赵玉佳
- 作品数：17 被引量：37H指数：4
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- 猪病毒性腹泻检测基因芯片的两种样品标记技术比较被引量：4
- 2016年
- 对猪病毒性腹泻检测芯片的两种样品标记方法进行比较。分别选取猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S和M基因,猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N和S基因,A型猪轮状病毒(GAR)的VP7和NSP4基因设计引物,用PCR扩增制备靶基因,纯化后制备猪病毒性腹泻联合检测基因芯片。提取样品核酸,采用Cy3直接标记法和间接标记法进行PCR扩增标记,标记的样品再与芯片杂交、扫描和数据分析,同时对两种标记方法的特异性、敏感性等进行了比较。结果表明,两种方法标记的样品均能与基因芯片特异性杂交,但直接法的中位信号值(median)均高于间接法的中位信号值,直接法的芯片杂交信噪比是用间接法的5倍以上。两种标记方法制备样品特异性好,猪蓝耳病毒、猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒验证检测为阴性;直接法和间接法的最低检测浓度分别为10~5和10~7 copies·μL^(-1),前者的灵敏性是后者的100倍。应用优化的直接标记法处理56份临床样品,进行芯片的检测应用,结果与RT-PCR一致。本研究结果表明直接法荧光标记样品可明显提高病毒性腹泻检测芯片的检测效果。
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- 关键词：基因芯片
- 新城疫病毒传染性支气管炎病毒和传染性喉气管炎病毒共检基因芯片的构建被引量：6
- 2015年
- 本试验在前期研究的基础上,进一步构建了联合检测新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)的基因芯片。克隆和鉴定了NDV-F、NDV-HN、IBV-M、IBV-N、ILTV-TK、ILTV-gB共6个基因,将其特异cDNA/DNA片段作为靶基因点制于氨基修饰的玻片上,制备了NDV-IBV-ILTV共检基因芯片阵列。以这3种病毒的核酸作为模板,引入Cy3-dCTP进行探针的PCR扩增标记,标记产物与芯片杂交,进行基因芯片的有效性评价,同时对该芯片的特异性、敏感性和稳定性进行了评价,并进行了临床初步检测验证。结果,确定了NDV-IBV-ILTV共检芯片的探针PCR扩增标记体系,确定Cy3-dCTP终浓度为100μmol/L;以禽流感病毒和传染性囊病病毒为模板制备的探针不与NDV-IBVILTV芯片杂交,NDV、IBV、ILTV之间无交叉反应;该芯片检测的灵敏度为20pg/μL;随机抽取3张不同批次制备的芯片,与NDV-F和NDV-HN的杂交结果显示,SNR均大于3。分别用该基因芯片和PCR/RTPCR检测了12份临床病料,结果显示,NDV检出率为16.67%,IBV检出率为41.67%,ILTV检出率为0,两者的检测结果一致。结果表明该检测技术能够用于NDV、IBV和ILTV快速诊断和临床病料的检测。
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- 关键词：新城疫病毒传染性支气管炎病毒传染性喉气管炎病毒基因芯片
- 多重PCR技术在猪病检测中的应用被引量：4
- 2016年
- 多重PCR技术是一种实用的分子诊断技术,该技术能在同一反应体系中同步扩增多个目的片段,具有高效、快捷、敏感、特异等优势,适用于对大量临床样本的快速检测。本文就多重PCR的技术原理、在猪病检测中的技术类型(常规技术、分型技术、创新技术)等进行了叙述。
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- 关键词：多重PCR猪病
- CSFV-PRRSV-JEV联合共检基因芯片的研制与初步应用被引量：4
- 2016年
- 对猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）和猪流行性乙型脑炎病毒（JEV）联合共检基因芯片的初步应用进行了研究。选用夹缝针,BaiOR点样缓冲液,确定靶基因质量浓度为200mg/L,各样点中心间距300μm,样点直径100μm,在相对湿度为50%~60%、8~30℃条件下用晶芯？SmartArrayerTM48点样仪在氨基化基片上接触式点样,成功制备了CSFV-PRRSV-JEV检测基因芯片。将标记后的探针基因与PRRSV-CSFV-JEV基因芯片经预杂交、杂交、洗涤干燥后,用晶芯？LuxScanTM10K微阵列芯片扫描仪扫描观察结果。结果表明：制备的芯片特异性强,检测灵敏度可达0.295μg/L,4℃条件下可保存120d;用制备的芯片对临床67份疑似繁殖障碍性疾病的病料进行检测,与RT-PCR检测结果符合率均在94%以上,为猪繁殖障碍性疾病的检测提供了理想的检测方法。
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- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒乙型脑炎病毒基因芯片
- 两种标记方法对cDNA芯片杂交信号的初步分析被引量：1
- 2016年
- 为研究两种不同的标记方法对杂交效率的影响,将含NDV的F和HN基因、IBV的M和N基因、ILTV的TK和gB基因的重组质粒作为靶基因,分别采用Cy3直接引物标记法和间接掺入标记法进行PCR扩增。然后将荧光标记的样品与芯片进行杂交,收集扫描后的输出图像和荧光强度信号值,分析两种标记方法对芯片杂交效率的影响。结果显示,Cy3引物标记方法所获得NDV、IBV、ILTV芯片扫描数据结果,图像直观判断均优于间接掺入标记方法。表明Cy3直接引物标记法是一种能够提高杂交的信号值,降低背景信号值,提高杂交效率的方法,有利于检测型基因芯片的应用。
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- 关键词：基因芯片
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒和日本脑炎病毒二联基因芯片的构建与应用被引量：3
- 2015年
- 针对靶基因库中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重组质粒T/PRRS-PS9、T/Y11和日本脑炎病毒(JEV)的重组质粒T/PRM/M、T/JEV-C,设计4对特异性引物,采用PCR扩增获得4个靶基因片段,并用PCR标记Cy3探针,建立了一种检测PRRSV和JEV的芯片方法。特异性试验结果显示,PRRSV、JEV之间无交叉杂交,猪瘟病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒与PRRSV-JEV基因芯片无杂交反应。灵敏性试验结果显示,50μL杂交体系中探针DNA的质量浓度为0.295pg/μL时仍为杂交阳性。对从猪场收集的31份样品进行处理并用基因芯片检测,PRRSV的检出率为12.9%(4/31),JEV的检出率为9.68%(3/31),PRRSV与JEV混合感染的检出率为0(0/31)。此方法的结果与PCR的检测结果完全符合。结果表明,所建立的二联基因芯片有望成为一种快速鉴别PRRSV与JEV的新方法。
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- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒日本脑炎病毒基因芯片繁殖障碍
- 猪蓝耳病、猪瘟、流行性乙型脑炎可视化共检基因芯片的构建及初步应用
- 引言猪繁殖障碍性疾病是一大类影响养猪业的常见疾病,如乙脑同时也是人兽共患病。在发病的猪群中,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行性乙型脑炎(JEV)、猪瘟(CSF)是致病性较高的也是较为常见的由RNA病毒引起的发病。病原体...
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- 文献传递
- 可视化芯片显色技术在病原学检测中的研究进展被引量：4
- 2017年
- 基因芯片检测技术自20世纪90年代建立以来，以其快速、特异、高敏感性及高通量等优点而广泛应用于不同领域。但由于传统的芯片技术采用的是荧光素标记，如Cy3／Cy5荧光染料及量子点荧光标记等，这些标记方法的结果判定均需要依赖昂贵的荧光扫描仪，从而限制了芯片技术在临床上大规模的推广应用。
- 赵玉佳文心田马锐杨国淋滑翔谨瑾黄小波曹三杰文翼平伍锐
- 关键词：病原学可视化荧光素标记芯片技术荧光标记
- 同步共检五种猪繁殖障碍性疫病可视化基因芯片的建立与初步应用
- 猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV)、...
- 赵玉佳
- 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒猪伪狂犬病毒
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌potD基因缺失株的构建及其部分生物学特性被引量：7
- 2016年
- potD基因编码的蛋白质作为转运体蛋白,负责多胺的结合和转运,为细胞的正常生长提供必需因子,已在多种病原菌中鉴定为毒力相关因子,但在副猪嗜血杆菌中的作用还不清楚。利用自然转化法构建potD缺失株SC1401ΔpotD::kan,再比较亲本株和缺失株的生长特性、自凝集活性、生物被膜形成能力、抗血清杀菌能力以及对小鼠的致病力。结果显示potD基因的缺失不影响副猪嗜血杆菌的生长、自凝集活性和生物被膜形成能力,但导致该菌的抗血清杀菌能力和对小鼠的致病力显著降低。以上结果表明potD基因可能与副猪嗜血杆菌的毒力相关。
- 谨瑾张禄滑文心田李英代科周鹏赵玉佳曹三杰黄小波伍锐赵勤文翼平
- 关键词：副猪嗜血杆菌毒力
