马雪婷
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业科研专项黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 3株临床分离的猪流行性腹泻病毒S基因克隆及序列分析被引量：2
- 2020年
- 对临床分离鉴定的3株猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S基因进行克隆及序列分析,对丰富我国PEDV的遗传衍化特征具有重要意义。S基因序列分析发现,JX18毒株与CV777亲缘关系较近,核苷酸同源性为99.71%,氨基酸同源性95.7%,属于G1-b进化分支。JX18毒株与CV777经典毒株S蛋白氨基酸序列相比较,不存在氨基酸的插入或缺失,在中和表位区及已鉴定抗原表位区仅有一处氨基酸突变。SD18、JingTai18与PEDV CV777亲缘关系较远,核苷酸同源性分别为93.64%和92.64%,S蛋白氨基酸序列同源性分别为93%和93.5%。SD18和JingTai18位于G2-b进化分支。SD18与JingTai18株与CV777经典毒株相比,S蛋白氨基酸序列中存在插入缺失及多位点的氨基酸突变。研究结果为进一步了解我国PEDV流行及变异情况提供了数据支持。
- 张辛铭杨顺利马雪婷曹钰莹何雪阳蔡建平尹双辉
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因生物信息学分析
- 柔嫩艾美耳球虫组蛋白去乙酰化酶2A基因的克隆表达及转录动态分析被引量：1
- 2016年
- 为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)组蛋白去乙酰化酶2A(Et Sir2A)的生化功能及其对生活史发育的潜在调节作用,以柔嫩艾美耳球虫甘肃株为例,检测其在不同发育阶段表达量的差异。以基因组数据预测的编码序列为模板设计引物,采用RT-PCR的方法扩增得到Et Sir2A的全长ORF,构建p MAL-C2X-Et Sir2A重组表达质粒并进行原核表达;提取未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段/时期的总RNA,采用qRT-PCR方法检测Et Sir2A的转录动态变化。测序结果显示,克隆的Et Sir2A ORF序列全长909 bp,编码302个氨基酸,并能在大肠杆菌原核系统中成功表达;qRT-PCR结果显示,Et Sir2A在不同发育阶段mRNA转录水平差异显著,在未孢子化卵囊阶段最高,第二代裂殖子阶段最低。结果为进一步研究Et Sir2A功能和开发新型抗球虫药物提供了数据基础。
- 左云云马雪婷龚振兴殷昊刘保红韩政岚蔡建平
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫QRT-PCR
- 一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法
- 本发明公开了一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过使用无微生物DNA污染的二次蒸馏水并配制所需试剂，采用1.2M蔗糖漂浮沉淀法对卵囊进行纯化，纯化后的卵囊经15％次氯酸钠溶液和细胞裂解液...
- 龚振兴蔡建平刘保红殷昊李法财马雪婷
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫穿孔素样蛋白基因的原核表达与亚细胞定位
- 2019年
- 为了研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)穿孔素样蛋白(EtPLP)在球虫感染中与宿主相互作用关系,首次成功获得EtPLP1(1932 bp)和EtPLP2(4215 bp)2个目的基因。通过表达纯化得到2个大小分别为37和67 ku的目的蛋白,Western-blot结果显示其反应原性良好。通过免疫荧光技术,观察到EtPLP1定位在子孢子顶端。mRNA转录水平检测结果显示,EtPLP1在子孢子阶段的表达量最高,其次是第1代裂殖子阶段,EtPLP2 mRNA水平在第1代裂殖子阶段表达量最高,其次是第2代裂殖子阶段;它们在其他阶段表达量极低或不表达。结果表明EtPLP1和EtPLP2可能参与虫体入侵与逸出宿主细胞,为EtPLPs蛋白功能研究奠定了基础。
- 王文青蒋保余曲自刚刘保红肖星星马雪婷许笑蔡建平
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫MRNA水平亚细胞定位
- 鸡颗粒溶素的原核表达及生物活性分析
- 2018年
- 为了克隆表达纯化鸡颗粒溶素（chicken granulysin,ChGNLY）并进行活力鉴定。本试验以基因组数据库预测的ChGNLY基因为模板设计引物,对提取的鸡脾脏总RNA进行RT-PCR,扩增得到的ChGNLY基因插入pMD-19T载体中并测序。将测序正确的GNLY基因克隆至pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GNLY,并将其转化至感受态BL21,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE、Western-blotting和蛋白质谱鉴定融合蛋白的正确性。CellTiter-Glo2.0Assay检测融合蛋白的生物学活性。另外,对GNLY的分子特性进行了生物信息分析。结果显示,测序结果显示克隆的ChGNLY片段长237bp,编码79个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约为36 000。重组ChGNLY融合蛋白能特异性与人颗粒溶素抗体发生反应。纯化后的GNLY融合蛋白经CellTiter-Glo2.0Assay检测,发现其具有剂量依赖性的细胞毒活性。系统发生分析显示GNLY可明显分为4个群。结构分析发现,ChGNLY活性区域表面带有大量正电荷,且位点保守。结果表明,本试验利用原核表达系统成功表达了具有生物学活性的ChGNLY,为ChGNLY后续功能的研究奠定理论基础。
- 袁如意马雪婷殷昊殷昊杨顺利龚振兴韩政岚杨顺利刘晓丽曲自刚
- 关键词：颗粒溶素原核表达生物信息分析生物学活性
- 一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法
- 本发明公开了一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过使用无微生物DNA污染的二次蒸馏水并配制所需试剂，采用1.2M蔗糖漂浮沉淀法对卵囊进行纯化，纯化后的卵囊经15％次氯酸钠溶液和细胞裂解液...
- 龚振兴蔡建平刘保红殷昊李法财马雪婷
- 文献传递
- 不同地区鸡源产气荚膜梭菌的毒素型鉴定和药敏试验被引量：8
- 2015年
- 为探明我国鸡群中产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)不同毒素型分布特征及携带主要致病毒素基因和对饲用抗菌素的抗药谱,于2013年7月至2014年5月间从四川等7省17个肉鸡生产较为集中的地区采样692份,分离鉴定获得Cp菌株214株,分离率31%。经多重PCR方法鉴定,其中有206株为A型Cp,8株为C型。利用特异性单一PCR方法检测发现:有87株Cp携带β2毒素基因,阳性率为41%;5株携带Net B毒素基因,阳性率为2.3%。以最小抑菌浓度法(MIC)检测的常见饲用抗菌素敏感性结果显示:那西肽、弗吉尼亚霉素和效霉素有广泛的抑菌作用,四川德阳(2013)、四川眉山(2013)和广东鹤山(2013)的分离菌株对所测试的11种药物均表现敏感,而广西桂林(2014)的菌株仅对那西肽敏感。结果表明我国鸡源Cp具有明显的毒素型、主要致病毒素基因携带状况和抗药谱的地区差异。
- 胡贺覃宗华王艳华龚振兴刘保红殷昊彭险峰马雪婷李祥瑞蔡建平
- 关键词：坏死性肠炎产气荚膜梭菌毒素基因药敏试验
- 鸡组蛋白去乙酰化酶3的重组表达与结构信息学分析被引量：1
- 2014年
- 为比较柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)与鸡的组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)蛋白质序列和结构差异,以发现和筛选E.tenella HDAC3(EtHDAC3)的特异性抑制物。用RTPCR方法从杂交黄羽肉鸡的肠上皮细胞克隆ChHDAC3基因,以原核表达载体pMAL-C2X构建重组质粒pMAL-C2X-ChHDAC3,经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌Transetta,进行IPTG诱导表达。使用Swiss-Model对ChHDAC3和EtHDAC3进行同源建模,比较分析ChHDAC3和EtHDAC3的活性位点。利用Autodock 4.2进行分子对接,研究抑制剂Apicidin与ChHDAC3、EtHDAC3结合模式的差异。结果显示,克隆的ChHDAC3基因的ORF由1 287个核苷酸组成,编码428个氨基酸,能在大肠杆菌中进行可溶性表达。构建的ChHDAC3和EtHDAC3的三维模型均由8个串联的β折叠和11个α螺旋组成,其活性位点高度保守,仅在表面识别区有1个氨基酸的差异。Apicidin与EtHDAC3有更低的结合能,提示Apicidin对EtHDAC3具有更强的抑制活性和选择性。
- 路义鑫刘兵马雪婷殷昊龚振兴宋铭忻袁金钱蔡建平
- 关键词：同源建模分子对接
- 柔嫩艾美耳球虫真核起始因子5和5A基因的克隆表达及转录动态分析
- 2014年
- 旨在研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)真核起始因子5(EteIF5)和5A(EteIF5A)的功能,克隆、表达并分析EteIF5和EteIF5A在E.tenella广东株不同发育阶段的表达量变化。根据E.tenella基因组数据预测的编码序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆EteIF5和EteIF5A的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pMAL-c2x进行诱导表达。提取E.tenella5个发育阶段(/时期)的总RNA,使用qRT-PCR检测EteIF5和EteIF5A转录的动态变化。测序结果表明,克隆获得的EteIF5和EteIF5A ORF全长分别为1 248和486bp,各自编码315和161个氨基酸,均在大肠埃希菌表达系统中成功表达。qRT-PCR定量分析显示,eIF5和eIF5A的mRNA在E.tenella不同发育阶段转录量不同,子孢子阶段最高,在孢子化卵囊阶段最低。首次克隆获得了E.tenella eIF5和eIF5A ORF,揭示EteIF5和EteIF5A mRNA的转录量在不同发育阶段有显著差异。试验结果为进一步研究EteIF5和EteIF5A的功能,从EteIF5A合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础。
- 苟灵俏龚振兴于三科殷昊马雪婷蔡建平林青
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆QRT-PCR
- 柔嫩艾美耳球虫多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2的基因表达及转录动态分析被引量：1
- 2017年
- 蛋白质翻译后O-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌,多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide:N-acetylgalactosaminyltransferase 2,ppGalNAc-T2)是O-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有O-糖基化反应途径。为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)蛋白质翻译后糖基化修饰及其关键酶的药靶效用,对Et ppGalNAc-T2基因进行了克隆,并检测其在E.tenella不同发育阶段的表达动态。根据EuPathDB中所预测Et ppGalNAc-T2基因序列设计引物,以RT-PCR方法扩增获得Et ppGalNAc-T2的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pGEX-6p-1进行诱导表达。提取E.tenella广东株未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段的总RNA,以qRT-PCR法检测Et ppGalNAc-T2转录水平的动态变化。结果表明,Et ppGalNAc-T2的全长ORF为1 983bp,编码660个氨基酸,在E.coli Transetta(DE3)可溶性表达。qRT-PCR结果显示,Et ppGalNAc-T2转录水平随发育阶段不同而有显著差异,子孢子阶段表达水平最高、而在孢子化卵囊则几近不能检出。结果为进一步研究EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础。
- 刘晓丽龚振兴龚振兴曲自刚马雪婷刘保红曲自刚杨孝朴韩政岚
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆QRT-PCR
