- 流式细胞术三种染色方法检测体外纯化扩增的NK细胞的细胞毒作用比较被引量：5
- 2016年
- 目的:比较流式细胞术3种不同染色方法检测体外诱导扩增后NK细胞的细胞毒活性效果。方法:收集健康志愿者外周血,体外诱导扩增NK细胞,在培养第17天后分为3组,每组按10∶1、20∶1、40∶1 3个效靶比混合,共同培养4 h,并分组用3种不同方法染色后经流式细胞术检测。A组:CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法;B组:Annectin-V/PI双色荧光染色法;C组:CFSE/PI双色荧光染色法。结果:培养17 d后,NK细胞(CD3-CD56+)由培养第0天(16.34±10.51)%增加到(83.63±10.63)%(P<0.05)。3种染色方法检测结果均显示,扩增后NK细胞对K562细胞具有显著细胞毒活性:A组NK细胞对K562细胞的细胞毒活性均明显高于B和C组(P<0.05),当效靶比为10∶1时,A、B和C 3个组细胞毒活性分别为(36.56±3.69)%、(22.35±2.71)%和(10.85±2.09)%;当效靶比为20∶1时细胞毒活性分别为(47.83±5.52)%、(39.07±5.55)%和(29.61±4.81)%;当效靶比为40∶1时细胞毒活性则分别为(67.7±4.77)%、(51.51±4.43)%和(44.12±5.62)%,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论:健康者外周血经体外分离培养,可得到高纯度NK细胞;流式细胞检测技术CFSE/Annectin-V/7-AAD三色荧光染色法能特异性地和灵敏地检测NK细胞的细胞毒活性。
- 郭继强韩亚萍李芳赵晴贾原靳保利张俊萍
- 关键词：流式细胞技术细胞毒作用NK细胞CFSE
- 胃癌患者外周血CD8~+CD28~+和CD8~+CD28-T淋巴细胞亚群的分析
- 背景:细胞免疫在抗肿瘤免疫应答中发挥着重要作用,它通过功能各异的T淋巴细胞亚群来完成复杂的免疫调控,共刺激分子CD28主要表达于T淋巴细胞上,与存在于活化B淋巴细胞上的B7相互作用后产生的'第二信号'才能使T细胞活化,形...
- 李芳赵晴贾原韩亚萍郭继强张俊萍
- 关键词：胃癌CD8CD28流式细胞术
- 文献传递
- 流式检测技术与LDH法检测NK细胞活性的比较
- 研究背景:自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)又称天然杀伤细胞,其抗病毒感染、抗肿瘤无MHC限制性,已作为临床细胞免疫治疗肿瘤的一个重要治疗手段。目前常用的检测NK细胞的细胞毒效应的方法有MTT法...
- 郭继强韩亚萍贾原李芳赵晴张俊萍
- 关键词：NK细胞活性检测
- 文献传递
- 曲妥珠单抗增强肺癌患者外周血来源CIK细胞活性
- 研究背景:目前,在临床治疗肿瘤的过程中,细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)已被认为是一种有效的治疗手段。其具有增殖速度快、杀伤活性高、杀瘤谱广以及副作用小等特点,广泛...
- 郭继强韩亚萍贾原李芳赵晴张俊萍
- 关键词：曲妥珠单抗肺癌CIK活性
- 文献传递
- 维生素C可显著提升DC细胞成熟
- 研究背景:维生素C是人体所必需的一类小分子营养物质,它可确保机体功能正常发挥及免疫功能稳定。高浓度的维生素C富集与多种免疫细胞中,扮演'抗氧化剂'作用对抗机体氧化自由基,说明VC可能是维持自发性免疫及获得性免疫稳定的一个...
- 贾原李文丽李芳赵晴韩亚萍张俊萍
- 关键词：维生素C树突状细胞获得性免疫DC疫苗
- 文献传递
- VC-DC可显著过继免疫细胞活性水平向CTL分化
- 研究背景:维生素C可确保机体功能正常发挥及免疫功能稳定,调节多种免疫细胞,包括:树突状细胞,嗜中性粒细胞,巨噬细胞,B淋巴细胞,T淋巴细胞等,但VC对过继免疫细胞影响报道较少。本课题组发现VC可显著调节DC细胞成熟,并刺...
- 贾原李芳赵晴韩亚萍郭继强张俊萍
- 关键词：T细胞亚群树突状细胞
- 文献传递
- 穿膜肽介导的NY-ESO-1_(155-163)诱导CTL对黑素瘤A-375细胞的杀伤活性
- 2015年
- 目的:探讨穿膜肽(cell penetrating peptide,CPP)Tat_(49-57)携带NY-ESO-1_(155-163)抗原肽致敏DC后诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL),并体外检测其对黑素瘤细胞株A-375的杀伤效果。方法:采集健康志愿者外周血50 ml,用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,经细胞因子诱导,获得DC和T淋巴细胞。实验组用Tat_(49-57)-NYESO-1155-163致敏DC,待DC成熟后与T淋巴细胞混合诱导产生CTL,并设PBS组和NY-ESO-1_(155-163)组作为对照。流式细胞术检测致敏前后DC的表型,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测抗原肽疫苗致敏DC后诱导的CTL对黑素瘤细胞株A-375的体外杀伤活性,同时与对人肺癌A549细胞株、人白血病K562细胞的杀伤作用进行比较。结果:Tat显著提升NY-ESO-1_(155-163)进入DC的穿膜能力。与NY-ESO-1_(155-163)致敏的DC相比,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)致敏后DC的CD80/CD86[(54.9±3.3)%vs(43.8±5.7)%,P<0.05]和CD40[(42.1±1.9)%vs(23.7±2.8)%,P<0.05]的表达率显著升高。Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)刺激DC后诱导培养的T细胞亚群主要以MHC-Ⅰ类分子介导的CD3+CD8+细胞为主。Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)组CTL对A-375细胞的杀伤能力显著高于NY-ESO-1_(155-163)组,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增强(P<0.05)。A-375细胞高表达NY-ESO-1,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)组CTL对A-375细胞具有特异性杀伤作用,杀伤作用显著强于A549和K562细胞(均P<0.05)。结论:Tat_(49-57)可以增强NY-ESO-1_(155-163)抗原多肽的免疫原性,Tat_(49-57)-NY-ESO-1_(155-163)多肽致敏DC能有效诱导CTL抗黑素瘤细胞A-375的特异性免疫应答。
- 李文丽贾原赵晴李芳靳保利张俊萍
- 关键词：黑素瘤肿瘤免疫治疗
- 穿膜肽介导的NY-ESO-1抗原多肽CTL抗肿瘤效应研究
- 研究背景:细胞穿膜肽(Cell penetrating peptides,cpps)是一种由30个或者更少氨基酸组成的能够穿透细胞膜的多肽,能够运载包括药物在内的许多物质。目的:探讨细胞穿膜肽携带NY-ESO-1抗原多肽...
- 贾原李文丽赵晴李芳张俊萍
- 关键词：黑素瘤NY-ESO-1肿瘤免疫治疗
- 文献传递
- CD16单克隆抗体对肺癌患者自体外周血来源CIK细胞活性的影响
- 研究背景:细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells,CIK)是采集患者自体外周血在体外经一系列细胞因子刺激诱导培养而成的以CD3+CD56+细胞为主的效应T细胞群,兼具有T细胞强大的...
- 郭继强韩亚萍贾原李芳赵晴张俊萍
- 关键词：CIK
- 文献传递
- 利用滤除白细胞分离培养自然杀伤细胞方法的优化
- 2016年
- 目的利用制备血液制品中滤除的白细胞，体外诱导扩增自然杀伤细胞（NK），并对NK细胞的分离培养方法进行优化。方法收集15例健康献血者的新鲜外周血，将制备血液制品中滤除的白细胞回收，经密度梯度离心法获得外周血单个核细胞（PBMCs），每份样本分为CD3mAb组（包被CD3单克隆抗体）、CD16mAb组（包被CD16单克隆抗体）和CD16mAb＋CD3mAb组（包被CD16单克隆抗体和CD3单克隆抗体）。相同培养条件下，加入相同无血清细胞培养液和细胞因子培养、诱导扩增。在显微镜下观察细胞扩增倍数，采用流式细胞术检测细胞表型CD3-CD56＋细胞比例、NK细胞表面活化性受体的表达及细胞杀伤因子干扰素γ（IFN-γ）的分泌，采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法及流式细胞术检测NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用。结果培养第17天，CD3mAb组、CD16mAb组和CD16mAb＋CD3mAb组的CD3-CD56＋细胞比例分别为（15．19±12．22）％、（83．63±10．63）％和（49．40±12．64）％，而培养前CD3-CD56＋细胞比例为（16．34±10．51）％。CD16mAb组和CD16mAb＋CD3mAb组CD3-CD56＋细胞比例与CD3mAb组CD3-CD56＋细胞比例比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。CD3mAb组、CD16mAb组和CD16mAb＋CD3mAb组的NK细胞总数均〉10^9个。流式细胞术检测结果显示，CD16mAb组培养前CD3-CD56＋细胞表面活化性受体CD314、CD335、CD337的表达率分别为（68．59±5．01）％、（20．94±3．48）％和（33．27±6．27）％，培养第17天分别为（73．63±4．50）％、（57．53±4．77）％和（64．65±4．18）％，培养前后CD314表达率的差异无统计学意义（P〉0．05），培养前后CD335、CD337表达率的差异有统计学意义（P〈0．05）。扩增后的NK细胞对肿瘤细胞K562的细胞毒作用在效靶比为40：1时可达到（76．97±3．16）％。结论滤除的白细胞经体外分离培养后可得到比例高达90％的NK�
- 靳保利郭继强韩亚萍李芳赵晴李文丽张德梅王华张俊萍
- 关键词：细胞培养技术白细胞分离术细胞移植
