张小菊
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 供职机构：新疆出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家质检公益性行业科研专项质检公益性行业科研专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 基于16S rDNA基因的谷斑皮蠹PCR检测技术被引量：1
- 2017年
- 【目的】谷斑皮蠹是一种重要的检疫性害虫,在新疆周边多个国家分布,口岸检疫人员多次从进境货物中截获谷斑皮蠹,该虫对新疆的农业生产极具威胁。【方法】以谷斑皮蠹的16S rDNA基因为靶序列,用昆虫通用引物对4种供试皮蠹进行PCR扩增,将扩增产物进行克隆和测序,用生物软件设计检测谷斑皮蠹的特异性引物与探针。【结果】设计的特异性引物(TG-SNP-F/TG-SNP-R)及所建立的常规PCR方法能有效检测出谷斑皮蠹,其扩增产物的片段大小为250 bp,灵敏度为3 ng·μL^(-1)。设计的特异性引物(TG-F/TG-R)和探针(TG-probe),以及所建立的实时荧光PCR方法,对谷斑皮蠹的检测特异性强,灵敏度达0.8 fg·μL^(-1)。【结论】建立的常规PCR方法和实时荧光PCR检测方法能够对谷斑皮蠹进行准确鉴定,为口岸检疫人员检测进境货物中携带的谷斑皮蠹提供技术支持。
- 张祥林李京罗明李亚伟王罛张小菊
- 关键词：谷斑皮蠹RDNA常规PCR实时荧光PCR
- 进境哈萨克斯坦油葵中向日葵黑茎病菌的检疫鉴定被引量：1
- 2015年
- 依据出入境检验检疫行业标准SN/T 3174-2012,对新疆口岸进境的哈萨克斯坦油葵中的向日葵黑茎病菌进行检疫鉴定。挑取油葵样品中的可疑病种子和植株残体作为实验材料,分别提取其DNA,用向日葵黑茎病菌特异性检测引物LEPB/LEPF对挑取的样品进行PCR检测初筛,初筛结果阳性者,进行病原分离培养。对分离获得的阳性纯培养菌株的菌落、孢子形态进行观察,PCR检测及致病性测定,最终确定其为向日葵黑茎病菌。本研究从进境哈萨克斯坦油葵中分离到检疫性病原菌,新疆周边口岸应进一步加强疫情监测与调查。
- 王罛张小菊张祥林张伟乾义柯李亚伟张瑜孙燕飞
- 实时荧光PCR检测瓜炭疽病菌被引量：1
- 2016年
- 采用实时荧光PCR技术建立了瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)的检测方法。根据瓜炭疽病菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因序列,设计了该病菌特异性引物和TaqMan探针,并对所设计的引物和探针的反应条件进行了优化。采用本试验建立的实时荧光PCR方法对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测,可将瓜炭疽病菌与其他病原菌区分开。灵敏度试验表明,25μL体系中只要有39.6pg的核酸量就可以被检测到,检测灵敏度达到1.584pg/μL,比普通PCR检测灵敏度高100倍。同时对田间采集的病株和未知样品进行的检测证明了引物和TaqMan探针的特异性。
- 王翀张小菊张祥林张伟张瑜李亚伟孙燕飞
- 关键词：实时荧光PCR
- 实时荧光PCR法快速检测地中海实蝇的研究被引量：1
- 2016年
- 【目的】设计用于扩增地中海实蝇的特异性引物,建立快速、灵敏检测地中海实蝇的实时荧光PCR方法。【方法】采用实蝇科昆虫线粒体DNA COI基因的通用引物扩增地中海实蝇以及其它三种供试实蝇的DNA片段,经测序、比对分析,设计出扩增地中海实蝇的特异性引物,用SYBR Green实时荧光PCR方法验证该引物的特异性与灵敏度。【结果】设计的引物对DZH-F/DZH-R能特异性检测出地中海实蝇,扩增产物的溶解曲线峰值Tm为79.2。该对引物检测地中海实蝇的灵敏度为10-3ng/μL。【结论】所建立的SYBR Green实时荧光PCR方法检测地中海实蝇特异性强、灵敏度高。
- 李京张祥林罗明李亚伟王羽中张小菊
- 关键词：地中海实蝇COI基因实时荧光PCR
- 菠菜霜霉病菌快速分子检测方法研究被引量：2
- 2016年
- 【目的】菠菜霜霉病,由专性寄生病原菌Peronospora farinosa f.sp.Spinaciae引起,是世界上菠菜Spinacia oleracea种植中最为重要的经济型病害。建立菠菜霜霉病菌快速分子检测方法。【方法】将菠菜霜霉病菌进行显微镜的形态鉴定;提取DNA、PCR扩增、克隆、酶切、测序、序列比对与分析;采用巢式PCR技术检测菠菜霜霉病:第一轮采用通用引物ITS1/ITS4,第二轮采用特异性引物SMPF/SMPR。【结果】该菌与霜霉属的形态特征描述一致,确定菠菜患有霜霉病;测序结果经Blast比对分析与Peronospora effusa同源性达100%;巢式PCR技术也特异性的检测到了菠菜霜霉病菌。【结论】建立针对菠菜霜霉病的快速分子检测技术。
- 李京张祥林王翀李亚伟张小菊
- 关键词：酶切巢式PCR
- 实时荧光PCR检测瓜类蔓枯病菌的方法研究被引量：2
- 2015年
- 【目的】建立瓜蔓枯病菌(Didy mella bryoniae)的实时荧光PCR方法,为瓜蔓枯病菌快速分子检测奠定基础。【方法】通过Genebank网上已公布序列,选取瓜蔓枯病菌beta-tubulin(tub2)基因作为目的基因,设计了特异性引物和Taq Man探针,并对该引物和探针的反应条件进行优化。【结果】采用研究所设计的引物和探针对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测,该引物和探针可高度灵敏地检测到瓜蔓枯病菌。采用实时荧光PCR方法,25μL体系中只要有8.9 pg的核酸量就可以被检测到,检测灵敏度达到356 fg/μL,比普通PCR灵敏度高10倍。【结论】采用研究所设计的引物和探针对田间采集的病株和未知样品的检测,验证了引物和Taq Man探针的特异性。
- 王翀张小菊张祥林张伟张瑜李亚伟孙燕飞
- 关键词：实时荧光PCR
- 枣实蝇气味结合蛋白基因的克隆及表达谱分析被引量：3
- 2017年
- 【目的】克隆枣实蝇Carpomya vesuviana Costa气味结合蛋白(odorant binding protein,Cvco OBP)基因,对其表达谱进行分析,为枣实蝇气味结合蛋白的深入研究奠定基础。【方法】对枣实蝇头部RNA进行转录组测序,通过蛋白序列比对以及构建系统进化树分析枣实蝇OBP序列,运用半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction,sqRT-PCR)方法对获得的Cvco OBP序列进行组织表达特异性研究。【结果】转录组测序后共获得7个OBP,命名为(Gen Bank登录号分别为:KU975053、KU975054、KU975055、KX059394、KU975056、KX059395、KX059396)。对Cvco OBP1-7进行蛋白序列比对发现,Cvco OBP1、Cvco OBP3、Cvco OBP4、Cvco OBP6、Cvco OBP7是典型的OBP家族成员,具有6个高度保守的半胱氨酸残基;Cvco OBP2和Cvco OBP5属于"Minus-C"家族成员,具有4个高度保守的半胱氨酸残基。系统进化分析结果显示,Cvco OBP1-7分别与不同的OBP有较近的进化关系。半定量PCR检测结果发现,Cvco OBP1-7在枣实蝇腹部、头部及胸部都有表达,且表达量较高;Cvco OBP1、Cvco OBP2在翅中有表达,但表达量相对较低;Cvco OBP1、Cvco OBP5、Cvco OBP6在足中也有表达,但表达量相对较低。【结论】获得并分析了7个Cvco OBP,不同Cvco OBP表达部位和表达量各不相同;Cvco OBP1-6分别属于OBP56g,OBP8a,OBP83a,OBP56h,OBP99c,OBP83ef类型。
- 李亚伟张小菊王科珂于艳雪张祥林张伟张俊华杨定陈乃中
- 关键词：枣实蝇气味结合蛋白
