刘庆亮
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- 厄罗替尼对肺腺癌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究厄罗替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响以及对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的厄罗替尼对A549细胞的增殖抑制作用;以倒置相差显微镜、流式细胞术、TUNEL法及DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;以免疫荧光法分析厄罗替尼对EGFR蛋白表达的影响。结果厄罗替尼抑制A549生长呈时间浓度依赖性;厄罗替尼处理A549后倒置相差显微镜、DAPI及TUNEL均见到明显的凋亡细胞(P<0.05);药物处理组使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05);TUNEL检测到200μmol/L厄罗替尼组细胞凋亡率为(42.13±1.4)%,显著高于对照组(0.82±0.03)%(P<0.05);免疫荧光法表明厄罗替尼明显下调EGFR表达(P<0.05)。结论厄罗替尼杀伤A549细胞的机制与介导细胞凋亡、阻滞细胞周期于G/G期及阻滞EGFR信号途径有关。
- 白小燕牟晓燕姜淑娟王亚丽刘庆亮
- 关键词：厄罗替尼EGFRA549细胞细胞凋亡
- 阻断表皮生长因子受体和环氧合酶-2信号途径对肺腺癌细胞的抗增殖作用被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼(gefitinib)联合新型环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其可能机制。方法:肺腺癌A549细胞培养于RPMI 1640培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5μmol/L组、塞来昔布25μmol/L组、吉非替尼5μmol/L加塞来昔布25μmol/L组。药物干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,锥虫蓝拒染法检测药物对细胞生长的影响,Annexin V/PI法和Ho-echst33258染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测药物作用周期,免疫荧光和Real-time PCR法检测EGFR、COX-2蛋白的表达及EGFR mRNA的表达情况。结果:吉非替尼联合塞来昔布组相比单药组,A549细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆并开始脱落。吉非替尼与塞来昔布单药对A549细胞抑制作用具有时间和剂量依赖性,加药48 h时吉非替尼(5μmol/L)联合塞来昔布(25μmol/L)组抑制率为(58.2±4.6)%,明显高于单药组(P<0.01)。联合用药组A549细胞凋亡率明显高于单独用药组(33.9%vs6.0%,8.8%),其S期细胞明显减少、G0/G1期明显增加(P<0.01);EGFR、COX-2蛋白的表达明显减弱(P<0.05),EGFR mRNA相对表达量(0.28±0.05)明显高于单独用药组(P<0.05)。结论:吉非替尼和塞来昔布联合对肺腺癌A549细胞增殖的抑制具有明显协同作用,其可能机制是诱导凋亡、增强G0/G1期阻滞和进-步下调活化的EGFR与COX-2的表达。
- 牟晓燕王亚丽白小燕刘庆亮
- 关键词：A549细胞表皮生长因子受体环氧合酶-2
- 塞来昔布抑制人肺腺癌细胞的增殖和表皮生长因子受体的表达
- 2011年
- 目的:探讨不同浓度的环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)在不同时间点对肺腺癌A549细胞株增殖和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法:人肺腺癌A549细胞株培养于含10%胎牛血清RPM11640培养基中。实验细胞分组如下:A组,正常对照;B组,Celecoxib(12.5 μmol/L);C组Celecoxib(25 μmol/L);D组Celecoxib(50 μmol/L),E组Celecoxib(75 μmol/L),均以RPMI1640培养液配置。使用不同浓度塞来昔布(12.5、25、50和75 μmol/L)处理肺癌A549细胞24、48、72 h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖抑制率;Annexin Ⅴ/PI染色法与Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测药物作用周期;Real-time RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达情况。结果:塞来昔布明显抑制了A549细胞的生长,呈时间、剂量依赖性。塞来昔布组细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.01),且呈剂量依赖性,S期细胞比例明显减少(P<0.01),G_0/G_1期细胞比例明显增加(P<0.01),提示塞来昔布能将大多数A549细胞阻滞于G_0/G_1期。塞来昔布组细胞EGFR mRNA表达明显减弱(P<0.05),且呈浓度依赖性,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:基来昔布显著抑制A549细胞生长,可能机制是通过促进凋亡、增强G_0/G_1期阻滞、下调细胞中EGFR mRNA的表达,从而为应用基来昔布治疗肺腺癌,以及塞来昔布和表皮生长因子受体抑制剂联用提供了一定的实验依据。
- 王亚丽牟晓燕魏启宏吴峰白小燕刘庆亮
- 关键词：塞来昔布凋亡表皮生长因子受体环氧化酶-2
- RNA干扰及厄洛替尼阻断EGFR信号途径对A549细胞抗增殖的影响
- 2012年
- 目的研究RNA干扰(RNAi)及厄洛替尼阻断表皮生长因子受体(EGFR)信号途径对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法肺腺癌A549细胞分为对照组、RNAi组、厄洛替尼组。采用倒置相差显微镜观察EGFR信号阻断前后细胞形态的变化,RT-PCR检测EGFR mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测EGFR及Bcl-2、Bax表达。结果 RNAi阻断EGFR mRNA表达下调。与对照组相比,RNAi组及厄洛替尼组A549细胞凋亡增加,EGFR表达降低,Bcl-2水平表达降低,Bax蛋白表达增高,Bcl-2/Bax比值降低。结论阻断EGFR信号途径可促进肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值水平相关。
- 刘庆亮牟晓燕王静迟翔宇张敏马卫霞
- 关键词：A549细胞RNA干扰厄罗替尼
- 厄罗替尼联合塞来昔布阻断EGFR和COX-2抑制肺癌A549细胞增殖被引量：3
- 2011年
- 目的探讨厄罗替尼联合塞来昔布对肺腺癌A549细胞系凋亡、表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。方法厄罗替尼、塞来昔布单独或联合干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞抑制率;Hoechst33258法和TUNEL法检测细胞凋亡和流式细胞术检测细胞周期;免疫荧光检测EGFR和COX-2蛋白表达。结果厄罗替尼联合塞来昔布组相比单药组A549细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆开始脱落;二者联合作用时抑制作用更强(P<0.05),厄罗替尼与塞来昔布均能诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高(P<0.05),并使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05),进一步下调了EGFR和COX-2蛋白的表达(P<0.05)。结论厄罗替尼与塞来昔布联合应用可协同介导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR和COX-2信号途径。
- 白小燕牟晓燕姜淑娟王亚丽刘庆亮
- 关键词：厄罗替尼塞来昔布A549细胞环氧合酶-2
- 表皮生长因子受体表达与非小细胞肺癌放疗敏感性的关系被引量：3
- 2013年
- 目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）表达与非小细胞肺癌（NSCLC）放疗敏感性的关系。方法体外化学合成EGFR基因序列特异性双链RNA（dsRNA）结合脂质体Lipofectamine2000转染肺腺癌细胞株SPC—A1，采用实时荧光定量PCR（real—timePCR）和Wesemblot法测定转染细胞中EGFRmRNA和蛋白的表达，采用集落抑制实验观察EGFR序列特异性dsRNA（dsRNA—EGFR）的体外放疗增敏作用。建立裸鼠肿瘤模型，通过测定肿瘤体积和肿瘤重量，绘制肿瘤生长曲线，计算肿瘤抑制率。结果对照组、dsRNA．unrelated组和dsRNA—EGFR组的EGFRmRNA相对表达量分别为1．51±0．22、1．38±0．15和0．45±0．11（F=482．7，P〈0．01），EGFR蛋白表达水平分别为2340．87±10．99、2231．85±35．66和832．03±39．13（F=263．3，P〈0．05）。dsRNA—EGFR可将对照组EGFRmRNA和蛋白水平分别下调70．2％和64．5％。放疗对照组、dsRNA-unrelated联合放疗组和dsRNA-EGFR联合放疗组的集落抑制率分别为9．3％、12．5％和65．5％，肿瘤抑制率分别为21．3％、24．4％和64．2％，dsRNA-EGFR联合放疗可显著抑制体外、体内的肿瘤生长。结论dsRNA—EGFR可显著抑制NSCLC中EGFRmRNA和蛋白的表达．有效抑制肿瘤牛长,增强NSCLC的放疗敏感性。
- 张敏牟晓燕姜淑娟刘庆亮李道卫
- 关键词：肺肿瘤表皮生长因子受体RNA双链
- EGFR-TKI联合COX-2抑制剂抑制肺腺癌A549细胞的增殖及其机制被引量：6
- 2012年
- 目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)吉非替尼联合环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法:实验设空白对照组、吉非替尼组、塞来昔布组、吉非替尼+塞来昔布组。倒置相差显微镜下观察A549细胞形态变化,MTT法检测A549细胞增殖,流式细胞术检测A549细胞周期及凋亡,Western blotting检测A549细胞中EGFR、p-EGFR、COX-2的表达。结果:吉非替尼和塞来昔布均可抑制A549细胞的增殖,可见细胞活性下降,G1期细胞阻滞及细胞凋亡增加;联合用药较单药组A549细胞活性下降更明显,G1期阻滞细胞增加,且细胞凋亡增加。吉非替尼或塞来昔布作用前后A549细胞EGFR表达无变化,但联合用药组p-EGFR及COX-2的表达较单药组显著下降。结论:吉非替尼联合塞来昔布可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,其机制可能与抑制EGFR的活化及下调COX-2的表达有关。
- 刘庆亮牟晓燕张敏董雪丽孙杰尹雁惠
- 关键词：肺腺癌A549细胞塞来昔布环氧合酶-2
- 塞来昔布联合厄罗替尼对人肺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨厄洛替尼和塞来昔布联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)和环氧合酶-2(COX-2),对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长及血管形成的影响。方法人肺癌细胞A549接种于裸鼠皮下,成瘤后随机分为4组:对照组、厄洛替尼组、塞来昔布组、塞来昔布和厄洛替尼联合用药组,给予灌胃处理,观察裸鼠生长状况,每周两次测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线。40 d后处死裸鼠,称取移植瘤质量。采用免疫组化检测肿瘤微血管密度(MVD),ELISA法检测裸鼠血清中血管内皮生长因子(sVEGF)的含量,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达情况并计算Bcl-2/Bax的值。结果联合用药组肿瘤明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P<0.05)。联合用药组微血管数目、sVEGF的含量明显小于塞来昔布组、厄洛替尼组和对照组(P<0.05)。厄洛替尼组Bcl-2的表达明显小于对照组(P<0.05),塞来昔布组Bcl-2的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),联合用药组Bcl-2的表达与对照组、塞来昔布组、厄洛替尼组相比均明显降低(P<0.05)。Bax的表达在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。联合用药组Bcl-2/Bax较塞来昔布组、厄洛替尼组明显降低(P<0.05)。结论塞来昔布联合厄洛替尼相对厄洛替尼或塞来昔布明显抑制人肺癌移植瘤的生长。其中减少微血管生成、增加肿瘤细胞的凋亡可能为其抗肿瘤机制。
- 董雪丽牟晓燕刘庆亮孙杰
- 关键词：塞来昔布厄洛替尼裸鼠移植瘤微血管生成
