊Cecropin祖先基因最相似。本研究的分析结果可为蚊科Cecropin结构和功能的研究提供有价值的信息。
- 赵文静张晶张春林翟素珍王吉平
- 关键词：致倦库蚊CECROPIN基因家族生物信息学
- 致倦库蚊天蚕素CecB2基因的原核表达及蛋白纯化
- 2016年
- 构建致倦库蚊(贵阳株)天蚕素B2(CecB2)基因原核表达载体,并原核表达获得重组蛋白。定向克隆CecB2成熟肽序列至原核表达载体pET32a(+)上,将成功构建的pET32a-CecB2重组表达质粒转化大肠埃希菌Rosetta中经IPTG诱导表达,对IPTG诱导浓度和诱导时间优化后表达所得目的蛋白采用镍离子亲和层析纯化,SDS-PAGE和Western blot检测鉴定表达蛋白。结果表明,成功构建原核表达载体pET32a-CecB2,IPTG浓度和时间优化结果为IPTG浓度为0.05mmol/L,诱导时间为3h。SDS-PAGE检测获得大小约25ku的可溶性纯化蛋白,Western blot鉴定纯化蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生抗原抗体结合反应。说明所构建原核表达载体pET32a-CecB2能在大肠埃希菌中可溶表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 王吉平张堤张春林赵文静张晶翟素珍
- 关键词：致倦库蚊原核表达蛋白纯化
- 球孢白僵菌Bb_bm01菌株PacC基因突变体的构建及其毒力和孢子萌发率的测定被引量：2
- 2016年
- 通过敲除球孢白僵菌(Beauveria bassiana)菌株bm01的PacC基因,研究了PacC基因敲除对球孢白僵菌毒力和分生孢子萌发速率的影响。利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法转化Bb_bm01,通过同源重组敲除Bb_bm01的PacC基因,筛选ΔPacC基因敲除菌株,获得了遗传稳定的ΔPacC基因敲除菌株。通过毒力测定,对比了野生菌株和ΔPacC基因敲除菌株对家蚕和大蜡螟毒力的差异,发现ΔPacC基因敲除菌株对家蚕和大蜡螟毒力都减弱,差异具有统计学意义(p<0.01),表明在Bb_bm01菌株中的PacC基因与它的致病性相关;另外,比较ΔPacC基因敲除菌株与野生型菌株Bb_bm01在SDB液体培养基中的孢子萌发率,发现ΔPacC基因敲除菌株孢子萌发明显减慢,表明PacC基因参与调控孢子萌发。
- 翟素珍王吉平陈晶晶卢海泉王四宝张春林
- 关键词：球孢白僵菌孢子萌发
- 美洲大蠊i型溶菌酶的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2016年
- 旨在获得美洲大蠊i型溶菌酶Pa I的原核表达蛋白,并制备鼠抗Pa I多克隆抗体。PCR扩增Pa I成熟肽编码序列,构建原核表达载体p ET28a-Pa I,诱导表达、纯化Pa I-His融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测抗血清效价,Western blotting检测多克隆抗体的特异性。结果显示,Pa I成熟肽部分的编码序列长414 bp,由137个氨基酸组成。构建的原核表达载体p ET28a-Pa I在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功表达,SDS-PAGE检测显示纯化的Pa I-His融合蛋白的大小约为18 k D,间接ELISA和Western blotting分析表明免疫小鼠产生的抗血清具有较高的效价和较强的特异性。美洲大蠊溶菌酶Pa I成功实现原核表达,并获得了高效价特异性多克隆抗体。
- 王赟翟素珍张春林王吉平
- 关键词：美洲大蠊溶菌酶原核表达多克隆抗体
- 致倦库蚊几丁质酶家族基因的鉴定与分析被引量：5
- 2016年
- 利用生物信息学方法鉴定致倦库蚊23条几丁质酶基因,并对它们进行命名、分组,以及基因结构、蛋白结构域、蛋白理化特性和系统发育分析,随后使用q PCR方法检测Cq Cht10在致倦库蚊生长各时期的相对表达量。结果表明,致倦库蚊几丁质酶基因长度为1 360~19 218 bp,蛋白长度为353~2 681 aa,分子量为39.557~279.503 k D,等电点为4.76~8.69。它们属于GH18家族,每条几丁质酶包含信号肽区域、催化结构域、几丁质结合域和连接区域,但包含的数量不同。此外,每条几丁质酶的催化结构域均包含保守序列FDGXDLDWEYP。本研究将致倦库蚊几丁质酶划分为12组,组Ⅰ~组Ⅶ沿用早期研究的分组标准,此外将组Ⅷ更名为组Ⅸ,再新增4个分组。Cq Cht10的q PCR实验结果显示,该基因在Ⅱ龄~Ⅳ龄幼虫期呈高表达,在蛹期和成虫期呈低表达,而在卵期和Ⅰ龄幼虫期呈微量表达,此外在雌蚊和雄蚊中无显著差异表达,提示该基因与致倦库蚊的蜕皮相关,且与性别关联不大。本研究的分析结果能够为致倦库蚊几丁质酶基因的功能研究提供有价值的信息。
- 赵文静张晶张春林王吉平孙谦
- 关键词：致倦库蚊几丁质酶生物信息学
