刘青
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河北大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项河北省自然科学基金河北省生物工程重点学科资助更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- IL-1RA-PEP融合蛋白的构建及其对脑缺血再灌注后细胞凋亡的抑制作用研究
- 2016年
- 目的构建白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)与细胞渗透肽(PEP-1)融合蛋白,探讨其对脑缺血再灌注(I/R)后神经细胞凋亡的抑制作用。方法构建IL-1RA与PEP-1融合基因,通过诱导表达和分离纯化,制备IL-1RA-PEP融合蛋白。建立大鼠大脑中动脉阻断模型(MCAo),形成I/R损伤,静脉注射IL-1RA-PEP,24 h后检测其在大鼠脑组织的分布,以及脑组织梗死体积,炎性细胞浸润和神经细胞凋亡情况,并分析相关凋亡蛋白的表达变化。结果 IL-1RA-PEP融合蛋白具有拮抗IL-1的生物学活性,其能有效地渗透进入I/R大鼠脑组织。给药24 h后,缺血半球脑梗死体积和神经细胞凋亡数量减少,胱天蛋白酶(caspase)3和9等凋亡蛋白表达水平下降,同时Bcl-x L抗凋亡蛋白表达水平升高。结论 IL-1RA-PEP融合蛋白能有效地渗透I/R大鼠脑组织,通过对相关凋亡蛋白的调控,抑制了I/R后脑组织神经细胞凋亡,对I/R损伤具有治疗作用。
- 张冬冬邹民吉张亚涛徐涛付文亮黄志广甘向东刘青董俊兴徐东刚
- 关键词：脑缺血细胞凋亡
- 基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的RIP1稳定敲除细胞模型的构建及功能研究被引量：3
- 2017年
- 目的利用CRISPR/Cas9技术构建RIP1稳定敲除的人永生化表皮细胞HaCaT细胞株,在此基础上对RIP1功能进行探究。方法针对GenBank中RIP1基因序列,设计靶向RIP1不同外显子的小指导RNA(sgRNA),并将其克隆至SpCas9-2A-Puro V2.0(PX459)载体中,获得PX459-sgRNA基因敲除载体。将上述载体转染HaCaT细胞并通过嘌罗霉素筛选获得阳性克隆,免疫印迹和DNA测序技术进一步鉴定RIP1敲除效果最佳的单克隆。通过CCK-8实验检测RIP1缺失对细胞增殖能力的影响。分别用TNF-α处理HaCaT^(WT)细胞和HaCaT^(R1P1KO)细胞,流式细胞仪检测敲除RIP1对TNF-α诱导细胞死亡的影响,进一步通过胱天蛋白酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK判断细胞死亡类型。结果与结论利用CRISPR/Cas9系统成功构建RIP1完全敲除的细胞模型,功能分析发现敲除RIP1导致细胞增殖能力减慢;HaCaT^(R1P1KO)对TNF-α诱导的死亡畀常敏感,这种死亡能被Z-VAD-FMK显著抑制,证明为caspase依赖性细胞凋亡。该研究为探究RIP1在皮肤损伤中的作用奠定了基础。
- 陈瑶刘青邢微微陈惠华张冬冬王园园邹民吉徐东刚刘中成
- 关键词：基因敲除HACAT细胞凋亡细胞增殖
- 蝇蛆肽的发酵法制备及其对果蝇的延寿作用被引量：1
- 2015年
- 以米曲霉（Aspergillus oryzae）沪酿3.042转化蝇蛆蛋白,蝇蛆蛋白的主要组分91.8ku蛋白经发酵后被降解,转化形成了分子质量为4.3~65.9ku的蝇蛆肽,发酵液中蝇蛆肽质量浓度为7.9mg/mL,肽转化率为31.6%.在饲喂雌雄黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的基础培养基中分别添加蝇蛆肽,使其质量分数为0,1%,2%,4%,每天分组记录果蝇的死亡数目和存活时间,直至果蝇全部自然死亡.结果表明,饲喂高浓度蝇蛆肽的雌雄果蝇的平均寿命和平均最高寿命均显著延长,提示蝇蛆肽具有一定的抗衰老作用.
- 武金霞刘青刘禹杉王静之张贺迎
- 关键词：黑腹果蝇抗衰老作用
