陈丹瑛
- 作品数：12 被引量：17H指数：3
- 供职机构：首都医科大学附属北京地坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 表达HIV-1CRF01_AE gp145的rMV MVA疫苗构建及免疫原性评价被引量：1
- 2015年
- 目的 构建携带密码子优化型HIV-1 CRF01_AE gp145基因的重组改良型痘苗病毒安卡拉株（MVA）载体疫苗,并对其免疫效果进行初步评价.方法 利用前期研究获得并改造的HIV-1CRF01_AE env共享基因,去除其胞内区序列得到gp145基因,将此基因克隆至重组MVA载体系统的穿梭质粒pSC11上,以穿梭质粒转染提前感染了野生型MVA病毒的BHK-21细胞,通过同源重组获得携带gp145基因的重组MVA疫苗,即rMVA-AEgp145.经鉴定证实重组MVA疫苗可表达Gp145蛋白后,在BALB/c小鼠中进行rMVA-AEgp145疫苗单独免疫的效果评价.结果 重组MVA疫苗可有效表达Gp145蛋白,单独免疫BALB/c小鼠能诱导较高水平的细胞免疫反应.结论 成功构建了表达HIV-1 CRF 01_AEgp145基因的重组MVA疫苗,在小鼠体内单独免疫可以诱导较强的env特异性CTL应答。
- 湛倩倩陈丹瑛叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗
- 表达SIV Gag/Env基因的DNA疫苗、重组腺病毒和重组痘苗病毒三载体疫苗联合免疫小鼠的细胞免疫研究被引量：2
- 2016年
- 获得性免疫缺陷综合征即艾滋病是人类面临的严重公共卫生威胁,目前常用的药物疗法仍存在一定的缺陷,尚不能彻底治愈AIDS并阻断HIV的传播。将治疗型疫苗用于HIV感染的治疗具有一定的发展潜力,但缺乏适宜的HIV感染动物模型阻碍了治疗型HIV疫苗的研制。SIV能够感染非人灵长动物并引起类似AIDS的猴免疫缺陷病,因而常被用作研究HIV及其疫苗的替代动物模型。为了对SIV疫苗在猴感染模型中治疗SIV感染的效果进行评价,我们分别构建了表达SIV gag和env基因的DNA疫苗、重组腺病毒和重组痘苗病毒疫苗,并联合使用这三种疫苗免疫小鼠,对包括不同抗原组合、不同免疫次序及间隔的免疫策略进行探索和优化。IFN-γ酶联免疫斑点和小鼠体内杀伤试验的结果显示,通过三载体疫苗联合免疫,能够在小鼠体内诱导出强度较高、持续时间较长的SIV Gag/Env特异性细胞免疫反应。并且,重复免疫后仍可以诱导较高水平的免疫反应。该结果为在SIV感染猴模型中评价多载体疫苗序贯和重复免疫治疗SIV感染的研究奠定了基础,也为治疗型HIV疫苗的研究提供了参考。
- 何小周陈丹瑛王琬玓徐柯曾毅冯霞
- 关键词：SIVDNA疫苗重组腺病毒重组痘苗病毒
- HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列分析及表型预测
- 2014年
- 目的 克隆并分析HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列,根据其氨基酸序列进行表型预测,为疫苗的抗原设计奠定基础.方法 采集北京地区HIV-1 B/C重组型的抗凝全血标本,分离血浆和提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增rev-env基因,对扩增产物进行序列测定.根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并对重要的Env功能结构域进行深入的分析和比较.结果 从12例B/C重组型HIV-1感染者中成功克隆到7个rev-env基因,序列分析发现其中6个有完整的开放读码框（ORF）,全部为CRF_07B/C重组型.6个Env蛋白氨基酸N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及静电荷数目预测全部使用CCR5辅助受体;GP120/GP41剪切位点高度保守,预测所有GP160前体都能有效剪切;对几个已知中和抗体的中和位点分析推测全部的6个序列都对2G12、2F5中和不敏感;对4E10、PG9及PG16中和敏感.结论 有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗和药物研究提供依据.
- 汪孟冉陈丹瑛何小周叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：HIV-1
- HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因改造及其重组DNA疫苗的构建被引量：4
- 2014年
- 目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共有序列,对该序列按照哺乳动物密码子使用的偏嗜性进行优化,将人工合成的优化基因克隆至pVR载体,构建DNA疫苗.通过Western Blot方法比较优化前后env基因的表达.结果 成功获得32条具有完整的开放性阅读框的env克隆,型别分析确认均为CRF01_AE亚型.成功对其共有序列进行了优化、合成并构建了DNA疫苗pVR-mod.AE env,该疫苗与野生型的env基因（wt.AE env）相比可以高水平表达env基因,且不依赖Rev的存在.结论 对HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因的优化改造及重组DNA疫苗的构建是成功的.
- 陈丹瑛汪孟冉何小周叶景荣余双庆李秦剑徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗密码子
- 临床教学医院研究生细胞培养技术的教学实践与探索被引量：2
- 2016年
- 细胞培养技术是生命科学研究各个研究领域的基本技术,也是医学院研究生必备的实验技能。根据研究生教学情况,对细胞培养实验的教学方法、学生能力和素质培养及常见问题和应对措施进行了一些思考和总结。
- 张玥李蕊陈丹瑛张剑平张恒辉
- 关键词：细胞培养技术教学方法实验教学
- 表达HIV-1及SIV基因的三载体疫苗免疫策略的研究
- 曾毅院士实验室主要研究治疗性艾滋病疫苗，前期提出的多载体HIV疫苗序贯和重复免疫的策略能在小鼠及恒河猴体内诱导高水平、持久的HIV特异性免疫反应。多载体疫苗中的DNA和rMVA疫苗目前正在HIV-1感染者中进行Ⅰ期临床试...
- 陈丹瑛
- 关键词：艾滋病疫苗免疫策略
- Ad5-HIVgag免疫的食蟹猴中腺病毒中和抗体与Gag特异性细胞免疫反应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 观察不同剂量的重组腺病毒疫苗Ad5-HIVgag反复肌内注射免疫食蟹猴后,食蟹猴体内产生的腺病毒中和抗体水平及Gag特异性细胞免疫反应水平,初步探讨腺病毒中和抗体的产生对Gag特异性细胞免疫反应的影响.方法 将24只食蟹猴随机分为4组：对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组.每3周免疫1次,连续免疫5次.免疫前及免疫后不同时间点用中和实验检测动物体内腺病毒中和抗体水平,用Elispot方法检测Gag特异性细胞免疫反应水平.结果 初次免疫后3周3个实验组动物都检测到了较高水平的腺病毒中和抗体,在初次免疫后8周达到高峰,恢复期结束时略有下降.初次免疫后5周三个实验组动物都检测到了Gag特异性细胞免疫反应,除初次免疫后12周反应水平有所下降,其他时间点细胞反应呈逐渐增高趋势,但各剂量组间未见明显的量效关系.结论 在一定的剂量范围内反复多次应用Ad5-HIVgag免疫食蟹猴后,可产生针对腺病毒的中和抗体,随着免疫次数的增多Gag特异性细胞免疫反应有增高趋势,Ad5疫苗免疫后中和抗体的产生对Ad5疫苗反复应用诱导的Gag特异性细胞免疫反应抑制作用并不明显.
- 李芸杨柳杨玲陈丹瑛冯霞余双庆李泽琳曾毅
- 关键词：腺病毒科猕猴属免疫细胞
- rAd5和rAAV2／1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应；而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当；与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强；rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.
- 杨柳李芸杨玲张凌斐冯霞余双庆陈丹瑛李泽琳曾毅
- 关键词：腺病毒科免疫抗体生成
- HIV-1假病毒包装及感染条件优化被引量：3
- 2017年
- 目的对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率。方法采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162rev/env质粒共转染293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例、转染试剂与质粒比例、假病毒收获时间对HIV假病毒包装滴度的影响进行实验,同时对感染过程中假病毒接种剂量与二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-Dextran)使用浓度进行了优化。结果在包装过程中当HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例为4∶1、转染试剂与质粒比例为3∶1,转染后培养48hHIV-1假病毒的滴度最高;在假病毒感染过程中,15μg/mL的DEAE-Dextran可有效增加假病毒的感染效率且不会对细胞造成较大毒性。结论通过对包装和感染过程中关键条件的优化,可以有效提高HIV-1假病毒的包装和感染效率,增加实验技术稳定性,为新型抗艾滋病药物筛选和艾滋病疫苗评价等研究奠定了基础。
- 陈丹瑛李蕊张玥宋川韩俊燕张媛媛
- 关键词：人类免疫缺陷病毒假病毒
- 从理论到实践:分子生物学实验初学过程中常见错误辨析及相关教学改革建议
- 2015年
- 分子生物学实验技术是现代生命科学研究工作中最基本的操作技术与实验手段,分子生物学实验所涉及的理论基础非常广泛,而且需要操作者具有一定的动手能力。而刚进入实验室的学生、研究人员在从理论走向实践的初学过程中常常发生各种"低级"错误。笔者收集了初学研究者在分子生物学实验过程中发生的一些常见问题,分析其原因,并对分子生物学实验教学提出了针对性的调整建议,以在实践过程中对这些错误及早发现和改正。
- 蒋栋张玥陈丹瑛张剑平陈晨
- 关键词：分子生物学实验初学者教学改革
