杨文浩
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
- 供职机构：青岛农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 酶消化组织块法体外培养奶牛乳腺上皮细胞被引量：5
- 2016年
- 建立稳定培养奶牛乳腺上皮细胞系的方法。结合酶消化法和组织块法,在体外进行分离培养奶牛乳腺上皮细胞,利用胰酶消化进行纯化和传代。通过倒置显微镜观察、细胞爬片姬姆萨染色和角蛋白18免疫组织化学方法对培养的细胞进行形态学观察和鉴定。观察发现,细胞排列紧密,呈多角形或梭形,长满后呈铺路石样。胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰可见,多为3～5个。通过细胞角蛋白18免疫组织化学方法对乳腺上皮细胞进行鉴定,呈阳性反应。获得的乳腺上皮细胞增殖旺盛,培养至40代生长活性仍然稳定。酶消化组织块法成功培养出奶牛乳腺上皮细胞,是分离乳腺上皮细胞的一种有效方法。
- 杨文浩朱丽萍齐晓楠张倩任婷婷李华涛丛霞曹荣峰田文儒
- 关键词：酶消化组织块乳腺上皮细胞奶牛
- 犊牛睾丸生殖干细胞与支持细胞体外共培养体系的建立被引量：2
- 2015年
- 旨在建立牛雄性生殖干细胞(mGSCs)-支持细胞(SCs)体外共培养体系,并比较不同密度SCs共培养mGSCs的效果。分离、培养mGSCs和SCs并鉴定,然后在密度不同的SCs上共培养mGSCs,观察细胞形态、统计mGSCs集落数、测定两种细胞特异基因的相对表达量。结果表明,培养的mGSCs具有与小鼠mGSCs相同的形态特征,AKP染色细胞克隆阳性,各培养体系均表达SCs和mGSCs特异基因SCF、OCT-4;低密度SCs(225个/cm2)培养mGSCs比中密度(1 300个/cm2)和高密度(5 600个/cm2)培养mGSCs效果好:mGSCs集落纯度、体积较大;mGSCs集落比例显著(P<0.05)和极显著增高(P<0.01);mGSCs特异基因表达量均极显著增高(P<0.01)。说明建立睾丸干细胞体外共培养体系时,采用较低密度的支持细胞共培养可获得理想的睾丸生殖干细胞。
- 张倩齐晓楠杨文浩丛霞李华涛曹荣峰田文儒
- 关键词：睾丸支持细胞共培养集落
- 脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞中炎性因子和核转录子-κB的表达被引量：5
- 2016年
- 试验预探索脂多糖（LPS）刺激奶牛乳腺上皮细胞炎性因子产生时间、浓度以及其对NF-κB信号通路的激活情况。用酶消化法培养奶牛乳腺上皮细胞（b MEC）;CCK-8法筛选LPS最佳刺激浓度（IR≤10%）,并用其处理对数期生长的b MEC。ELISA试剂盒检测0-24 h不同处理时间细胞培养液上清中TNF-α和IL-1β表达变化,以确定炎症模型是否建立成功;用Western-Blot检测核转录因子NF-κB（p-p65和p65）及其抑制蛋白（p-IκBα和IκBα）的表达。结果显示,用酶消化法成功培养原代b MEC;CCK-8法筛选LPS的最佳致炎浓度为1μg/m L;LPS处理后3-24 h可极显著增加奶牛乳腺上皮细胞中TNF-α和IL-1β表达,并在处理后15 min极显著提高b MEC中p-p65和p-IκBα的表达。上述结果说明,LPS能够在3-24 h内有效诱导b MEC炎症模型的建立,并能在15 min时活化奶牛乳腺上皮细胞中的NF-κB信号通路。
- 朱丽萍杨文浩任婷婷丛霞李华涛曹荣峰刘楚君田文儒
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞脂多糖IL-1Β
