吕万胜
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金更多>>
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- hVDAC1蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其结构功能的初步表征
- 2016年
- 电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)是线粒体外膜上最丰富的蛋白,在调节线粒体的物质代谢与能量代谢、以及线粒体介导的细胞凋亡中起重要作用,因而与肿瘤及神经退行性疾病的发生密切相关.VDAC1是三种VDAC变体中表达量最高、分布最广泛的一种.由于VDAC1的高度保守性,因此成为多种疾病治疗包括抗肿瘤治疗的理想靶点.获得足量的VDAC1蛋白是进一步研究其结构功能、筛选与VDAC1相互作用的药物分子的基础.从生物样品中直接分离纯化VDAC1,不仅条件苛刻,而且得率很低.因此利用DNA重组技术在大肠杆菌中重组表达VDAC1是获得足量蛋白、用于后续研究的重要途径.成功构建了C端带有His-tag的hVDAC1的重组蛋白原核表达质粒pET28a/hVDAC1,在大肠杆菌中以包涵体形式表达,并通过盐酸胍变性、在变性条件下通过NTA-Ni亲和层析柱纯化蛋白后进行复性的方法,获得了高纯度的hVDAC1.圆二色谱检测显示该蛋白二级结构以β-折叠为主、符合hVDAC1的二级结构特征.利用流式细胞仪检测结果显示:FITC荧光标记的hVDAC1可以与脂质体膜、细胞膜特异性结合.证明克隆表达纯化的hVDAC1具有特征的膜蛋白结构和功能,为体外筛选与hVDAC1相互作用的各类分子奠定了基础.
- 吕万胜朱伶俐吴先登王泽南郭文洁高静华子春郑伟娟
- 关键词：原核表达圆二色谱脂质体
- 三种用于透明质酸检测的融合蛋白的构建表达及检测效果比较
- 2015年
- 透明质酸是一种长链大分子糖胺聚糖,存在于各组织器官中,是细胞外基质的重要组成部分.透明质酸不仅能够与其他胞外多糖及蛋白构成骨架,参与组织器官的结构形成,也可以与细胞表面相关蛋白受体相互作用,通过相关信号通路影响细胞的生存、增殖以及迁移.研究证实,透明质酸与肿瘤细胞的生存、迁移,肿瘤血管发生等均有密切关系,组织中透明质酸含量的变化也与某些病理状况如慢性炎症相关.因此,细胞表面或组织中的透明质酸含量的定量检测,对于疾病的诊断及预后都具有重要意义.目前透明质酸的检测方法主要依靠抗体,通过酶联免疫检测体液中的透明质酸,而缺乏在细胞或组织水平上检测透明质酸的手段.本研究将三种人源的透明质酸结合蛋白(P32,CDC37以及RHAMM)与绿色荧光蛋白(EGFP)进行融合,在大肠杆菌中进行可溶性表达,经亲和纯化,获得了三种能够与透明质酸结合的蛋白探针.通过在溶液与细胞水平上比较与透明质酸结合的能力,从中筛选出了最适合用来进行透明质酸检测的荧光蛋白探针RHC-EGFP.
- 段宁骏吕万胜贡佳郑伟娟华子春
- 关键词：透明质酸透明质酸结合蛋白绿色荧光蛋白
