王楠
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 供职机构：滨州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：山东省医药卫生科技发展计划项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺纤维化中1,25-(OH)_2D_3对内质网应激及ATG12表达的影响被引量：5
- 2018年
- 目的 1,25-(OH)2D3是否影响肺纤维化中内质网应激及自噬仍不清楚。文章探讨内质网应激及自噬在大鼠肺纤维化发生发展中的作用,研究了1,25-(OH)2D3对内质网应激相关分子及ATG12表达的影响。方法雄性SD大鼠区组随机分为对照组、模型组和治疗组,每组30只。模型组、治疗组经气管灌注博来霉素(5.0 mg/kg),对照组经气管灌注等渗盐水200μL/只。自气管灌注后第2天起,治疗组腹腔注射1,25-(OH)2D32μg/kg,模型组腹腔注射1,25-(OH)2D3溶剂(0.1%乙醇、99.9%丙二醇)200μL/只,对照组腹腔注射等渗盐水200μL/只,各种注射均为隔天1次,直至处死。用实时定量PCR方法检测PERK、ATF4及ATG12的mRNA表达状况,用免疫组化方法检测PERK、ATF4的蛋白质表达水平。结果与对照组14、21、28 d的PERK水平(1.01±0.23、1.05±0.09、1.04±0.08)比较,模型组(2.30±0.19、3.59±0.27、4.63±0.19)和治疗组(1.44±0.34、1.92±0.17、2.52±0.15)表达均增加(P<0.05);与对照组14、21、28 d的ATF4水平(1.04±0.07、1.05±0.08、1.03±0.10)比较,模型组(2.10±0.12、3.91±0.14、6.20±0.28)和治疗组(1.49±0.27、2.52±0.42、4.02±0.31)表达均增加(P<0.05)。模型组和治疗组14、21、28 d组内不同时间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,14 d模型组、治疗组中ATG12的mRNA表达明显升高(P<0.05),而21、28 d ATG12的mRNA表达均显著降低(P<0.05)。模型组肺组织中PERK、ATF4蛋白质在肺泡上皮细胞、肺间质细胞,尤其是肺巨噬细胞中表达,可见大量棕褐色颗粒,较正常肺组织中两种蛋白质阳性信号明显增强。14、21、28 d模型组和治疗组中PERK、ATF4的蛋白质表达均明显高于对照组(P<0.05),且随建模时间的延长蛋白质的表达递增,14、21、28 d组内两两比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 1,25-(OH)2D3可能通过抑制PERK-e IF2α-ATF4信号通路来抑制肺纤维化的发生发展。
- 刘营刘乃国王楠
- 关键词：内质网应激肺纤维化1,25-(OH)2D3
- PU.1和IL-9在肺纤维化大鼠周围免疫器官内的表达及其作用研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨肺纤维化大鼠周围淋巴器官内PU.1和IL-9的表达以及1,25-(OH)_2D_3对其表达的影响。方法 150只雄性SD大鼠随机分为2个大组:预防组(对照组Ⅰ、模型组Ⅰ、给药组Ⅰ,n=30)和治疗组(对照组Ⅱ、模型组Ⅱ、给药组Ⅱ,n=20)。大鼠气管内注射博来霉素建立肺纤维化模型,给药组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3进行预防和治疗。用Real-time PCR和免疫组化方法研究了肺纤维化大鼠淋巴结节和脾脏内PU.1和IL-9的表达状况。结果在建模14、21、28 d 3个时间点,模型组Ⅰ/Ⅱ的淋巴结和脾脏内IL-9蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达(P<0.05)。建模21 d时,模型组Ⅰ的脾内PU.1蛋白质表达明显高于对照组Ⅰ(P<0.05);建模28 d时,模型组Ⅰ/Ⅱ的淋巴结和脾脏内PU.1 mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ(P<0.05)。而给药组Ⅰ/Ⅱ的淋巴结和脾脏内IL-9和PU.1的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比,在各时间点都没有统计学差异(P>0.05)。结论在肺纤维化大鼠的外周淋巴器官中,IL-9较早出现高表达(14 d),并一直维持,而PU.1在较晚时期出现高表达(21 d),提示这2种细胞因子在大鼠肺纤维化发生发展中可能都具有一定的作用。1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠外周淋巴器官中的IL-9和PU.1表达没有明显的影响,说明其治疗作用可能与IL-9和PU.1无关。
- 刘乃国董洪亮倪娜许梦婷郑静王楠李新静
- 关键词：肺纤维化SD大鼠IL-9淋巴结
- 组蛋白H3Ser10磷酸化对猪卵母细胞减数分裂的影响被引量：1
- 2020年
- 目的组蛋白磷酸化修饰在卵母细胞减数分裂过程中作用机制的研究较少。文中旨在探讨猪卵母细胞中组蛋白H3的磷酸化模式及对卵母细胞减数分裂过程的调控。方法首先采用免疫组化法鉴定组蛋白H3Ser10(H 3S10)磷酸化在猪卵母细胞减数分裂过程的表达情况,随后体外成熟猪卵母细胞,将卵丘卵母细胞复合体(COCs)分为4个组,一组正常培养作为对照组,另外3组分别添加5、10、30μmol/L ZM447439的成熟液,体外培养27 h,分别为5、10、30μmol/L ZM447439处理组。统计卵母细胞在减数分裂各个时期所占的比例,并进一步检测猪卵母细胞组蛋白H3S10磷酸化的表达模式及蛋白激酶Aurora B基因表达的情况。结果与GVBD期组蛋白H3S10磷酸化水平比较,MI期和AI期明显升高(P<0.05),AI期较MⅡ期明显升高(P<0.05)。与对照组相比,10、30μmol/L ZM447439处理组GVBD期卵母细胞比例[(32.14±0.51)%、(95.34±0.59)%]较对照组[(2.56±0.03)%]增加(P<0.05),MI[(66.88±0.13)%、(4.66±0.04)%]较对照组[(87.42±0.14)%]明显下降(P<0.05)、AI期[(1.01±0.03)%、(0.00±0.00)%]较对照组[(10.02±0.21)%]明显下降(P<0.05)。与对照组卵母细胞发生H3S10去磷酸化修饰比例(0)比较,10μmol/L、30μmol/L ZM447439处理组[(35.2±0.39)%、(95.4±0.65)%]明显升高(P<0.05)。与对照组相比,10、30μmol/L ZM447439处理组Aurora B基因的相对表达量显著降低(P<0.05)。结论组蛋白H3S10磷酸化修饰在哺乳动物卵母细胞成熟过程起着一定作用。Aurora B激酶抑制剂ZM447439处理引起组蛋白H3S10磷酸化水平及Aurora-B激酶的表达降低导致卵母细胞成熟障碍。
- 田明明孙大康孟玮王楠倪娜李清春王雁林孙洪亮
- 关键词：猪卵母细胞组蛋白减数分裂
- 1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠中PI3K、AKT、mTOR表达的影响及其机制研究被引量：8
- 2018年
- 目的观察1,25-(OH)_2D_3对特发性肺纤维化(IPF)大鼠中PI3K、AKT、m TOR表达的影响,并探讨其对IPF的作用机制。方法90只雄性SD大鼠随机分为模型组、治疗组及对照组,每组30只。模型组和治疗组按5 mg/kg的剂量气管内注射博来霉素,复制肺纤维化模型,对照组注入无菌生理盐水(200μl/只)。注射后第2天起,治疗组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3(2μg/kg),模型组和对照组分别腹腔注射1,25-(OH)_2D_3溶剂(200μl/只)和无菌生理盐水(200μl/只),均隔天1次。各组于第14、21和28天分别处死10只,检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,实时聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫组织化学方法分别从m RNA水平和蛋白质水平检测肺组织中PI3K、AKT、m TOR的表达。结果模型组和治疗组大鼠肺组织羟脯氨酸的含量,PI3K、AKT、m TOR 3种基因的转录表达和蛋白质表达量,在第14、21和28天均高于对照组(P<0.05),且治疗组中的上述指标,在各时间又均低于模型组(P<0.05)。结论IPF的发生发展过程中,PI3K-AKT-m TOR通路具有重要作用,1,25-(OH)_2D_3对IPF有一定的治疗作用,其机制可能是通过抑制PI3K-AKT-m TOR通路发挥其治疗作用。
- 董洪亮刘乃国苗双郑静倪娜王楠成苗青
- 关键词：1,25-(OH)2D3特发性肺纤维化
- 华支睾吸虫CsLegumain促胆管癌细胞迁移和侵袭的机制研究被引量：1
- 2022年
- 目的探讨华支睾吸虫CsLegumain在胆管癌细胞的增殖、侵袭和转移中的作用及其分子机制。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CsLegumain并转染胆管癌细胞,建立CsLegumain过表达细胞株。通过CCK8试验、细胞划痕试验、Matrigel Transwell试验分析CsLegumain在胆管癌细胞的增殖、侵袭和转移中的作用。通过实时荧光定量PCR及Western blot分别检测CsLegumain影响的靶分子转录水平和蛋白表达水平。结果成功构建CsLegumain稳定表达细胞株。CCK8试验显示,CsLeguamin对RBE细胞的增殖无显著影响(均P>0.05)。划痕实验中,过表达CsLegumain的RBE细胞其运动能力与对照组细胞相比显著增强,细胞间的距离明显变窄(均P<0.05)。Transwell试验显示,过表达CsLegumain的RBE细胞穿过基质小室的数量较对照组细胞数量多(P<0.05)。过表达CsLegumain组RBE细胞中E-cadherin和N-cadherin的转录水平及其蛋白表达水平均较对照组细胞显著降低(均P<0.05)。结论CsLeguamin对胆管癌细胞的增殖无显著影响,但具有促进胆管癌细胞迁移和侵袭能力,可能的机制是通过调控E-cadherin和N-cadherin的表达诱导EMT促进胆管癌细胞的迁移和侵袭。
- 褚衍菲颜丙芳任乐彬薛钧予王楠孟玮柏雪莲
- 关键词：华支睾吸虫胆管癌
- 活性维生素D3在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的探讨活性维生素D3[1,25(OH)2D3]在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对miR-29a的影响。方法 150只SD雄性大鼠随机分为纤维化发生干预组(90只)和纤维化后干预组(60只),纤维化发生干预组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ(n=30),纤维化后干预组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ(n=20)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入等体积生理盐水。给药组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射活性维生素D3,模型组Ⅰ/Ⅱ分别于手术后第2天和第14天腹腔注射等量的活性维生素D3溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇),对照组Ⅰ/Ⅱ分别在术后第2天和第14天腹腔注射等量的生理盐水。各种处理均为两天1次。纤维化发生干预组分别于手术后第14天、第21天和第28天处死大鼠取材,纤维化后干预组分别于手术后第21天和第28天处死大鼠取材,各小组每个时间点10只大鼠。用Masson染色法观察各组实验大鼠肺中胶原纤维的差异,用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化,用实时定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col)ⅠmRNA及miR-29a的相对表达量,用免疫组织化学方法检测α-SMA和ColⅠ蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化。结果博来霉素处理后,第14天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA和ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都明显高于对照组Ⅰ/Ⅱ,而其miR-29a表达与对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少。给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与模型组Ⅰ/Ⅱ相比有所增加(P<0.05)。在纤维化发生干预组中,与模型组Ⅰ相比,给药组Ⅰ在3个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA和蛋白质表达都显著降低(P<0.05),但在纤维化后干预组中的给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、α-SMA、ColⅠ的mRNA�
- 许梦婷刘乃国董洪亮郑静倪娜王楠
- 关键词：活性维生素D3肺纤维化实时定量聚合酶链反应MASSON染色免疫组织化学
- 活性维生素D3对大鼠肺纤维化中蛋白激酶D1介导的抗氧化通路的影响被引量：3
- 2016年
- 目的：探讨肺纤维化发生发展中蛋白激酶D1（PKD1）介导的线粒体抗氧化通路的作用以及活性维生素D3在纤维化过程中对该通路的影响。方法：雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组和治疗组。应用实时荧光定量PCR和免疫组织化学分别从mRNA和蛋白质水平检测大鼠肺组织中PKD1、核转录因子（NF-κB）和锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的表达。结果：在第14天，治疗组和模型组中PKD1、NF-κB和MnSOD的表达量都显著低于对照组，而治疗组中3种因子的表达量又明显高于模型组；在第21天，3种因子在模型组和治疗组中的表达量明显高于对照组。在第28天，3种因子在模型组和治疗组中的表达量与对照组相比两两之间均没有差异。结论：PKD1-MnSOD线粒体抗氧化通路在博莱霉素引起的大鼠肺纤维化早期发挥重要作用，活性维生素D3能够上调这一抗氧化通路，具有一定的抗氧化作用，对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用。
- 倪娜刘乃国高海洋董洪亮郑静王楠
- 关键词：肺纤维化活性维生素D3锰超氧化物歧化酶核转录因子-ΚB
- 1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响被引量：10
- 2016年
- 目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性炎症性疾病,病因不明,缺乏有效的治疗方法。文中旨在探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)和PI3K/AKT/mTOR通路在大鼠IPF中的作用,以及1,25-(OH)_2D_3对Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法 150只雄性SD大鼠随机分为:预防组(对照组Ⅰ、模型组Ⅰ、给药组Ⅰ,每组20只)和治疗组(对照组Ⅱ、模型组Ⅱ、给药组Ⅱ,每组30只)。对照组Ⅰ/Ⅱ行气管暴露手术,气管内给以200μL/只的无菌等渗盐水,并分别于第2和14天开始腹腔注射等渗盐水(200μL/只);模型组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射维生素D3的溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇,1μL/g体重);给药组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射1,25-(OH)_2D_3(2μg/kg体重)。大鼠气管内注射博来霉素建立IPF模型,给药组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3进行预防和治疗。检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞并用Fluo-3AM荧光负载,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^(2+)浓度。RT-PCR方法检测PI3K、AKT、mTOR mRNA的表达水平。结果模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量、肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)浓度以及PI3K、AKT、mTOR mRNA表达,在各时间点与相应对照组Ⅰ/Ⅱ相比均明显升高(P<0.05或P<0.01);给药组Ⅰ/Ⅱ与模型组Ⅰ/Ⅱ相比,上述指标均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中Ca^(2+)浓度与PI3K、AKT、mTOR mRNA表达之间具有显著正相关(r=0.598 8、r=0.623 0、r=0.6603,P<0.01;r=0.7012、r=0.6323、r=0.7403,P<0.01)。结论 PI3K-AKT-mTOR通路在大鼠IPF的发生发展中起重要作用,1,25-(OH)_2D_3可以降低肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)的浓度,抑制PI3K-AKT-mTOR通路,进而抑制IPF的发生发展。
- 董洪亮刘乃国苗双倪娜郑静王楠李新静
- 关键词：1,25-(OH)2D3肺纤维化肺泡II型上皮细胞CA^2+浓度
- 1,25(OH)_2VD_3对大鼠肺纤维化中IL-9及PU.1表达水平的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:探讨肺纤维化发生发展中IL-9及PU.1的作用以及活性维生素D_3[1,25(OH)2VD_3]在纤维化过程中对两种因子表达水平的影响。方法:90只SPF级雄性SD大鼠随机分成三个组:对照组、模型组和治疗组(n=30)。模型组和治疗组经气管注入博来霉素(5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组注入等体积生理盐水。治疗组于手术后第2天腹腔注射活性维生素D_3,模型组注射等量的活性维生素D_3溶剂(丙二醇),对照组注射等量的生理盐水。各种处理均为两天一次。分别于手术后第14、21和28天处死大鼠取材,各小组每个时间点10只大鼠。HE染色法观察各组实验大鼠肺部病理变化,Masson染色法观察胶原纤维的差异,碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化。应用Real-time PCR和免疫组化技术分别从mRNA水平和蛋白质水平检测大鼠肺组织中IL-9及PU.1的表达,ELISA法检测血清中IL-9的表达水平。结果:博来霉素处理后,第14天大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重。在三个时间点,模型组和治疗组的羟脯氨酸含量明显高于对照组,而治疗组明显低于模型组。在三个时间点,治疗组和模型组中IL-9及PU.1的表达量均逐渐增高,且都显著高于对照组;第14、21天治疗组两种因子的表达量均明显低于相应时间点的模型组,第28天时治疗组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。第21天模型组和治疗组IL-9和PU.1的表达水平明显高于第14天,第28天与第21天比较差异无统计学意义。结论:IL-9和PU.1在博来霉素引起的大鼠肺纤维化早期可能发挥促纤维化作用。活性维生素D_3可能通过降低PU.1的表达水平,进而减少IL-9的分泌,从而对大鼠肺纤维化的发生发展起一定的抑制作用。
- 郑静刘乃国倪娜董洪亮王楠成苗青
- 关键词：肺纤维化活性维生素D3IL-9
- 胆管癌细胞外泌体对自然杀伤细胞功能影响
- 2024年
- 目的探究胆管癌细胞来源的外泌体(RBE-Exos)对自然杀伤(NK)细胞功能的影响及其内在机制。方法采用免疫组化染色对比分析NK细胞在胆管癌组织和癌旁组织中的浸润数量;通过超速离心法从胆管癌细胞中分离出外泌体,透射电镜(TEM)观察RBE-Exos的形态特征,蛋白质印迹实验鉴定RBE-Exos的蛋白标志物;纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测RBE-Exos粒径分布。NK-92细胞与RBE-Exos共培养后,荧光染色示踪RBE-Exos进入细胞;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测黏附分子的表达水平。LDH法检测NK-92细胞的杀伤功能变化。结果免疫组化染色显示,与癌旁组织相比,表达CD56(t=2.977,P=0.008)和NKp46(t=4.530,P<0.001)特异性标志分子的NK细胞在癌组织中的浸润数量减少。RBE-Exos电镜下呈酒窝或杯状,特异性表达CD63和HSP70。NTA结果显示RBE-Exos平均直径为(102.90±7.00)nm。荧光染色显示,培养24 h后RBE-Exos进入NK-92细胞。RBE-Exos处理后,NK-92细胞失去了正常的聚团现象而呈现分散的状态。qRT-PCR结果显示,RBE-Exos处理组黏附分子CD11a(t=4.999,P=0.038)、CD18(t=9.225,P=0.012)和CD54(t=12.050,P=0.007)在转录水平上的表达较PBS组均降低。蛋白质印迹实验结果表明,RBE-Exos处理组较PBS组黏附分子CD11a(t=5.140,P=0.007)、CD18(t=7.177,P=0.002)和CD54(t=8.713,P<0.001)蛋白表达均减少。LDH检测显示,RBE-Exos减弱NK-92细胞对靶细胞的杀伤功能(20∶1,t=3.975,P=0.017;10∶1,t=5.776,P=0.005)。结论胆管癌可能通过释放外泌体抑制NK细胞黏附分子表达从而抑制其在肿瘤部位的浸润。
- 王新月王蔚琛张帆曹璋任乐彬王楠胡凤爱刘乃国高洪莲周洁柏雪莲
- 关键词：胆管癌外泌体自然杀伤细胞免疫逃逸黏附分子
