李强
- 作品数：8 被引量：56H指数：3
- 供职机构：重庆大学生物医学工程联合学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 生防菌株CQBs03-GFP在柑橘叶围的定殖能力
- 柑橘溃疡病是国内外柑橘生产上的重要病害,其病原菌为柑橘黄单胞柑橘亚种Xanthomonas citri subsp.citri),是国内外重大检疫性有害生物。目前生防微生物因其安全及有效性成为植物病虫害防治研究的热点之一...
- 王中康袁训娥李强殷幼平
- 关键词：GFP生防菌定殖枯草芽胞杆菌
- 文献传递
- 生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖被引量：44
- 2010年
- 【目的】利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因标记枯草芽孢杆菌生防菌株CQBS03,以研究其在柑橘叶片上的定殖规律。【方法】采用重叠PCR方法将p43启动子和gfp进行融合,并与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHY300PLK连接构建重组质粒pHY43G,以重组质粒电脉冲转化生防菌株CQBS03,培养后于荧光显微镜下观察并通过SDS-PAGE分析工程菌株GFP的表达情况,然后进行工程菌株对柑橘溃疡病菌的抑菌试验、生长动力学分析、稳定性测试。采用叶片喷雾方法接种,平皿稀释分离培养方法测定CQBS03-pHY43G在柑橘叶片上的定殖情况。【结果】重组菌CQBS03-pHY43G高效表达GFP,电泳后出现约29kDa的特异蛋白条带,外源质粒对宿主菌的生长未带来明显不利影响,质粒稳定性实验表明重组质粒pHY43G经30次传代后的稳定性为55%,室内平板抑菌实验结果显示CQBS03-pHY43G对柑橘溃疡病菌生防效果与出发菌株没有明显差异(P<0.01),CQBS03-pHY43G菌株在叶片喷雾接种后的0—15d,在柑橘叶片上的数量呈现急剧下降趋势,15d后下降速度稍缓,最后保持相对稳定的较低水平(1.73×103cfu·g-1)。【结论】成功地将gfp转入野生型枯草芽孢杆菌生防菌CQBS03中,构建了荧光标记菌株,初步明确了生防菌的定殖规律。
- 殷幼平袁训娥李强王中康
- 关键词：定殖枯草芽胞杆菌柑橘溃疡病菌
- 流体剪切力作用下间充质干细胞在三维支架上生长率理论模型的优化被引量：1
- 2019年
- 骨组织工程是目前治疗大段骨缺损措施中最有发展前景的途径之一,体外构建骨组织工程移植体时常采用生物反应器对细胞-支架复合体进行灌流培养,以获得具有良好修复效果的骨组织工程移植体。但目前对这一过程中种子细胞(特别是干细胞)生长率的理论建模还不完善,尤其是忽略了干细胞与终末细胞的差异。在本实验室前期研究基础上,本文利用实验室自制的灌流装置对细胞支架复合体施加不同模式和大小的流体剪切力刺激,考察流体剪切力对间充质干细胞(MSCs)增殖和成骨分化的影响,建立了流体剪切力作用对MSCs单个细胞生长率影响的回归分析模型。结果表明,0.022 5 Pa振荡剪切力更能促进MSCs增殖和成骨分化,同时修正了流体剪切力作用下MSCs单个细胞生长率的理论模型。基于以上结果,希望本文研究可为骨组织工程移植体体外灌流培养条件的优化提供理论指导。
- 李强李强杨力
- 关键词：间充质干细胞流体剪切力生物反应器成骨分化
- 昆虫肠道芽孢杆菌的绿色荧光蛋白标记及其表达特性研究
- 芽孢杆菌是很有应用潜力的蛋白表达宿主菌,可以用于蛋白表达系统的研究,生防细菌的构建等方面。构建带有苏云金芽孢杆菌cry3a基因非芽孢依赖型启动子和绿色荧光蛋白基因gfp/(Green Fluorescent Protei...
- 李强
- 关键词：绿色荧光蛋白荧光定量PCR
- 文献传递
- 生防菌株CQBs03-GFP在柑橘叶围的定殖能力
- 本研究根据枯草芽抱杆菌标准菌株Bs168的p43启动子和加基因序列分别设计两对特异引物p43F、p43R和gfpF、gfpR、PCR扩增获得了完整的启动子p43和gfP基因序列。进一步以上述PCR产物为模板，以p43F、...
- 王中康袁训娥李强殷幼平
- 关键词：GFP生防菌定殖枯草芽胞杆菌
- 特异性杀虫基因Bt cry3A在桑粒肩天牛幼虫两种肠道常驻内生菌中的转化和表达被引量：4
- 2008年
- 【目的】将特异性杀虫毒蛋白基因Btcry3A转入桑粒肩天牛(Apriona germari Hope,Ag)幼虫肠道常驻内生菌中,构建能在天牛幼虫肠道中定殖并表达特异性杀虫基因Bt cry3A的工程菌。【方法】以传统方法和16S rDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定Ag幼虫肠道优势的常驻内生菌,从中筛选出适合转化的候选菌株。利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力Bt cry3A基因的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305a和pHT7911分别转入Ag幼虫肠道常驻内生菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis Ag12,Ag12)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Ag13,Ag13)中。【结果】从Ag幼虫肠道共分离获得18个不同种的可培养细菌菌株,并从中选取菌株Ag12和Ag13作为出发菌株转入Bt cry3A基因。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试、伴胞晶体电镜检测、毒蛋白SDS-PAGE分析、工程菌定殖性分析以及生物毒力测试,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的常驻内生菌短短芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌中,并且工程菌Ag12-305a、Ag13-305a、Ag12-7911和Ag13-7911都能在天牛幼虫肠道内稳定生长、繁殖并表达分子量约65kDa的伴孢晶体杀虫蛋白Cry3A。【结论】Bt cry3A基因已成功转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势常驻内生菌中,获得了四株能在桑粒肩天牛幼虫肠道内定殖,并能表达目的杀虫基因Bt cry3A的转基因工程菌。
- 王中康何伟彭国雄夏玉先李强殷幼平
- 关键词：BT工程菌
- 绿色荧光蛋白基因原核表达载体的构建及其在昆虫肠道短短芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌中的表达被引量：3
- 2010年
- 【目的】构建带有苏云金芽孢杆菌cry3a基因非芽孢依赖启动子和绿色荧光蛋白基因gfp(Green Fluorescent Protein)的原核表达载体,并转化从桑粒肩天牛幼虫肠道分离的两株常驻细菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt,以检测cry3a启动子在昆虫肠道常驻菌中的启动子活性,获得GFP标记菌株,为常驻菌在昆虫幼虫肠道中的定殖情况和杀虫工程菌的构建奠定基础。【方法】采用重叠延伸PCR将cry3a基因启动子和gfp基因进行融合,并与pHT304载体连接构建重组质粒pHT3AG,获得的重组质粒以电脉冲转化肠道常驻菌短短芽孢杆菌CQUBb和苏云金芽孢杆菌CQUBt,于可见光和荧光显微镜下观察荧光并通过SDS-PAGE分析重组菌株的蛋白表达情况,然后对重组菌株进行生长动力学分析和稳定性测试。【结果】重组菌在营养期大量组成型表达GFP,经电泳分离在凝胶上出现约29kDa的特异蛋白条带;重组菌生长曲线与出发菌没有显著差异,说明外源质粒未对宿主菌的生长带来明显不利影响;抗性条件下传代30次后两菌株外源质粒稳定性仍可达95%、67%;两个菌株比较,CQUBb比CQUBt质粒转化率高、重组菌GFP表达时间长、表达量大,并且重组菌株稳定性好。【结论】成功地将cry3a基因核心启动子和gfp基因转入桑粒肩天牛幼虫肠道常驻菌,实现了该启动子在Bt之外的菌株中发挥作用,构建了两个GFP标记菌株;重组基因工程菌株表达量大,稳定性好,可以用作昆虫肠道内微生态研究和芽孢杆菌表达系统以及杀虫菌株的构建。
- 殷幼平李强袁训娥王中康
- 关键词：FLUORESCENT苏云金芽孢杆菌
- Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究被引量：6
- 2008年
- 桑粒肩天牛(Apriona germariHope,Ag)幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫,通过传统纯培养、生理生化鉴定和16SrDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌(Staphylococcus haem olyticus,S.haem olytic-us)Ag06菌株和人葡萄球菌(Staphylococcus hom is)Ag08菌株。从中筛选菌株S.haem olyticusAg06进行质粒消除后作为出发菌株,利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力B t杀虫基因cry3A的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305 a和pHT7911分别转入其中。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试等分析,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的优势内生菌溶血葡萄球菌中。
- 何伟王中康陈金华李强曹月青殷幼平
- 关键词：BT杀虫基因
