杨晖
- 作品数：7 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人偏肺病毒胞吞入胞时间的研究
- 2018年
- 病毒入胞是病毒入侵的第一步。本研究前期已经率先发现人偏肺病毒存在胞吞的入胞方式。病毒的胞吞过程需要经历粘附,胞吞体和膜融合的过程。病毒入胞是病毒感染的第一个关键步骤,因此如果可以找到人偏肺病毒病毒胞吞入胞发生的关键时间段,不仅对于其入胞机制的研究,还有抗病毒策略的设计都大有帮助。本研究在研究前期基础上,通过全内反射荧光显微技术、激光共聚焦技术、R18/DiOC双波长成像技术等形态学的观测方式建立了一套观测病毒入胞时间段的方法。通过这套方法发现人偏肺病毒入胞的时间主要集中在感染后的前15 min。为了进一步验证入胞的关键时间段,本研究利用离心可以增强病毒感染的方法,验证了感染前15 min确实是人偏肺病毒入胞的关键时间段。本研究通过形态学观测的方法并验证发现人偏肺病毒入胞主要发生在感染后的前15 min,因此本研究将为今后人偏肺病毒入胞机制的阐明,抗病毒策略设计等提供关键信息,从而为疫苗和抗病毒药物研发提供理论基础。
- 何浩杨晖谭彬陈素花赵耀
- 关键词：人偏肺病毒
- 辛伐他汀预处理对人偏肺病毒感染的预防作用及相关机制被引量：1
- 2020年
- 目的探讨辛伐他汀预处理对人偏肺病毒(hMPV)感染的作用及相关机制。方法体外实验使用人支气管上皮细胞16HBE,体内实验使用BALB/c小鼠,均随机分为对照组、辛伐他汀组、hMPV组及hMPV+辛伐他汀组,各组经相应处理后,显微镜观察病毒荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测病毒滴度及自噬相关基因重组人自体吞噬相关蛋白5(ATG5)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA的表达,Western blotting检测自噬相关蛋白ATG5、Beclin1、LC3以及丝氨酸/苏氨酸激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路蛋白表达情况。结果在体外实验中,hMPV+辛伐他汀组的病毒直接及间接荧光表达以及病毒滴度(0.260±0.018)均低于hMPV组(1.241±0.030),但自噬相关基因ATG5(7.31±0.15)、Beclin1(8.67±0.88)、LC3(6.55±0.30)的mRNA表达水平均高于对照组[分别为(1.00±0.06)、(1.00±0.05)、(1.10±0.06)];hMPV+辛伐他汀组自噬相关基因的mRNA及蛋白水平表达最高,差异均有统计学意义(P<0.05);hMPV组及hMPV+辛伐他汀组的AKT/mTOR通路被抑制。在体内实验中,hMPV+辛伐他汀组的肺组织病毒滴度(0.75±0.26)以及肺组织研磨上清接种于Vero E6中的病毒滴度(0.42±0.17)均低于hMPV组(分别为2.46±0.53及1.80±0.40),ATG5(3.89±0.42)、Beclin1(3.13±0.26)、LC3(3.56±0.22)mRNA及蛋白表达水平高于对照组及hMPV组,差异均有统计学意义(P<0.05),且AKT/mTOR通路被抑制,肺组织HE染色显示hMPV组有炎症反应,辛伐他汀预处理能减弱炎症反应。结论辛伐他汀预处理可减少hMPV感染,该过程有自噬参与且与AKT/mTOR通路相关。
- 张盼吴婷婷陈素花杨晖赵耀
- 关键词：辛伐他汀人偏肺病毒自噬
- Netrin⁃1对T⁃ALL细胞中VEGFA表达的影响及相关机制研究
- 2022年
- 目的:探讨Netrin⁃1对急性T淋巴细胞白血病(T Cell Acute Lymphoblastic Leukemia,T⁃ALL)细胞中VEGFA水平的影响及可能的作用机制。方法:采用ELISA法检测10例T⁃ALL患儿和23例非恶性血液系统疾病患儿骨髓中Netrin⁃1、VEGFA的水平并进行比较,分析疾病组和对照组患儿骨髓中Netrin⁃1与VEGFA水平的相关性。体外培养T⁃ALL细胞株Jurkat、Molt⁃4,用不同浓度的Netrin⁃1(0,25,50,100 ng/ml)处理细胞24 h后,qRT⁃PCR及Western blot检测不同浓度下各细胞中VEGFA的表达量;qRT⁃PCR检测两种细胞中Netrin⁃1受体的表达,并采用co⁃IP检测Netrin⁃1与T⁃ALL细胞中受体的结合;Western blot检测各组细胞中Akt-mTOR通路中关键蛋白的磷酸化水平。使用Akt/mTOR抑制剂与Netrin⁃1(100 ng/ml)联合处理T⁃ALL细胞后,采用Western blot检测各组细胞中VEGFA的表达量以及Akt/mTOR通路中关键分子的磷酸化水平。结果:T⁃ALL患儿骨髓中Netrin⁃1及VEGFA表达水平显著高于对照组(P<0.05),且在T⁃ALL患者中两者表达水平呈线性相关(r2=0.974)。随着Netrin⁃1浓度的升高,VEGFA的表达水平也升高(P<0.05)。当Netrin⁃1浓度为100 ng/ml时,Netrin⁃1与Integrin⁃β4受体结合。Netrin⁃1浓度为100 ng/ml处理细胞24 h后,Akt、mTOR通路关键分子的磷酸化水平均提高;当Netrin⁃1(100 ng/ml)与Akt抑制剂联合处理T⁃ALL细胞后,VEGFA的表达量下降,Akt、mTOR的磷酸化水平也下降;而与mTOR抑制剂联合处理细胞后,Akt的磷酸化水平升高,mTOR的磷酸化水平降低,VEGFA的表达量也下降。结论:T⁃ALL患儿骨髓中Netrin⁃1及VEGFA表达量存在异常且两者存在线性关系;Netrin⁃1通过Integrin⁃β4受体,激活Akt/mTOR通路诱导T⁃ALL细胞表达VEGFA。
- 朱瑶刘海燕相燕杨晖姚新原安曦洲张凯楠黄兰梁绍燕于洁
- 关键词：血管内皮生长因子AAKT/MTOR急性T淋巴细胞白血病
- 人偏肺病毒通过胞吞途径进入宿主细胞
- 杨晖何浩谭彬赵晓东赵耀
- 人偏肺病毒通过活化EGFR促进其入胞的机制研究被引量：1
- 2020年
- 研究发现人偏肺病毒入胞过程有脂筏的参与,而EGFR是定位于胞膜脂筏上的一种跨膜糖蛋白,在多种病毒的感染中发挥重要作用,该文主要探索表皮生长因子受体(EGFR)在人偏肺病毒(hMPV)感染中的作用及其相关机制。利用人支气管上皮细胞16HBE,用Western blot检测细胞感染hMPV特定时间后EGFR的活化情况。使用EGFR的激活剂和抑制剂改变EGFR的表达和活化水平后再感染hMPV,实时荧光定量PCR检测病毒滴度的变化。结果显示,hMPV入胞5 min就可观察到EGFR磷酸化水平明显增高,15 min时达到最大值。活化剂预先激活EGFR可以促进病毒入胞,而抑制EGFR则可降低病毒的滴度。该研究阐述了hMPV入胞可以激活EGFR,且EGFR的活化会促进病毒入胞。
- 吴婷婷张盼李智宇杨晖赵耀
- 关键词：人偏肺病毒表皮生长因子受体
- 辛伐他汀抑制重组人偏肺病毒复制的自噬作用机制研究被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)感染后辛伐他汀是否可以抑制病毒复制。方法:体外试验,hMPV感染16HBE细胞(人支气管上皮样细胞)后用辛伐他汀试剂处理,qPCR和Western blot检测病毒滴度和自噬的强弱以及相关通路表达水平;体内试验,利用辛伐他汀灌胃处理被hMPV感染的BALB/c小鼠,肺组织切片观察病理情况,提取肺组织蛋白和RNA检测病毒载量的变化、自噬发生情况以及相关通路的表达。结果:体外试验,辛伐他汀干预组病毒滴度降低,自噬水平高于病毒组;辛伐他汀干预组AKT/mTOR通路被抑制,使用通路特异性抑制剂雷帕霉素处理后进一步验证了通路的准确性。体内试验,辛伐他汀干预组病毒滴度低于病毒组,但自噬表达水平两组无明显差异,辛伐他汀干预组AKT/mTOR通路下调;HE染色病毒组病理改变明显,辛伐他汀干预后病理情况改善。结论:辛伐他汀在人偏肺病毒感染后可以抑制其复制,该过程与AKT/mTOR通路诱导的自噬反应相关。
- 张盼陈素花杨晖吴婷婷赵耀
- 关键词：人偏肺病毒辛伐他汀自噬AKT/MTOR
- 人偏肺病毒通过胞吞途径进入宿主细胞
- 杨晖何浩谭彬赵晓东赵耀
