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IL-27在抗结核分枝杆菌免疫中的作用被引量：4: 2016年; 白细胞介素27(IL-27)是属于IL-12家族的细胞因子,由EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28亚基构成,主要由活化的抗原提呈细胞产生。其受体由T细胞细胞因子受体(TCCR)与糖蛋白130(gp130)亚基组成,广泛表达于各种细胞表面。IL-27作为一种多效的免疫调节因子在免疫应答过程中起多重调控作用,然而,IL-27在宿主抗结核分枝杆菌(MTB)感染过程中表现出广泛的免疫抑制作用。在抗MTB固有免疫应答中抑制巨噬细胞的吞噬作用;在适应性免疫应答中可能抑制Th1细胞和Th17细胞反应,并促进1型调节性T(Tr1)细胞增殖分化,抑制机体抗MTB的保护性免疫,MTB感染加重。本文综述了IL-27及其在抗MTB免疫中作用的研究进展。; 路晓红付玉荣伊正君; 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞 CD4+T细胞

结核分枝杆菌Rv0867c基因的生物信息学分析被引量：3: 2016年; 目的应用生物信息学软件分析结核分枝杆菌Rv0867c及其编码的复苏促进因子A(resuscitation-promoting factor A,Rpf A)的结构功能及抗原表位。方法从NCBI数据库获取Rv0867c的基因信息;应用ProParam预测Rpf A蛋白的理化性质;采用SignalP 4.0及TMHMM分析其信号肽及跨膜区;利用在线分析Expasy工具分析蛋白二级结构,建立蛋白的三级结构模型;利用ABCpred、BepiPred 1.0Server以及SYFPEITHI、NetMHCIIpan 3.1Server分析蛋白的B细胞及T细胞抗原表位。结果 Rpf A蛋白具有407个氨基酸残基,该蛋白N端存在信号肽序列,具有跨膜结构。二级结构中无规卷曲约占63.14%,结构疏松。三级结构同源建模与Rpf B具有高度相似的序列。Rv0867c具有潜在的B细胞抗原表位46-57、61-74、108-123、307-320及85-98等,T细胞抗原表位82-90、337-345、167-175、207-215及263-271等。结论生物信息学预测Rpf A具有良好的抗原表位,是诊断及治疗结核的潜在候选因子。; 路晓红付玉荣伊正君; 关键词：结核分枝杆菌生物信息学

结核分枝杆菌MT3876蛋白的生物信息学分析被引量：14: 2016年; 目的应用生物信息学分析软件预测结核分枝杆菌MT3876基因编码的蛋白质结构和功能。方法从NCBI数据库获取MT3876基本的基因信息;应用ProParam预测MT3876蛋白的理化性质;应用SignalP 4.0及TMHMM分析其信号肽及跨膜区;利用在线分析Expasy工具分析蛋白二级结构并建立蛋白的三级结构模型;利用ABCpred、SYFPEITHI及NetMHCIIpan 3.1Server分析蛋白抗原表位,寻找最佳B细胞及T细胞抗原位点。结果 MT3876编码结核分枝杆菌假想蛋白MT3876具有172个氨基酸残基。该蛋白无信号肽,位于胞壁,跨膜结构不明显。二级结构中无规卷曲约占52.33%,结构疏松。MT3876具有潜在的B细胞抗原表75-90、103-118、17-32、140-155、96-113、123-142及37-54等位点,T细胞抗原表位1-10、80-88、114-118、133-141及149-172等。结论生物信息学预测MT3876基因编码的蛋白质具有潜在的B、T细胞抗原表位,可作为研发免疫诊断方法的侯选分子靶标。; 路晓红付玉荣伊正君; 关键词：结核分枝杆菌生物信息学

小鼠IL-27真核表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达被引量：2: 2016年; 目的:构建小鼠白介素27(Interleukin 27,IL-27)单链融合基因的真核表达载体并检验其在RAW264.7细胞中的表达情况。方法:提取小鼠脾细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出小鼠EBI3和p28 c DNA。采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)通过编码疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列连接小鼠EBI3和p28基因片段,构建小鼠IL-27单链融合基因(mouse single chain IL-27,msc IL-27),并将其克隆至pc DNA3.1(+)载体。通过酶切和测序鉴定阳性重组载体,将重组质粒pc DNA3.1-IL-27通过脂质体转染法转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7,通过RT-PCR方法检测目的基因的表达。结果:测序分析表明,小鼠IL-27单链融合基因中EBI3、linker和p28的连接顺序、方向及碱基序列与预期相符。在转染后的RAW264.7细胞中检测到了小鼠IL-27 m RNA的表达。结论:成功构建了小鼠IL-27单链融合基因及其真核表达载体,并在RAW264.7细胞中实现表达,为进一步探讨IL-27的生物学功能奠定了基础。; 路晓红付玉荣伊正君路静张德峰; 关键词：融合基因重叠延伸PCR 真核表达载体 RAW264.7

基于核酸检测诊断结核分枝杆菌感染的研究进展被引量：4: 2015年; 结核病是由结核分枝杆菌感染而引起的传染性疾病。实验室诊断技术的不断进步,为结核病的诊断及治疗提供了多种选择方案。核酸检测是利用分子生物学的理论和技术,通过直接探查核酸的存在状态,从而对人体的状态与疾病做出诊断的方法。近年来,核酸诊断技术的发展极大地推动了实验室的快速诊断,本文就结核杆菌感染后细菌核酸及宿主微小核糖核酸检测方面的新方法、新技术进行综述。; 路晓红付玉荣伊正君; 关键词：结核分枝杆菌分子生物学核酸微小核糖核酸

重组小鼠白细胞介素-27融合蛋白多克隆抗体的制备及鉴定: 2017年; 目的:制备重组小鼠白细胞介素-27(interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性。方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Ser)3接头将2个片段进行连接,将得到的小鼠IL-27单链融合基因片段克隆于p ET-32a(+)载体。阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,利用SDS-PAGE与Western blot鉴定目的蛋白的表达。以纯化的IL-27融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗小鼠IL-27融合蛋白的多克隆抗体,利用Western blot和ELISA进行特异性及效价分析。结果:从小鼠脾细胞总RNA中扩增得到IL-27单链融合基因经测序与预期序列一致;在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,SDS-PAGE显示表达出的融合蛋白相对分子质量(molecular weight,Mr)约67 000;Western blot结果表明该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;该蛋白免疫新西兰大白兔后获得抗血清,Western blot结果显示该血清可以特异性地与IL-27融合蛋白结合,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶3 200。结论:在大肠杆菌中成功表达出小鼠IL-27融合蛋白,并制备出效价较高、特异性较好的兔抗小鼠IL-27多克隆抗体。; 路晓红付玉荣伊正君; 关键词：重叠延伸PCR 融合蛋白原核表达多克隆抗体

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路晓红

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