张琴
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 截短的铜绿假单胞菌外毒素（PE38KDEL）在大肠杆菌中的表达及其生物学活性的研究
- 目的：
铜绿假单胞菌外毒素/(Pseudomonas Exotoxin A，PE/)是铜绿假单胞菌/(Pseudomonas aeuriginosa，PA/)分泌的一种致病物质。PE为一条单链多肽，能抑制...
- 张琴
- 关键词：PE38KDEL原核表达MTS细胞毒性实验
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核表达载体构建及其鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、PCR扩增鉴定及DNA序列测定证实插入片段正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后及蛋白免疫印迹法分别测定其大小和特异性。结果经鉴定证实原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了PE38KDEL与GST的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被PE的特异性抗体所识别。结论PE38KDEL在大肠杆菌中获得了高效的融合表达,为下一步研究其功能奠定了基础。
- 张琴李明远张林蒋忠华祁志荣李虹
- 关键词：PE38KDEL原核表达
- 大鼠IP-10-PE38 KDEL重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 目的构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PRKL459K-IL-4-PE38KDEL获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建rIP-10与PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL。重组质粒经限制性性内切酶,PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测rIP-10-PE38KDEL融合蛋白在NIH3T3细胞的表达。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,rIP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组基因可在NIH3T3细胞表达。结论rIP-10-PE38KDEL融合基因可在NIH3T3细胞中表达,为进一步研究其对自身免疫病的Th1细胞靶向毒性及临床应用奠定基础。
- 孙岚祁志荣张琴林媛李明远张林蒋忠华李虹
- 关键词：PE38KDEL重组免疫毒素NIH
