刘英杰
- 作品数：5 被引量：32H指数：3
- 供职机构：河北联合大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 医用多孔钽材料对大鼠软骨细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- [目的]观察国产多孔钽材料对大鼠软骨细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响，为其作为软骨组织工程支架材料临床应用提供实验依据。[方法]选用3周龄SD大鼠双侧股骨头、膝关节分离软骨组织，经Ⅱ型胶原酶消化，饱和湿度培养，传代。倒置显微镜下逐日观察细胞生长状态。待第2代细胞生长至80％左右时，通过甲苯胺蓝染色、番红O-固绿染色以及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行软骨细胞鉴定。以F12-DMEM为浸提介质分别制备100％、50％、25％多孔钽浸提液，软骨细胞加不同浓度多孔钽浸提液作为实验组，未加浸提液的软骨细胞作为对照组；MTr法检测多孔钽浸提液对软骨细胞增殖的影响及细胞毒性检测。将第2代软骨细胞接种到多孔钽支架上进行体外三维培养，而对照组是将软骨细胞接种到无支架的培养板上，倒置相差显微镜观察两组软骨细胞生长状态；胰酶消化复合于材料上的软骨细胞，流式细胞仪检测软骨细胞的细胞周期变化及细胞凋亡。[结果]软骨细胞接种初期大小不等，呈圆形悬浮于培养液中，24h后贴壁细胞伸展呈三角形、多角形等。第7—-9d待细胞生长呈现融合时即可传代。甲苯胺蓝染色显示软骨细胞胞浆内可见蓝紫色颗粒，番红O-固绿染色显示胞浆呈绿色、细胞核呈紫红色，Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色显示阳性信号位于胞浆及部分胞膜，以上方法证实了分离培养的细胞为软骨细胞；bwr法检测显示随着培养时间的延长，各浓度浸提液组细胞生长与对照组无明显差异，软骨细胞形态正常，贴壁增殖良好，相同时间点不同浓度的浸提液与对照组间细胞增殖差异无统计学意义（P〉0．05），提示软骨细胞在多孔钽浸提液中生长、增殖状态良好且多孔钽材料无毒性。多孔钽支架材料外观灰色光亮，表面及断面可见分布均匀的蜂窝状孔隙，�
- 张岭李琪佳甘洪全刘英杰王志强
- 关键词：细胞周期凋亡软骨组织工程
- 医用多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的生长特性及功能变化被引量：8
- 2014年
- 目的评价多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的体外生长特性及功能变化。方法选取3周龄SD大鼠,分离关节软骨细胞并进行体外扩增培养,取生长状态良好的第2代细胞,鉴定后以1×106/ml密度接种于多孔钽上进行复合培养。采用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察软骨细胞在多孔钽上的形态特点,比色法测定复合培养的软骨细胞中糖胺多糖(GAG)的含量。结果经Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、甲苯胺蓝染色及番红O染色鉴定所获细胞为软骨细胞。倒置相差显微镜观察可见多孔钽边缘及培养板底部黏附大量软骨细胞;扫描电镜观察可见软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内黏附、伸展、增殖,并分泌细胞外基质;透射电镜观察显示软骨细胞内超微结构大小及形态无明显改变;比色法检测显示软骨细胞在多孔钽支架上可持续分泌GAG。结论多孔钽材料与软骨细胞体外共培养显示出良好的生物相容性,适合作为软骨组织工程的支架材料。
- 张岭李琪佳赵季华薛荣甘洪全刘英杰王志强
- 关键词：生物相容性材料软骨细胞
- 国产多孔钽对成骨细胞生物相容性及其相关成骨基因表达的影响被引量：15
- 2014年
- 目的 探讨国产多孔钽材料对成骨细胞粘附、增殖及成骨基因OPN、OC及FN mRNA表达的影响。 方法 分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞并鉴定。根据国家标准制备多孔钽浸提液，以多孔钽浸提液与成骨细胞作为实验组，以DMEM完全培养基培养成骨细胞作为对照组。MTT法检测多孔钽浸提液对成骨细胞生长及增殖的影响；倒置相差显微镜及扫描电镜观察成骨细胞在多孔钽上粘附、生长及增殖的情况；实时荧光定量PCR技术检测OPN、OC及FN mRNA的表达并进行定量分析。 结果 肉眼及扫描电镜观察多孔钽外观呈深灰色、多孔状三维立体结构，表面及断面均匀分布直径400～600 μm的微孔，内部孔隙相互连通。MTT法检测结果显示，实验组及对照组成骨细胞培养1～8 d，除第3天外，各时间点细胞光密度值差异无统计学意义（P〉0.05）。成骨细胞种植于多孔钽培养结果显示，材料表面和孔隙内细胞叠层生长，分泌的骨基质完全覆盖材料表面。实时荧光定量PCR检测结果显示，实验组成骨基因OPN、OC、FN mRNA的相对表达量分别为1.45、1.79、1.69。 结论 国产多孔钽材料具有良好三维立体空间构型及良好的生物相容性，可刺激成骨细胞的粘附、增殖及成骨基因OPN、OC及FN mRNA的表达。
- 耿丽鑫甘洪全王茜张辉刘英杰王志强李琪佳
- 关键词：成骨细胞细胞增殖生物相容性
- 多孔钽材料细胞毒性、生物相容性及体内成骨性研究被引量：12
- 2014年
- 目的 探讨国产多孔钽材料的细胞毒性和生物相容性,并通过兔骨内植入成骨示踪观察其成骨作用.方法 扫描电镜观察并测量多孔钽的形态学特征.来源于新西兰胎兔颅盖骨的成骨细胞以多孔钽浸提液（实验组）及完全培养基（对照组）培养,MTT法检测多孔钽的细胞毒性及其对增殖的影响.成骨细胞与多孔钽体外复合培养,观察成骨细胞的黏附、生长及增殖.雄性新西兰大白兔24只,制备股骨髁上多孔钽棒植入模型;4只动物于术后第5天和第19天分别肌肉注射荧光素钙黄绿素和茜素红,术后10周取材,于488 nm（钙黄绿素激发光）和543 nm（茜素红激发光）波长处,激光扫描共聚焦显微镜观察多孔钽-骨界面成骨;20只动物于术后2、4、8和12周取材行大体及硬组织切片观察.结果 多孔钽表面及断面可见均匀分布的三维立体连通孔隙结构.MTT法检测显示实验组与对照组细胞随培养时间的延长,其OD值的差异均无统计学意义.扫描电镜显示复合培养早期,细胞在多孔支架表面和孔壁上黏附,相互连接;晚期汇合成片并分泌细胞外基质覆盖材料表面.体内成骨实验显示植入的多孔钽棒与宿主骨结合紧密.硬组织切片显示术后2、4周时多孔钽-骨界面已出现新生骨及小血管,并向孔隙内生长;8、12周时多孔钽表面和孔隙内已长满新生骨组织,新生骨小梁已发育成熟并与材料直接接触.激光共聚焦扫描显微镜显示多孔钽-骨界面及孔隙内可见绿色荧光（钙黄绿素）和红色荧光（茜素红）标记的新生骨组织,红色荧光带位于绿色荧光带周围,早期均呈不连续性,晚期则融为一体.结论 国产多孔钽材料无细胞毒性,具有良好的生物相容性,多孔钽-骨界面为接触及传导性成骨并呈时间依赖性.
- 李琪佳王茜甘洪全刘英杰王志强
- 关键词：钽成骨细胞
- 经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞移植对脊髓损伤修复的影响被引量：1
- 2015年
- [目的]研究经嗅鞘细胞条件培养液诱导的骨髓基质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤的治疗作用。[方法]采用脊髓挤压损伤方法,制造SD大鼠脊髓损伤动物模型(共24只),随机分成A、B、C三组(每组8只),立即分别将DMEM、BMSCs和经诱导的BMSCs移植入脊髓损伤部位,分别于移植4、8周后处死动物,均采用HE染色观察脊髓损伤处空洞面积改变情况;并采用抗神经丝(NF)抗体、生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体和神经元特异性核蛋白(Neu N)抗体免疫组织化学荧光染色,观察移植的BMSCs存活和分化情况及损伤部位神经纤维再生情况。[结果]移植4、8周后,脊髓损伤区空洞为移植细胞充填,空洞面积明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),BBB评分结果 C组和A、B组之间存在统计学差异(P<0.05)。B、C组均可见再生神经纤维形成,同时部分移植细胞呈Neu N染色阳性,在C组上述改变更加显著。[结论]经嗅鞘细胞条件培养液诱导的BMSCs可以在脊髓损伤区存活,能够显著减小脊髓损伤处空洞面积,并可以促进脊髓损伤区神经纤维的修复再生,促进大鼠双下肢运动功能的恢复。
- 冯林杰甘洪全刘英杰余向前刘昊毕成罗卓荆
- 关键词：脊髓损伤骨髓基质干细胞条件培养液
