王晓玉
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 供职机构：上海海洋大学水产与生命学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 哲罗鲑胰岛素样生长因子-I的原核表达及活性鉴定被引量：1
- 2016年
- 为进一步了解哲罗鲑IGF-I,实验采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,从哲罗鲑肝脏的总RNA中扩增出胰岛素样生长因子-I（IGF-I）的c DNA开放阅读框（open reading frame,ORF）序列。利用原核表达载体p S构建重组表达质粒（IGF-I/p S）,并将其转化到宿主大肠杆菌Rosetta后经IPTG诱导获得重组哲罗鲑IGF-I蛋白。经SDS-PAGE电泳检测,在35~50 ku有条带与预期相符,且重组蛋白以包涵体的形式存在。包涵体经变性/复性实验后,获得纯化的IGF-I融合蛋白。ELISA鉴定结果显示,目的蛋白能特异性识别抗鱼类IGF-I抗体,表明获得了具有免疫活性的哲罗鲑IGF-I蛋白。细胞增殖实验（MTT法）结果显示,重组IGF-I蛋白对大麻哈鱼胚胎细胞（CHSE-214）、鲤上皮细胞（EPC）及虹鳟性腺细胞（RTG-2）均有显著促增殖作用,表明获得的重组IGF-I蛋白具有细胞水平的生物活性。本研究为深入了解IGF-I在哲罗鲑生长发育中的调控机制及绿色高效促生长制剂的研发奠定基础。
- 王晓玉徐黎明刘淼赵景壮卢彤岩曹永生尹家胜
- 关键词：哲罗鲑胰岛素样生长因子-I原核表达生物活性
- 哲罗鲑胰岛素样生长因子Ⅱ cDNA的克隆与组织表达分析被引量：1
- 2015年
- 为了研究胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factors-Ⅱ,IGF-Ⅱ)在哲罗鲑Hucho taimen生长繁殖过程中所起的作用,根据Gen Bank收录的大西洋鲑IGF-Ⅱ基因开放阅读框序列(NCBI登录号:NM_001123647)设计用于哲罗鲑IGF-Ⅱ开放阅读框扩增的引物,以哲罗鲑肝脏总RNA反转录成的cDNA为模板,利用PCR方法克隆获得哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的开放阅读框。生物信息学分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ基因的长度为645 bp,编码含有214个氨基酸残基的蛋白,该蛋白的相对分子质量为24554,等电点为9.92;哲罗鲑IGF-Ⅱ前肽由信号肽、B、C、A、D、E肽6部分构成;同源性比对和系统进化分析结果显示,哲罗鲑IGF-Ⅱ与鲑科鱼类IGF-Ⅱ核苷酸序列同源性最高,聚为一支,其中与大西洋鲑的IGF-Ⅱ同源性最高(98.6%),该基因在进化过程中有着高度保守的进化特性;用荧光定量PCR技术检测2龄哲罗鲑IGF-Ⅱ基因在不同组织中的表达,结果显示,该基因在肝脏中表达量最高,在心脏、鳃、脾、后肠、头肾、胃中的表达量次之,而在前肠和脑中的表达量最低。
- 吴秀梅徐黎明王晓玉纪锋赵景壮刘淼曹永生卢彤岩尹家胜
- 关键词：哲罗鲑
- 哲罗鲑胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)cDNA分子克隆、序列分析及组织表达被引量：5
- 2016年
- 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从哲罗鲑(Hucho taimen)肝脏的总RNA中扩增出胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的c DNA开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列,运用软件对其进行生物信息学分析,并利用荧光实时定量PCR技术检测了哲罗鲑成鱼不同组织中IGF-Ⅰ mRNA的表达情况。结果显示,IGF-Ⅰ基因的c DNA开放阅读框为573 bp,编码190个氨基酸,蛋白质等电点为9.21,氨基酸结构由信号肽、B、C、A、D结构域及E肽组成;氨基酸序列与其他鲑科鱼类具有较高的同源性,其中与北极红点鲑的IGF-Ⅰ同源性最高(99.2%);组织表达分析显示,哲罗鲑IGF-Ⅰ mRNA在肝脏中表达量最高,在鳃、前肠中次之,在脑、头肾、脾、心、胃和肌肉等组织中的表达量较低。
- 王晓玉纪锋徐黎明赵景壮刘淼曹永生尹家胜
- 关键词：进化树
- 哲罗鲑胰岛素样生长因子-I(IGF-I)cDNA分子克隆、序列分析及组织表达
- 胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)在鱼类的生长发育过程中起着重要的调节作用。此研究采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从哲罗鲑肝脏的总RNA中扩增出IG...
- 王晓玉徐黎明吴秀梅纪锋赵景壮刘淼曹永生卢彤岩尹家胜
- 关键词：哲罗鲑进化树
- 文献传递
