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抑制微小RNA-21可减轻高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬抑制被引量：4: 2017年; 目的探讨高糖是否通过改变肾小球系膜细胞中miRNA-21的表达，调控PTEN和P13uAk/mTOR信号通路，进而调节自噬和糖尿病肾脏损伤，及抑制miRNA-21的作用对该过程的影响。方法大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）应用脂质体2000转染试剂分别转染miRNA．21抑制物和阴性对照，转染稳定后分别在正常糖及高糖条件下培养48h，分为正常糖组（5．5mmol／L葡萄糖）、正常糖阴性对照组（转染阴性对照＋5．5mmol／L葡萄糖）、正常糖miRNA-21抑制物组（转染miRNA-21抑制物＋5．5mmol／L葡萄糖）、高糖组（25．0mmol／L葡萄糖）、高糖阴性对照组（转染阴性对照＋25．0mmol／L葡萄糖）、高糖miRNA-21抑制物组（转染miRNA-21抑制物＋25．0mmol／L葡萄糖）。采用MTT法检测细胞的存活及增殖能力；总蛋白／细胞数评估细胞肥大；Western印迹和实时定量PCR检测miRNA-21、PTEN-P13K／AkffmTOR信号通路活性、I型胶原及自噬标志物（p62和LC3Ⅱ）。透射电镜观察自噬体的形成及数量。结果与正常对照组比较，高糖组系膜细胞明显肥大、增殖，胞内miRNA-21表达上调，PTEN蛋白及mRNA的表达显著下调，P．Akt、p-mTOR、I型胶原、p62表达均增加，LC3Ⅱ表达和自噬体数量降低（均P〈0．01）。与高糖组比较，高糖miRNA-21抑制物组细胞肥大程度和增殖率均降低，p-Akt、p-mTOR、I型胶原、p62的表达均降低，PTEN、LC3II表达和自噬体数量均升高（均P〈0．01）。结论高糖上调系膜细胞内miRNA-21的表达，下调PTEN的表达，激活AkffmTOR通路，抑制自噬。抑制miRNA-21作用可上调PTEN的表达，进而抑制Akt/mTOR信号通路的活化，改善高糖诱导的系膜细胞异常的肥大、增殖，增强自噬，及减少细胞外基质蛋白聚积。; 卢新星范秋灵徐莉曹旭苏彦张东成王九宁; 关键词：自噬微RNAS PTEN磷酸水解酶肾小球系膜细胞

miRNA、内质网应激在糖尿病肾病中的作用被引量：4: 2016年; 据国际糖尿病联盟最新的统计数据报告,2014年全世界有3.87亿糖尿病患者,并预计在2035年将有53%的增长,其中中国占很大一部分。研究发现,有52.0%的糖尿病患者至少患有一种慢性并发症,21.4%的患者患有两种以上并发症。而糖尿病肾病（DN）则是糖尿病最常见的微血管并发症,其中有近40%的糖尿病患者均伴有DN。; 赵雪范秋灵徐莉曹旭刘佳; 关键词：微小RNA 糖尿病肾病内质网应激

短暂高糖通过组蛋白甲基化修饰诱导肾小球系膜细胞持续炎性反应: 2017年; 目的探讨短暂高糖培养后再恢复正常糖环境的大鼠肾小球系膜细胞是否持续释放炎性因子，及该过程是否与组蛋白甲基化修饰有关。方法大鼠肾小球系膜细胞株（HBZY-1）分为高糖组（25．0mmol／L葡萄糖）、高渗对照组（19．5mmol／L甘露醇＋5．5mmol／L葡萄糖）和正常对照组（5．5mmol／L葡萄糖）进行24h培养；随后各组更换正常糖培养基（5．5mmol／L葡萄糖）培养0、24、48、72h。分别提取各组细胞的蛋白、上清液以及总RNA。采用Western印迹检测组蛋白H3四号位赖氨酸单甲基化（H3K4mel）表达水平，实时荧光定量PCR检测核因子κB（NF—κB）的p65亚基、组蛋白甲基化转移酶set7／9的mRNA表达，ELISA检测上清中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）的表达。结果（1）与正常对照组比较，高糖处理大鼠系膜细胞24h后set7／9mRNA表达和H3K4mel蛋白表达均上调（均P〉0．05）；恢复正常糖培养24、48、72h高糖组set7／9mRNA表达和H3K4mel蛋白表达逐渐降低（与0h高糖组比较，均P〈0．05）；恢复正常糖培养72h高糖组set7／9和H3K4mel的表达与正常对照组差异均无统计学意义（均P〉0．05）。（2）未恢复正常糖培养（0h）时高糖组大鼠系膜细胞NF-κBp65mRNA、MCP-1、VCAM-1的表达均高于正常对照组（均P〉0．05）；恢复正常糖培养24、48h和72h高糖组NF—κBp65mRNA、MCP-1、VCAM-1的表达均保持高表达，与0h高糖组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。以上各指标高渗组与正常对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论短暂高糖培养可诱导。肾小球系膜细胞组蛋白甲基化转移酶set7／9和组蛋白H3K4单甲基化的表达上调，并且在恢复正常糖环境后仍持续48h。同时短暂高糖培养促进肾小球系膜细胞NF—κBp65，炎性因子MCP-1、VCAM-1的表达持续高表达。提示高糖代谢记忆可能�; 邓云蕾范秋灵汪旭曹旭徐莉刘佳赵雪王力宁; 关键词：血管细胞黏附分子1 趋化因子CCL2 代谢记忆

乌索酸增强自噬改善高糖诱导的足细胞损伤被引量：4: 2015年; 目的探讨乌索酸是否通过改善高糖状态下的足细胞白噬抑制，发挥其肾脏保护作用。方法体外高糖培养小鼠条件永恒足细胞株，加入P13K抑制剂LY294002及乌索酸进行干预。RT．qPCR法检测细胞内微小RNA一21（miR．21）和磷酸酶基因（PTEN）的mRNA表达。Western印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt）／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白，白噬相关蛋白及足细胞标志蛋白的表达变化。采用荧光显微镜观察足细胞标志蛋白、内源性微管相关蛋白LC3的表达变化。透射电镜下观察足细胞内白噬体的形成。结果与对照组相比，高糖组足细胞自噬相关蛋白LC3II、Beclinl的表达降低，泛素结合蛋白p62（p62／SQSTMl）表达增高；足细胞标志蛋白synaptopodin、podocin及nephrin表达降低；同时伴miR-21表达上调，PTEN的mRNA和蛋白表达均下调，p85-P13K、磷酸化（P）-Akt、p-mTOR表达增加（均P〈0．01）。加入LY294002及乌索酸干预后，p85-P13K、磷酸化（P）-Akt、p-mTOR表达减少；足细胞自噬相关蛋白LC3II、Beclin1的表达增加，p62／SQSTM1表达降低；足细胞标志蛋白synaptopodin、podocin及nephrin表达降低（均P〈0．01），但LY294002对足细胞内miR-21和PTEN的表达无影响。乌索酸可抑制细胞内miR-21的过表达，上调PTEN表达（均P〈0．05）。结论高糖可抑制足细胞自噬，促进足细胞损伤。乌索酸干预可减轻高糖刺激下的足细胞自噬抑制，缓解足细胞损伤，其保护机制可能是通过抑制足细胞内miR-21过表达，上调PTEN表达，抑制P13K／Akt—mTOR信号通路的异常活化实现的。; 徐莉范秋灵汪旭李琳卢新星岳媛曹旭刘佳赵雪王力宁; 关键词：高血糖症足细胞自噬乌索酸 MIR-21 磷酸酶基因

晚期糖基化终末产物诱导肾小球系膜细胞线粒体途径凋亡被引量：2: 2018年; 目的探索高糖环境下晚期糖基化终末产物（AGEs）是否通过改变肾小球系膜细胞Ros、JC-1及其凋亡相关蛋白的表达，诱导肾小球系膜细胞线粒体途径凋亡及肾小球系膜细胞的损伤。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1，使用不同浓度的AGEs分别培养0、12、24、48h后，MTT法观察细胞增殖能力。选择AGEs最佳作用时间和浓度后，加入caspase酶抑制剂Z．VAD—fmk及活性氧（ROS）清除剂乙酰半胱氨酸（NAC）进行培养，使用细胞凋亡检测试剂盒和AnnexinV—FITC／PI试剂盒检测细胞的凋亡率，JC-1染色检测线粒体膜电位（MMP）的变化，使用细胞ROX深红流式细胞仪检测细胞内总ROS水平，Westem印迹检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白BAX表达，并检测caspase-9、caspase-3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）活化片段（cleaved）的表达。结果AGEs可呈时间和浓度依赖性降低肾小球系膜细胞活力，诱导细胞死亡。250mg／LAGEs作用24h可显著增加肾小球系膜细胞凋亡率（P〈0．01），Z—VAD—fmk可显著缓解AGEs诱导的肾小球系膜细胞凋亡（P〈0．01）。与对照组相比，AGEs增加细胞内活性氧水平，降低线粒体MMP，并呈时间依赖性，AGEs引起两者显著改变的作用时间分别为1h和2h（均P〈0．01）。AGEs还可减少细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达（P〈0．01），增加促凋亡蛋白Bax、cleavedcaspase-9、cleavedcaspase-3和cleavedPARP的表达（均P〈0．01）。与AGEs组相比，NAC可显著稳固线粒体膜电位（P〈0．01），增加Bcl-2表达（P〈0．01），减少BAX、cleavedcaspase-9、cleavedcaspase-3和cleavedPARP的表达（均P〈0．01）。结论AGEs通过增加细胞内ROS水平，破坏线粒体膜势能，从而诱导肾小球系膜细胞线粒体途径凋亡。; 鲁伶旭徐莉范秋灵汪旭曹旭王力守; 关键词：肾小球系膜细胞活性氧晚期糖基化终末产物线粒体

微小RNA-148b通过靶向调控AMPKα1介导高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的内质网应激被引量：7: 2017年; 目的观察高糖刺激大鼠系膜细胞后微小RNA-148b（miR-148b）的表达变化，及其对靶基因腺苷酸活化的蛋白激酶α1（AMPKcd）的调控作用和对细胞外基质蛋白分泌的影响。方法大鼠系膜细胞分3组：正常糖组（5．5mmol／L葡萄糖）、高渗组（5．5mmol／L葡萄糖＋19．5mmol／L甘露醇）和高糖组（25．0mmol／L葡萄糖），实时定量PCR检测miR-148b的表达。转染miR-148b抑制物进一步探讨靶向抑制miR-148b的作用。实时定量PCR检测AMPKα1 mRNA的表达；Western印迹法检测AMPKα1、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C／EBP同源蛋白（CHOP）、纤连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）蛋白的表达；免疫荧光法检测ColⅣ的表达。结果高渗组与正常对照组miR-148b表达差异无统计学意义（P〉0．05）；与正常对照组比较，高糖组细胞内miR-148b的表达上调，GRP78、CHOP、FN、ColⅣ表达均显著上调（均P〈0．05），AMPKα1 mRNA及蛋白表达均下调（均P〈0．01）。与高糖组比较，转染miR-148b抑制物的高糖组miR-148b及GRP78、CHOP、FN、ColⅣ蛋白表达均显著下调（均P〈0．05），AMPKcd mRNA及蛋白表达均上调（均P〈0．05）；转染miR-148b阴性对照的高糖组上述指标与高糖组相比差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论高糖可上调体外系膜细胞miR-148b的表达，靶向抑制AMPKα1的表达，从而诱导内质网应激及系膜细胞产生过多细胞外基质蛋白。抑制miR-148b可上调靶基因AMPKα1的表达，从而抑制高糖诱导的系膜细胞内质网应激亢进，减少细胞外基质蛋白的聚积。; 赵雪范秋灵徐莉汪旭曹旭刘佳王力宁; 关键词：肾小球系膜细胞微RNAS 内质网应激

微RNA-503通过靶向调控Bcl-2介导高糖诱导的人肾小管上皮细胞凋亡被引量：9: 2017年; 目的探讨高糖培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）微RNA-503（miR-503）的表达变化，对其靶基因Bcl-2表达、caspase酶活性和细胞凋亡的影响，探讨高糖诱导肾小管损伤的发病机制。方法将体外培养HK-2细胞分为正常糖组、甘露醇高渗对照组、高糖组，在倒置显微镜下观察细胞形态；采用AnnexinV—FITC双染流式细胞仪检测HK．2细胞的凋亡率；实时定量PCR法检测miR。503表达；Western印迹检测HK-2细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、活化的caspase-9（cleaved caspase-9）的表达。结果培养48h后，与正常糖组相比，高糖组、高渗组HK-2细胞凋亡率增加（P〈0．05），HK-2细胞内miR-503表达上调（P〈0．01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（P〈0．05），线粒体凋亡通路相关蛋白cleaved caspase-9蛋白表达增加（P〈0．05），差异均有统计学意义。结论高糖培养的HK-2细胞内miR-503的表达明显上调，抑制其靶蛋白Bcl-2的表达，活化线粒体凋亡途径，激活caspase酶，诱导HK-2细胞凋亡。高糖的。肾小管毒性-部分是渗透压的作用。miR-503可能参与了糖尿病肾病病理损伤的发生，有望成为糖尿病肾病新的治疗靶点。; 曹旭刘佳范秋灵汪旭徐莉赵雪王力宁; 关键词：微RNAS BCL-2 肾小管上皮细胞

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曹旭

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