赵文铖
- 作品数：9 被引量：29H指数：4
- 供职机构：天津医科大学肿瘤医院国家肿瘤临床医学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省“钱江人才计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- pEGFP-IFI16表达载体构建及其表达对Hep-2细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- RT-PCR扩增的IFI16基因连接到pUCm-T载体并测序鉴定,经测序正确的IFI16基因再连接到pEGFP-C1载体构建pEGFP-IFI16重组质粒,重组质粒pEGFP-IFI16转染Hep-2细胞后用荧光显微镜及半定量RT-PCR分析其表达情况,并用流式细胞仪测定细胞生长曲线分析其表达对Hep-2细胞增殖的影响.结果显示pEGFP-IFI16重组质粒构建正确,转染Hep-2细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,半定量RT-PCR结果显示转染后Hep-2细胞IFI16基因条带亮度明显升高,细胞生长曲线测定结果显示转染后Hep-2细胞从第二天起其增殖速度变慢、至第三天时其增殖速度明显慢于对照细胞的增殖速度.说明成功构建了能在Hep-2细胞中表达EGFP-IFI16融合蛋白的pEGFP-IFI16重组质粒,pEGFP-IFI16重组质粒体表达能抑制Hep-2细胞的增殖.
- 虞游张艳欧赵文铖白坚陈建明
- 关键词：HEP-2细胞
- 不同固定剂及渗透方法对免疫荧光技术中EGFR内吞转运观察效果的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:探索适合表皮生长因子受体(EGFR)内吞转运免疫荧光观察的固定和渗透方法。方法:采用OLYMPUS BX61荧光显微镜及成像系统,对不同固定剂(4%多聚甲醛,甲醇,4%多聚甲醛+甲醇,丙酮,丙酮与甲醇体积比1∶1的混合液)配合不同渗透方法(0.04%saponin,0.1%Triton X-100)得到的EGF刺激后0 min和15 min两个时间点的EGFR免疫荧光图像进行对比分析。结果:0 min时EGFR主要定位于细胞质膜,4%多聚甲醛+甲醇的固定方法,配合使用0.04%saponin,可以观察到细胞膜上明显、清晰、连续的EGFR信号。针对EGF刺激15 min后内吞进入细胞的EGFR,不同固定方法对观察效果没有明显影响。但与配合使用0.04%saponin相比,0.1%Triton X-100进行渗透能充分暴露EGFR在细胞核内的信号。结论:温和的固定和渗透方法可获得较好的EGFR膜定位信号。针对内吞转运中的EGFR需要较强的渗透剂,以确定EGFR在细胞内准确的定位。
- 冯婧文杨少斌王兆松赵文铖肖春花
- 关键词：固定剂荧光显微镜表皮生长因子受体
- miR-448通过抑制上皮间质转化抑制肺癌细胞增殖和运动能力
- 2015年
- 探讨mi R-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织mi R-448表达水平。转染mi R-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系,通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察mi R-448表达对A549增殖和运动能力的影响;利用Western blot检测EMT(epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平,通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子m RNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比,mi R-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示,过表达mi R-448抑制A549细胞增殖和运动能力;降表达mi R-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达mi R-448能下调上皮标志物E-cadherin,上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达mi R-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 m RNA表达水平。mi R-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。
- 董秋萍徐玥杨少斌冯婧文齐晓敏赵文铖王兆松许世磊
- 关键词：EMT肺癌增殖
- 人转录因子AP4的生物信息学分析被引量：3
- 2016年
- [目的]预测分析人转录因子激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)的性质、结构和功能。[方法]采用生物信息学方法对人AP4蛋白的理化性质、物种间同源性、信号肽与跨膜区、亲水性、蛋白亚细胞定位、蛋白质二/三级结构、三级结构可靠性、蛋白质相互作用等方面进行预测和分析。[结果]人AP4蛋白全长338个氨基酸,理论等电点5.63,相对分子质量38.73 kDa。AP4在进化上较为保守,不含信号肽与跨膜区,属于亲水性蛋白质,94.1%可信度定位于细胞核。二级结构含10个α螺旋区,占全部氨基酸的54.14%,5个β折叠区,占7.99%,其余37.87%的氨基酸处于无规卷曲状态。三维建模结果可靠。预测到10个与AP4存在相互作用的蛋白。[结论]系统预测分析了人AP4蛋白的性质、结构和功能。
- 赵文铖王兆松周蒙魏梅许世磊
- 关键词：蛋白生物信息学
- IFI16基因反义干扰表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2014年
- 为了构建可在人喉癌细胞中稳定表达IFI16基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,设计合成的IFI16基因shRNA片段,连接到经BamHI和EcoRI双酶切的pGreenPuroTMshRNA表达载体中,连接产物转化大肠杆菌后挑取几个抗性菌落,用PCR技术初步进行鉴定,经PCR初步鉴定为重组质粒的一个重组子DNA用测序进一步鉴定,测序结果显示成功构建了IFI16基因shRNA的表达载体pGreenPuro-IFI16shRNA.
- 张艳欧虞游赵文铖朱涵卢佳伟姚卉卉陈建明
- 斑马鱼TATA结合蛋白的生物信息学分析被引量：6
- 2015年
- 斑马鱼TATA结合蛋白(TBP)是转录过程中的重要起始因子。利用生物信息学方法对斑马鱼TBP的理化性质、物种间同源性、保守结构域、跨膜区、亲水性/疏水性、蛋白质二级结构、蛋白质三级结构、蛋白质相互作用进行预测分析。分析表明,斑马鱼TBP全长302个氨基酸,等电点9.8,属于TATA结合蛋白超家族,不含跨膜区,属于亲水蛋白;二级结构以无规则卷曲为主,含5个α螺旋区和8个β折叠区,三维建模空间结构可信度98.9%,进一步分析建模结果可靠;与斑马鱼TBP相互作用的蛋白质均为转录因子或TFⅡD复合物组分。分析结果对于深入研究斑马鱼TBP在基因转录中的作用具有一定的理论指导意义。
- 杨少斌冯婧文赵文铖王兆松许世磊
- 关键词：斑马鱼生物信息学
- 转录因子AP4研究进展被引量：4
- 2016年
- 激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)是近年来发现的一个重要转录因子。AP4是c-MYC的重要下游因子,广泛调控细胞增殖与分化、细胞周期、细胞凋亡、免疫应答等进程。AP4可促进正常细胞恶性转化,独立地诱导肿瘤细胞发生上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),增强肿瘤细胞的迁移侵袭能力,促进肿瘤转移,在临床上与多种肿瘤密切相关。本文综述了AP4的分子特征与作用机制,并介绍了AP4的调控网络和在肿瘤发生发展中的研究进展。对AP4的深入研究将有助于了解生命活动的基本原理,并为肿瘤诊治提供新的思路和方法。
- 赵文铖王兆松许世磊
- 关键词：C-MYC上皮间充质转化肿瘤
- 人TEAD1蛋白质的生物信息学分析被引量：3
- 2016年
- [目的]采用生物信息学方法对人TEAD1蛋白质的理化性质、跨膜区域、亲疏水性、信号肽区域、二级结构、三级结构、蛋白质之间的相互作用、GO注释进行预测分析。[方法]使用多种分析软件对TEAD1蛋白质进行预测分析。[结果]TEAD1蛋白质由426个氨基酸组成,等电点为8.33,在哺乳动物中高度保守;二级结构预测发现6个α螺旋和10个β折叠片层,三级结构预测结果的可靠性为100%,拉曼图分析表明预测结构稳定;与TEAD1相互作用的蛋白质主要是核内转录调控蛋白质,并可参与Hippo信号通路。[结论]TEAD1一种存在核定位序列、无跨膜结构的亲水不稳定蛋白质,具有转录调控因子的作用,可通过Hippo信号通路,表现出促癌作用。
- 王兆松赵文铖张连民周蒙魏梅董秋萍许世磊
- 关键词：转录调控因子生物信息学
- 人Latexin基因及蛋白质的生物信息学分析被引量：5
- 2016年
- Latexin(Lxn)是人的羧肽酶抑制剂,并有肿瘤抑制因子的作用。利用生物信息学分析Lxn基因的启动子和Cp G岛以及Lxn蛋白质的理化性质、结构特点、功能特征后发现,Lxn基因存在两个启动子和Cp G岛,且一个Cp G岛与启动子重合;Lxn是全长222个氨基酸,等电点5.52,无信号肽、无跨膜结构的亲水不稳定蛋白质;蛋白质二级结构有4个α螺旋和9个β折叠,三级预测结构可信度为99.55%,拉曼图表明结构稳定;与Lxn相互作用的蛋白质主要是羧肽酶,另外Lxn还参与炎症反应和温度引起的痛觉反应等生物过程;启动子和氨基酸在灵长类间的同源性极高。对Lxn的表达、结构及功能的预测分析可以为研究Lxn在生命过程中的作用提供重要的信息。
- 王兆松赵文铖周蒙魏梅董秋萍许世磊
- 关键词：肿瘤抑制因子生物信息学
