刘传亮
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省博士后基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- t-PA对EAE病理性淋巴细胞与血脑屏障粘附的影响
- 2015年
- 目的:研究组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠病理性淋巴细胞与血脑屏障粘附的影响。方法:用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE动物模型,于发病高峰期取淋巴细胞用MOG35-55肽段进行刺激得到抗原特异性T淋巴细胞。通过尾静脉给予t-PA的方法对EAE小鼠进行干预,临床评分评价小鼠的发病情况。体外培养小鼠血脑屏障内皮细胞系b End.3,应用不同浓度的t-PA进行处理。用荧光标记MOG35-55特异性T细胞进行细胞粘附实验,用Transwell小室建立体外血脑屏障模型进行细胞迁移实验。用免疫荧光化学方法检测ICAM-1的表达情况。结果:t-PA处理可以使血脑屏障内皮细胞与T淋巴细胞粘附和迁移作用增强。在体外细胞培养模型中检测到t-PA诱导ICAM-1表达升高。经过t-PA处理的小鼠,其血管内皮表面ICAM-1的表达也有所上升。经t-PA处理的EAE小鼠发病高峰提前,症状加重。结论:t-PA处理可以使EAE病理性淋巴细胞与血脑屏障内皮的粘附性增加,浸润能力增强;t-PA所引起的粘附性增加可能与b End.3表面ICAM-1表达升高有关。
- 王菁华张建华于瑞洪穆莉莉刘玉梅刘传亮王广友
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂实验性自身免疫性脑脊髓炎血脑屏障粘附
- RGS5过表达腺病毒载体构建及其在神经元发育中作用的初步研究
- 2022年
- 目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建G蛋白信号调节蛋白5(regulator of G-protein signaling 5,RGS5)重组腺病毒载体,初步探讨RGS5在神经元发育过程中的作用。方法以C57BL/6小鼠大脑皮层神经元cDNA为模板,利用PCR扩增RGS5基因,构建腺病毒重组质粒pAD-Track-RGS5。重组质粒pAD-Track-RGS5经PacI酶切线性化后与pADEasy-1骨架质粒共同转化BJ5183感受态细胞,筛选重组成功的质粒,命名为pAD-RGS5。用293A细胞包装重组腺病毒AD-RGS5,并纯化病毒,以pAD-Track包装的腺病毒(AD-EGFP)作为对照组检测重组腺病毒RNA水平RGS5表达情况。将重组腺病毒AD-RGS5感染培养的原代皮层神经元,以AD-EGFP作为对照组检测RGS5对原代皮层神经元发育的影响。结果与Neuro 2a、CATH.a和C17.2细胞系比较,大脑原代皮层神经元RGS5相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(t值分别为7.40、7.58和7.60,P值均<0.05)。pAD-Track-RGS5转染Hela细胞中RGS5表达量较pAD-EGFP组明显升高,差异显著具有统计学意义(t=7.58,P<0.05),成功构建了过表达RGS5基因的腺病毒载体。与AD-EGFP腺病毒组相比,AD-RGS5腺病毒组神经元对突触囊泡内吞的能力变弱,荧光染色变弱,差异具有统计学意义(t=5.372,P<0.05),提示RGS5对皮层神经元的突起发育具有明显的抑制作用。结论成功构建了RGS5过表达的AD-RGS5腺病毒载体,RGS5对原代皮层神经元胞吞突触囊泡的能力有抑制作用。
- 赵崴刘传亮徐昊李高驰王金彩
- 关键词：腺病毒神经元
- 小鼠免疫相关GTP酶Irgm基因家族的研究进展被引量：1
- 2016年
- 免疫相关GTP酶（IRG）基因家族与抗感染和炎症免疫过程有关.小鼠Irgm1、Irgm2与Ir-gm3基因编码的蛋白参与细胞自噬、Colon氏病等发生发展,并在固有免疫应答中发挥重要作用.了解Irgm1、Irgm2与Irgm3基因的表达、功能等情况以及Irgm1、Irgm2与Irgm3基因编码的蛋白参与免疫过程的机制,有利于免疫系统疾病的治疗.
- 刘禹汐刘传亮王菁华
- 关键词：固有免疫应答
- 大鼠重组骨桥蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达和纯化
- 2016年
- 目的 构建包含大鼠骨桥蛋白（OPN）的真核表达载体,获得稳定表达重组蛋白的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株并对蛋白进行纯化,为OPN在大鼠模型实验中的进一步功能学研究奠定基础.方法 通过脂质体lipofectamine 2000将重组质粒pLVX-OPN转染到CHO细胞中,嘌呤霉素筛选出稳定克隆细胞.Real-time PCR法检测转染后CHO细胞中OPN的mRNA表达水平,酶联免疫吸附实验法（ELISA）检测上清中OPN分泌水平.取CHO细胞72 h无血清培养上清进行镍柱亲和层析纯化,ELISA法和Western blot法分别检测产量和纯度.结果 pLVX-OPN表达载体经DNA琼脂糖电泳鉴定为阳性,且质粒测序成功.经质粒pLVX-OPN转染的CHO细胞中OPN mRNA表达水平是转染前的上千倍,上清分泌蛋白水平较转染前增加.上清分泌的OPN蛋白通过镍柱亲和层析纯化后纯度有所提高,产量在30％以上.结论 pLVX-OPN真核表达载体的成功构建和在CHO细胞中的稳定表达及纯化为OPN的功能学研究提供了有效工具.
- 敬佳李文瑾刘传亮曲思盈崔英哲穆莉莉孔庆飞李呼伦王广友
- 关键词：CHO细胞纯化
